一种将TIGA1作为靶点来增强谷氨酰胺酶抑制剂抗宫颈癌活性的方法技术

本发明专利技术公开了一种将TIGA1作为靶点来增强谷氨酰胺酶抑制剂抗宫颈癌活性的方法。本发明专利技术提供了抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达的物质在制备治疗肿瘤的产品中的应用；或，抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达的物质在制备抑制肿瘤细胞生长的产品中的应用。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术以TIGA1基因为有效靶点，结合RNA干扰技术和谷氨酰胺酶抑制剂，显著降低了癌细胞的抗药性并提高了谷氨酰胺酶抑制剂的抗癌活性，可用于治疗宫颈癌。将此靶点与谷氨酰胺酶抑制剂等化疗药物结合或许是提高化疗药物疗效和降低宫颈癌死亡率的手段，大大提高了此抑制剂抗肿瘤的效果。

A method for enhancing the activity of a transglutaminase inhibitor against cervical cancer by using TIGA1 as a target

The present invention discloses a method for enhancing the activity of a transglutaminase inhibitor against cervical cancer by using TIGA1 as a target. The present invention provides for inhibiting or reducing the application of TIGA1 material expression in tumor cells for the treatment of tumor in the product; or, to inhibit or decrease the expression of TIGA1 material application in tumor cells in preparation for inhibiting the growth of tumor cells in the product. The experiment, the invention is based on TIGA1 as target, combined with RNA interference and glutaminase inhibitor, significantly reduced cancer cell resistance and improve the anticancer activity of glutaminase inhibitor, can be used for the treatment of cervical cancer. Combining this target with chemotherapy drugs such as transglutaminase inhibitors may be a good way to improve the efficacy of chemotherapy drugs and reduce the mortality of cervical cancer, and greatly improve the anti-tumor effect of this inhibitor.

