本发明专利技术是从黄果茄成熟新鲜果实中，通过有机溶剂粗提取、用硅胶柱层析和ＨＰＬＣ分离得到２２－亚氨基－３－［４′－（６″－脱氧－α－Ｌ－甘露糖苷）－β－Ｄ－葡萄糖苷］－５－脱氢螺甾烷（简称提取物Ａ）的纯品；经电子轰击质谱（ＥＩ－ＭＳ）测定Ａ的分子量７２２，经高能分解质谱（快原子轰击质谱ＦＡＢ－ＭＳ）测定Ａ的分子式为Ｃ↓［３９］Ｈ↓［６４］Ｏ↓［１１］Ｎ，经高分能氢谱核磁共振和碳谱核磁共振［［１３］↑Ｃ－ＮＭＲ（１２５ＭＨ↓［２］）］测定Ａ的甲基和亚甲基型、碳氢结合、碳数及碳级别，又经异核化学位移相关谱和同核位移相关谱（［１３］↑Ｃ－１ＨＣＯＳＹ）测定确定了该物的碳结合数，综合上述测定结果，并参考有关文献质谱得到该物的结构式如下；采用浸泡法测定Ａ的对湖北钉螺成螺灭杀活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及黄果茄果实中一种提取物22-亚氨基-3--5-脱氢螺甾烷(22-imido-3--5-dehydrospirostan.It agrees with the namingprinciple of IUPAC简称提取物A)和提取方法及应用。
技术介绍
日本血吸虫病是严重危害我国人民身体健康的一种寄生虫病，灭杀日本血吸虫的中间宿主湖北钉螺，是控制和阻断日本血吸虫病传播的重要手段之一。目前，国内外常用的灭螺方法仍以化学灭螺为主。WHO推荐使用的氯硝柳胺存在价格昂贵，钉螺灭杀效果低等弊病，因此，寻求灭螺效率高、选择性强，能抑制钉螺逃离、环境相容、价格低廉的生物灭螺剂或仿生合成药物是灭螺新药物开发研究的热点。黄果茄为茄科(Solanaceae)植物，又名黄水茄，野茄果、大苦果等，生于荒地及河谷两岸较干旱处，分布于福建、广西、云南等地。全草的醇提取物及生物碱皂甙部分有强心作用，有消瘀止痛等功能。国内外近年来对其提取物的植物成分与价格研究不多，作为灭螺新药物创制的先导化合物或母体研究尚未见其它报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供黄果茄果实中灭杀钉螺化合物22-亚氨基-3--5-脱氢螺甾烷(简称提取物A)的提取方法及化学结构剖析和应用，是从黄果茄果实中提取活性物质-A，解析A的化学结构，并测定A灭杀日本血吸虫(Schistosoma japonicum)的中间宿主湖北钉螺(Oncomelaniabupensis)的活性。22-亚氨基-3--5-脱氢螺甾烷的提取方法其步骤顺序为(1)新鲜黄果茄果实取掉果蒂后粉碎为组织匀浆状，(2)加甲醇搅拌提取，(3)分离去渣，收集上清液，蒸馏去甲醇，得到甲醇提取物的水相，(4)甲醇提取物的水相加入正丁醇萃取，正丁醇萃取相蒸馏去正丁醇，得含22-亚氨基-3--5-脱氢螺甾烷5.4wt％的溶液，(5)用55wt％-80wt％甲醇为流动相，在硅胶柱层析分离，取分离7组中的组分3，(6)用55wt％-80wt％甲醇为流动相，采用高压液相色谱分离，取分2组分中的第2组分，结晶即得纯提取物22-亚氨基-3--5-脱氢螺甾烷。黄果茄果实中A的提取纯化操作是(参见流程图1)新鲜果实取掉果蒂后置于粉碎器中破碎，使材料成为组织匀浆状后移至烧杯中加甲醇(MeOH)水溶液，用磁力搅拌器连续搅拌2小时，再浸泡24小时使组织中的物质充分溶出后，再用双层细纱布过滤，取滤液离心(3500rpm转/分钟)得到MeOH相上清液，减压蒸馏去MeOH，得到MeOH提取物的水相。再用正丁醇(n-BuOH)萃取，减压蒸馏除去n-BuOH，得到富含A的n-BuOH相萃取物，其中A的含量5.4wt％，通过硅胶柱层析分离(流动相55wt％-80wt％MeOH，分离柱3cm×60cm，流速1ml/min)得到7个组分。经灭螺活性测试，取活性最强的组分3，减压浓缩，再用高压液相色谱(HPLC)分离(流动相55wt％-80wt％MeOH，分离柱10cm×250cm，流速1ml/min)得到2个组分，经灭螺活性测试，取活性最强的组分2，结晶即得到A。A的化学结构剖析将结晶纯品样经电子轰击质谱(EI-MS)测定A的分子量是722(结果见图2)，经高分解能质谱(快原子轰击质谱FAB-MS)测定A的分子式为C39H64O11N。经高分能氢谱核磁共振测定(结果如表1)，碳谱核磁共振测定(结果见表2)，确定了A的甲基、亚甲基型及碳氢结合、碳数及碳级，又经异核化学位移相关谱和同核位移相关谱测定确定了该物的碳结合数。