冬虫夏草活性部分的分离方法和医疗用途技术

本发明专利技术是有关冬虫夏草的一种活性部份的分离方法，其经由将冬虫夏草的子实体部份烘干、研碎，萃取，浓缩，氧化硅凝胶管柱层析处理分离出活性部份，其特征为具有明显的对血小板活化因子诱发血小板凝集作用的抑制活性。将该活性部份用氧化硅凝胶管柱层析以具有不同溶剂组成的洗提剂分离并经重结晶纯化而得一活性化合物。本发明专利技术的医疗用途，是可抑制血小板活化因子诱发血小板凝集，改善气喘症后期反应的肺功能。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是有关一种药物组分的分离方法和医疗用途，尤其是一种冬虫夏草的活性部份及活性化合物的分离方法和医疗用途。近年来，药理学研究证实，一种寄生于鳞翅目昆虫的幼虫，而长出子座的麦角菌科冬虫夏草真菌，其活性与药理作用是多方面的，包括1．呼吸系统冬虫夏草抽提物能明显扩张离体天竺鼠支气管平滑肌而有平喘作用，有提高小鼠常压下耐缺氧的能力，能直接作用松弛支气管壁，对氯化镉雾化吸入引起的肺气肿有防治效果；呈类似雄性激素作用，与保护气管上皮及增强呼吸道抗损伤能力有关。2．肝脏冬虫夏草提取物能提高巨噬细胞吞噬能力及肝脏血流量和提高肝组织胶原酶活性，在治疗肝炎后的肝硬化，有抗肝纤维化的作用。3．免疫系统冬虫夏草抽提液可提高正常人及白血病自然杀手细胞活性，促进淋巴球细胞表面CD16抗原的表现(提高与K562细胞的结合率)，促进细胞性免疫，提高Th/Ts比值，减少因使用类固醇及环磷酰胺造成的免疫抑制作用。4．心血管系统冬虫夏草抽提液可提高天竺鼠心脏对哇巴因中毒的耐受量及使麻醉的大鼠和天竺鼠心率减慢。且冬虫夏草也有抗缺氧、抑制脑单胺氧化酶的作用，松弛血管平滑肌及扩张血管的活性作用。然而上述药理作用都未采用完全纯化的冬虫夏草活性成份进行，且有关改善肺功能及临床症状的研究，也未曾采用气喘症的动物模式进行。气喘症临床上是以阵发性呼气性喘呜表现的慢性呼吸道阻塞疾病，患本症，不予以适当治疗会因其并发症而增加死亡率及发病率，世界各国气喘病的死亡率均有逐渐增加的趋势。迄今除了气管扩张剂及副肾皮质素可暂时改善支气管收缩外，尚无证实有任何结构的药剂可改善支气管及肺部慢性炎症变化及肺功能。气喘症是多因子参与的一种疾病，患者本身具有过敏体质，当患者因吸入过敏原等因素被过敏原敏感化后，其体内的B细胞就被活化产生专一性免疫球蛋白E抗体，在呼吸道内的上皮细胞层及粘膜下层含有大量的肥胖细胞，肥胖细胞的细胞表面具有高亲和力的免疫球蛋白E受体，当与专一性免疫球蛋白E抗体结合即处于被敏感化状态；一旦过敏原再次侵入与两个连结于肥胖细胞表面所含免疫球蛋白E受体的免疫球蛋白E抗体交叉连结地结合后，信息即传入肥胖细胞，一方面细胞膜制造并释出血小板活化因子，白烯三素等，二方面释出细胞质内包括组织胺、蛋白酶及趋化因子的颗粒，因此一方面产生立即性的支气管收缩，二方面吸引来大量炎症细胞，前者可用支气管扩张剂对抗，但后者则造成大量的单核细胞，嗜酸性和嗜中性白血球浸润，并放出大量细胞激素、生长因子、蛋白酶等，使平滑肌收缩、血管渗透性增加、微血管血浆液渗出、呼吸道分泌物产生及表皮和基底膜细胞的损伤剥落，而造成支气管无法恢复的破坏，使肺功能逐渐降低。故后者的炎症反应是造成气喘症并发症及死亡的主要原因。而在后者中具有最强且最持久的嗜酸性及嗜中性白血球浸润的作用的是血小板活化因子，其作用时间可长达四周，且有自体增幅作用，即经由血小板活化因子吸引来的嗜酸性及嗜中性白血球，又再释出血小板活化因子而吸收更多的嗜酸性及嗜中性白血球来造成支气管的破坏，致使肺损伤。过去已建立离体抑制血小板活化因子引起兔子血小板凝集的离体定模式，筛选可以抑制血小板活化因子活性的成份，并建立以血小板活化因子及卵白蛋白诱发气喘的棕色挪威鼠动物模式。利用抑制离体的抑制血小板活化因子引起兔子血小板凝集的离体测定模式，急性毒性试验及气喘症状的棕色挪威鼠动物模式，从冬虫夏草找出可改善诱发气喘棕色挪威鼠动物模式的肺功能，强化Th1细胞反应，抑制氧化氮合成酶基因表现，以应用于治疗气喘的活性部分及一活性化合物。综合所述，本专利技术的目的提供一种可抑制血小板活化因子诱发血小板凝集，改善肺功能及组织学和免疫学的变化的冬虫夏草的活性部分和活性化合物的分离方法和医疗用途。本专利技术的第一目的是提出一种从冬虫夏草分离出具有改善肺功能活性的活性部分的方法。本专利技术的第二目的是提供一种从冬虫夏草分离出具有改善肺功能活性的活性化合物的方法。本专利技术的第三目的是提出一种经由上述方法从冬虫夏草分离出的具有改善肺功能的活性部份。