【技术实现步骤摘要】
一种将TIGA1作为靶点来增强谷氨酰胺酶抑制剂抗宫颈癌活性的方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种将TIGA1(TranscriptInducedbyGrowthArrest1)作为靶点来增强谷氨酰胺酶抑制剂抗癌活性以有效治疗宫颈癌等癌症的方法。
技术介绍
宫颈癌通常是一种以化疗药物难以治疗的疾病。绝大多数宫颈癌含有免疫人类乳头瘤病毒(HPV)抗原。世界卫生组织的统计资料表明，宫颈癌在全球妇女癌症死亡率中位居第二,全球每年约有46.6万妇女被诊断为宫颈癌,约有28.8万患者死亡。我国每年宫颈癌的新增病例约13.5万,死亡病例约有3-5万人。癌细胞新陈代谢的碳源和氮源主要来源于葡萄糖和谷氨酰胺。即使在有氧气条件下，癌细胞内的代谢主要是葡萄糖酵解而不是氧化磷酸化，这种有氧糖酵解称为Warburg效应，线粒体缺陷能加重此效应。Warburg效应可导致葡萄糖摄取增加，糖酵解加速和乳酸产生，通过提供过剩代谢底物以及减少线粒体内活性氧的产生以提供有利于癌细胞生长的条件，是癌细胞生长和增殖以及抗药性的基础。当葡萄糖缺乏时，细胞则可以通过代偿性增加谷氨酰胺代谢来维持细胞的基本新陈代谢。随着近年来新型谷氨酰胺酶抑制剂968和BPTES的发现，谷氨酰胺代谢成为癌症靶向治疗的一大热点。最新的谷氨酰胺酶抑制剂CB-839是BPTES的同源物，已于2014年开始临床一期试验。然而，谷氨酰胺酶抑制剂有较大的副作用且其抗肿瘤效果相对有限，其原因与癌细胞Warburg效应所产生的抗药性有关。因此，查明Warburg效应抗药性的原因以及找到与此相关的靶点是谷氨酰胺酶抑制剂等化疗药物有效治疗癌症的关键所在。TIGA1是由位于染色体5q22.2区域内的EPB41l4A-AS1基因编码的一种小蛋白。此区域内DNA片段丢失时常发生，因此与肿瘤密切相关。此区域内EPB41l4A-AS1的反义长非编码RNA(lncRNA)叫做EPB41l4A-AS2，与肿瘤细胞的生长密切相关。尽管EPB41l4A-AS1也被认为是一种长非编码RNA，它依然可以编码有122个氨基酸的蛋白TIGA1,这种蛋白是大肠杆菌中氰酸酶的同源物，位于线粒体膜上，但其功能并不清楚。有报道提示TIGA1可能与维持细胞周期过程中无机离子的转运和代谢有关。的确，体外过表达TIGA1可抑制肿瘤细胞的增殖和生长。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达和/或活性的物质的用途。本专利技术提供了抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达和/或活性的物质在制备治疗肿瘤的产品中的应用；或，抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达和/或活性的物质在制备抑制肿瘤细胞生长的产品中的应用。本专利技术的第二个目的是提供抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达和/或活性的物质的用途。本专利技术提供了抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达和/或活性的物质在制备促进谷氨酰胺酶抑制剂治疗或抑制肿瘤产品中的应用；或TIGA1作为靶点在促进谷氨酰胺酶抑制剂治疗或抑制肿瘤中应用。上述应用中，所述抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达和/或活性的物质为如下1)或2)：1)干扰肿瘤细胞中TIGA1表达的双链siRNA；2)表达所述双链siRNA的重组载体。上述应用中，所述双链siRNA的正义链为序列1所示的核苷酸，反义链为序列2所示的核苷酸；且所述双链siRNA上的U和C碱基均采用2′甲氧基修饰或2′氟代修饰。。上述应用中，所述肿瘤为宫颈癌；或，所述肿瘤细胞为Hela细胞。本专利技术第三个目的是提供一种产品。本专利技术提供的产品，包括上述抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达和/或活性的物质和谷氨酰胺酶抑制剂。上述产品中，所述产品具有如下1)-3)中至少一种功能：1)治疗肿瘤；2)抑制肿瘤细胞生长；3)促进谷氨酰胺酶抑制剂治疗或抑制肿瘤。上述产品中，所述谷氨酰胺酶抑制剂为化合物968。上述产品中，所述产品为试剂盒或单独包装的药物组合物或混合包装的药物组合物。上述产品中，所述肿瘤为宫颈癌；或，所述肿瘤细胞为Hela细胞。本专利技术提供一种通过RNA干扰将TIGA1作为靶点来增强谷氨酰胺酶抑制剂抗癌活性以有效治疗宫颈癌等癌症的应用。当TIGA1基因表达量通过RNA干扰技术被敲低后，可阻断葡萄糖来源的丙酮酸进入三羧酸循环，从而促发谷氨酰胺代偿性增加。谷氨酰胺酶抑制剂如化合物968可抑制谷氨酰胺代谢而不能影响糖酵解，因此抑制肿瘤细胞生长作用较弱。因此，在TIGA1基因被敲低的同时用谷氨酰胺酶抑制剂处理癌细胞，可同时阻断糖代谢和谷氨酰胺代谢，造成细胞营养和能量匮乏，导致生长显著减慢，达到治疗癌症的目的。本专利技术的实验证明，本专利技术以TIGA1基因为有效靶点，结合RNA干扰技术和谷氨酰胺酶抑制剂，显著降低了癌细胞的抗药性并提高了谷氨酰胺酶抑制剂的抗癌活性，可用于治疗宫颈癌。将此靶点与谷氨酰胺酶抑制剂等化疗药物结合或许是提高化疗药物疗效和降低宫颈癌死亡率的手段，大大提高了此抑制剂抗肿瘤的效果。附图说明图1为利用实时定量PCR检测Hela细胞内瞬时转染TIGA1的特异性siRNA后TIGA1的mRNA的表达量。图2为利用Westernblot方法检测Hela细胞内瞬时转染TIGA1的特异性siRNA后TIGA1的蛋白表达量。图3为稳定表达shTIGA1的Hela细胞系与其对应的对照的细胞系的软琼脂集落形成实验。图4为裸鼠分别皮下注射表达shTIGA1的稳定Hela细胞与其相应的对照细胞后,用化合物968腹腔给药并测量肿瘤的体积。图5为TIGA1调低组与对照组在用谷氨酰胺酶抑制剂治疗后的肿瘤大小的代表图片。图6为对图5中两组肿瘤进行称重后比较其重量差异。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、沉默肿瘤细胞中TIGA1表达在长期的实验中发现TIGA1基因与癌细胞Warburg效应以及能量代谢有密切关系，同时发现谷氨酰胺酶抑制剂作为抗肿瘤药物疗效并不理想，而这种药物低效性可能与Warburg效应有关，因此，研究TIGA1作为靶点是否可以提高谷氨酰胺酶抑制剂抗肿瘤的效果。一、siRNA瞬时转染Hela细胞1、用于干扰TIGA1基因表达的2个siRNAsiTIGA1-1：正义链5’-GGAUGUCCUUGGUGAGGAUTT-3’(序列1),反义链5’-AUCCUCACCAAGGACAUCCTT-3’(序列2)；siTIGA1-2:正义链5’-GGCCUUACCGUAUAACUGATT-3’反义链5’-UCAGUUAUACGGUAAGGCCTT-3’。siRNA双链上在U和C碱基上采用2′甲氧基；将上述siTIGA1-1和siTIGA1-2的正义链和反义链退火，得到siTIGA1-1和siTIGA1-2；利用Lipofectamine3000转染试剂将两条TIGA1的特异性siTIGA1-1和siTIGA1-2分别瞬时转染Hela细胞系，48小时后。2、基因表达分析利用RNAisoplus(TAKARA)提取两条siRNA分别瞬时转染Hela细胞系48小时后的总RNA，用ReverTraAceqPCRRT试剂盒(TOYOBO)将总RNA进行逆转录成cDNA。定本文档来自技高网...

【技术保护点】
抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达和/或活性的物质在制备治疗肿瘤的产品中的应用；或，抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达和/或活性的物质在制备抑制肿瘤细胞生长的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达和/或活性的物质在制备治疗肿瘤的产品中的应用；或，抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达和/或活性的物质在制备抑制肿瘤细胞生长的产品中的应用。2.抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达和/或活性的物质在制备促进谷氨酰胺酶抑制剂治疗或抑制肿瘤产品中的应用；或TIGA1作为靶点在促进谷氨酰胺酶抑制剂治疗或抑制肿瘤中应用。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述抑制或降低肿瘤细胞中TIGA1表达和/或活性的物质为如下1)或2)：1)干扰肿瘤细胞中TIGA1表达的双链siRNA；2)表达所述双链siRNA的重组载体。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述双链siRNA的正义链为序列1所示的核苷酸，反义链为序列2所示的核苷酸；且所述双链siRNA上的U和C碱基均采...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙兵，张雅鸥，廖梅坚，廖卫捷，张世宽，张佩琢，卢锦华，
申请(专利权)人：清华大学深圳研究生院，苏州吉玛基因股份有限公司，深圳南粤药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44