综合上述测定结果，并参考有关文献质谱得到A的化学结构式。A的化学结构式为 A的灭螺活性测定黄果茄新鲜果实材料经破碎、70％MeOH提取、n-BuOH萃取物(A含量5.4％)，用蒸馏水配制成0.0033g％～0.33g％(33ppm～3300ppm)水剂用来测定A对湖北钉螺成螺灭杀效果。结果说明钉螺死亡率均为100％。附图说明图1是从黄果茄果实中提取纯化A的流程图。图2是A的E1-MS质谱。具体实施例方式实施例1黄果茄新鲜果实材料经破碎，利用70％MeOH提取、n-BuOH萃取富含A(5.4％)活性物，加入蒸馏水分别配制成使A浓度为0.0033g％(33ppm)、0.033g％(330ppm)、0.33g％(3300ppm)水剂。实验采用浸泡法，温度控制在25±1℃。取活钉螺每60只为一组装入尼龙网袋中，分别投入装有上述不同浓度A的n-BuOH相水剂的烧杯中，另设清水对照。重复3次。浸泡24小时后取出，用清水冲洗数次，然后置于清水中饲养48小时，观察其死亡情况，统计钉螺死亡率。结果列如表3。结果说明0.0033g％～0.33g％(33ppm～3300ppm)的黄果茄果实n-BuOH相水剂能有效地灭杀钉螺，三种黄果茄果实n-BuOH相水剂浓度的钉螺死亡率均为100％。表1A的氢谱核磁共振测定结果 表2A的碳谱核磁共振测定结果 表3不同浓度黄果茄果实n-BuOH相水剂的灭螺效果 权利要求1.一种从黄果茄果实中的提取物，其分子式为C39H64O11N，分子量722，命名为22-亚氨基-3--5-脱氢螺甾烷，化学结构为2.权利要求所述提取物的提取方法，其特征是步骤顺序为(1)新鲜果实取掉果蒂后粉碎为组织匀浆状，(2)加甲醇搅拌提取，(3)分离去渣，收集上清液，蒸馏去甲醇，得到甲醇提取物的水相，(4)甲醇提取物的水相加入正丁醇萃取，正丁醇萃取相蒸馏去正丁醇，得含22-亚氨基-3--5-脱氢螺甾烷5.4wt％的溶液，(5)用55wt％-80wt％甲醇为流动相，在硅胶柱层析分离，取分离7组中的组分3，(6)用55wt％-80wt％甲醇为流动相，采用高压液相色谱分离，取分2组分中的第2组分，结晶即得纯提取物22-亚氨基-3--5-脱氢螺甾烷。3.如权利要求2所述的提取方法，其特征是所述层析分离条件为分离柱3cm×60cm，流动相流速为1ml/min。4.如权利要求2所述的提取方法，其特征是所述高压液相色谱分离为分离柱10cm×250cm，流动相甲醇流速为0.5ml/min。5.权利要求1所述的提取物的应用，其特征是富含22-亚氨基-3--5-脱氢螺甾烷的正丁醇萃取水相用作为灭杀日本血吸虫(Schistosoma japonicum)的中间宿主湖北钉螺(oncomelania bupensis)的活性成分。6.如权利要求5所述的提取物的应用，其特征是用作灭杀所述湖北钉螺的正丁醇萃取水相浓度为含22-亚氨基-3--5-脱氢螺甾烷33ppm～3300ppm的水剂。全文摘要本专利技术是从黄果茄成熟新鲜果实中，通过有机溶剂粗提取、用硅胶柱层析和HPLC分离得到22－亚氨基－3－－5－脱氢螺甾烷(简称提取物A)的纯品；经电子轰击质谱(EI－MS)测定A的分子量722，经高能分解质谱(快原子轰击质谱FAB－MS)测定A的分子式为C文档编号C07J71/00GK1556112SQ200410012618公开日2004年12月22日 申请日期2004年1月6日 优先权日2004年1月6日专利技术者李文新, 赵利琴, 盛桂莲, 王煜, 冯玉文 申请人:华中师范大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从黄果茄果实中的提取物，其分子式为Ｃ↓［３９］Ｈ↓［６４］Ｏ↓［１１］Ｎ，分子量７２２，命名为２２－亚氨基－３－［４′－（６″－脱氧－α－Ｌ－甘露糖苷）－β－Ｄ－葡萄糖苷］－５－脱氢螺甾烷，化学结构为：＊＊＊。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李文新，赵利琴，盛桂莲，王煜，冯玉文，
申请(专利权)人：华中师范大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]
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