本专利技术的第四目的是提出一种经由上述方法从冬虫夏草分离出的具有改善肺功能的活性化合物。本专利技术的第五目的是提供上述活性部份和活性化合物的医疗用途。本专利技术的目的是这样实现的本专利技术的冬虫夏草活性部分和活性化合物的分离方法，主要包括烘干、研碎、抽提、浓缩、层析处理、鉴定等部分。其中包括将冬虫夏草的子实体部分烘干、研碎，以有机溶剂抽提，将抽提液浓缩，以及进行氧化硅凝胶管柱层析处理配合离体控制血小板活化因子诱发兔子血小板凝集活性鉴定而鉴定出该活性部分；其中抽提溶剂为甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷；其中氧化硅凝胶管柱层析是用正乙烷，乙酸乙酯、甲醇三种溶剂以不同比例混合成不同极性的冲提溶剂或者用二氯甲烷-甲醇(100∶1至1∶1的体积比)作为冲提溶剂进行；该种分离方法分离出的活性化合物是(24R)--麦角甾--7,22--二烯--3β,5α,6β--三醇；该种分离方法分离出的活性部分和活性化合物的医疗用途是，可抑制血小板活化因子诱发兔子血小板凝结，并可预防性及治疗性改善气喘后期反应的阻塞性肺功能恶化，强化THL细胞激素表现，降低iNOS基因表现，改善肺组织学变化。本说明的上述及其它目的，特征与优点可由下面的详细说明参照附图而明白，其中附图说明图1是根据本专利技术自冬虫夏草子座抽取活性部分及活性化合物的方法流程图；图2是本专利技术活性化合物F8的氢核磁共振(1H-NMR)光谱图；图3是本专利技术活性化合物F8的乙酰化产物的1H-NMR光谱图；图4是图3中所示1H-NMR光谱内δ0.4PPM至δ2.2PPM范围的扩大图；图5是本专利技术活性化合物F8的13C-NMR光谱；图6是本专利技术棕色挪威鼠肺组织丙种干扰素基因表现的图示；N正常未处理的对照组；OA以卵白蛋白诱发气喘；OA+F4在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F4(每组各6只)；图7是本专利技术棕色挪威鼠肺组织Th2基因表现的图示；N正常未处理的对照组；OA以卵白蛋白诱发气喘；OA+F4在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F4(每组各6只)；图8是本专利技术棕色挪威鼠肺组织丙种干扰素基因表现的图示；N正常未处理的对照组；OA以卵白蛋白诱发气喘；OA+F4在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F4(每组各6只)；图9是本专利技术棕色挪威鼠肺组织Th2基因表现的图示；N正常未处理的对照组；OA以卵白蛋白诱发气喘；OA+F4在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F4(每组各6只)；图10是本专利技术棕色挪威鼠肺组织丙种干扰素基因表现的图示；N正常未处理的对照组；OA以卵白蛋白诱发气喘；OA+F8在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F8(每组各6只)；图11是本专利技术棕色挪威鼠肺组织Th2基因表现的图示；N正常未处理的对照组；OA以卵白蛋白诱发气喘；OA+F8在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F8(每组各6只)；图12是本专利技术棕色挪威鼠肺组织丙种干扰素基因表现的图示；N正常未处理的对照组；OA以卵白蛋白诱发气喘；OA+F8在卵白蛋白诱发气喘时并预防性F8(每组各6只)；图13是本专利技术棕色挪威鼠肺组织Th2基因表现的图示；N正常未处理的对照组；OA以卵白蛋白诱发气喘；OA+F8在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F8(每组各6只)；图14是本专利技术棕色挪威鼠肺组织氧化氮合成本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种冬虫夏草活性部分的分离方法，主要包括烘干、研碎、抽提、浓缩、层析处理、鉴定等部分；其特征在于：其中先将冬虫夏草的子实体部份烘干，研碎，然后以有机溶剂抽提，将抽提液浓缩，再进行氧化硅凝胶管柱层析处理，鉴定其活性部分和分离出活性部分。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林清渊，
申请(专利权)人：林清渊，
类型：发明
国别省市：71[中国|台湾]