一种20（R）—人参皂苷Rh2的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种以五加科人参属植物茎叶总皂苷或原人参二醇组皂甙为起始材料制备２０（Ｒ）－人参皂苷Ｒｈ↓［２］的方法，该方法包括将所述的植物茎叶总皂苷溶入有机酸或无机酸的水溶液或醇溶液中，进行酸水解反应，然后收集反应物。对所述的反应物可进行硅胶层析和重结晶纯化。所述的酸水解步骤是在３０℃～１００℃和０．０５ＭＰａ～１ＭＰａ下进行。所述的有机酸或无机酸包括甲酸、乙酸、盐酸、硫酸或硝酸。同时，还公开了将２０（Ｒ）－人参皂苷Ｒｈ↓［２］制成药学上所述的药物组合物的方法。本发明专利技术工艺合理，产率高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及20(R)-人参皂苷Rh2的制备方法。
技术介绍
癌症是严重危害人类健康的疾病。据世界卫生组织(WHO)的统计资料表明，全世界癌症每年发病约1000万人，死亡约700万人，已成为仅次于心血管病的人类第二杀手。目前临床应用的抗癌药物多具有较大的毒副作用。因此，研制新的治疗癌症的药物非常迫切，尤其是从中国传统的植物药中寻找安全高效的抗癌活性成分一直是药物研究者关注的热点。20世纪80年代，大量的研究报告表明人参皂苷具有一定的抗肿瘤活性，特别是日本学者北川勋等(药学杂志1983.103；612)从红参中分离出20(S)-人参皂苷Rh2。含量仅为红参的十万分之一，并由小田岛肃夫(药用人参’85，东京共立出版株式会社，199084)进行了体外细胞培养抑瘤试验，结果发现该成分对小鼠肺癌细胞，B16黑色素瘤细胞，大鼠Morris肝癌细胞的增殖具有明显的特异性抑瘤作用，即诱导癌细胞分化逆转作用。从此，国内外众多学者对20(S)-人参皂苷的制取及药理方面进行了广泛深入的研究。研究表明，20(S)-人参皂苷还可诱导HL-60细胞，F9畸形癌细胞的分化，抑制人卵巢癌细胞HT1080人纤维内肿瘤细胞的生长，对S180肉瘤细胞，可阻断S期细胞向正2期移行，造成S期肿瘤细胞的堆积，从而抑制S180肉瘤细胞的增殖，诱导人肝癌细胞SK-HEP-1，C6胶质瘤细胞凋亡。陈英杰等人(中草药1988.19(3)4)从人参茎叶中分离出20(S)-人参皂苷的差向异构体20(R)-人参皂苷，该化合物在浓度0.1μg/ml时就有较强的破坏肿瘤细胞的活性，在2μg/ml时能明显地抑制人体早幼粒白血病HL60。进一步的研究表明(沈阳药学院学报，1999，16(2)152)人参皂苷抗肿瘤活性受C20位构型影响的强弱规律是20(R)-人参皂苷＞20(S)-人参皂苷。然而，不管是20(R)-人参皂苷还是20(S)-人参皂苷在天然人参属植物中含量极低(0.001％～0.006％)，直接提取利用无实际意义。近年来，人们通过努力探索，已成功利用生物酶法或碱性条件下温和水解法，从人参和西洋参茎叶皂甙，人参属植物总皂甙或其原人参二醇组皂甙制得20(S)-人参皂苷Rh2，以上方法可使20(S)-人参皂苷Rh2有较高收率(1.4％～5.6％)，从而使其应用于临床成为可能。但是，从人参属植物总皂甙，茎叶总皂甙或其原人参二醇组皂甙制得20(R)-人参皂苷Rh2尚未见报道。韩国人参烟草研究所公开了一种从人参成分中制备20(R)-人参皂苷Rh2的方法(韩国专利申请公告94-8291)，是首先用酸水解人参皂苷原人参二醇组分，再经乙酰化及水解处理得到20(R&S)-人参皂苷Rg3，然后再用碱性正丁醇溶液进行碱水解得到20(R&S)-人参皂苷，最后经硅酸柱层析分离得到20(R)-人参皂苷Rh2和20(S)-人参皂苷Rh2。需要强调的是，上述方法不利于20(R)-人参皂苷Rh2的工业化生产，其主要缺陷在于首先必须得到原人参二醇组皂甙，增加了该组皂甙的分离纯化的步骤，转化制备中经过了20(R&S)-人参皂苷Rg3的制备、乙酰化、催化水解等繁杂的反应步骤，导致反应产物成分增加，且所得产物为20(R&S)-人参皂苷Rh2，难于得到纯的20(R)-人参皂苷Rh2和提高产率。这是该课题中一个急待解决的技术难题。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的不足和空白，提供一种20(R)-人参皂苷Rh2的制备方法。该法通过新的转化途径，实现从人参属植物总皂甙、茎叶总皂甙或原人参二醇组皂甙中，高产率转化得到较纯的20(R)-人参皂苷Rh2。同时，本专利技术的目的还在于提供含有20(R)-人参皂苷Rh2的药物组合物的制备方法。本专利技术的目的通过下述技术方案予以实现。本专利技术提供了一种以五加科人参属植物茎叶总皂苷或原人参二醇组皂甙为起始材料制备20(R)-人参皂苷Rh2的方法，该方法包括将所述的植物茎叶总皂苷溶入有机酸或无机酸的水溶液或醇溶液中，进行酸水解反应，然后收集反应物。对所述的反应物进一步进行硅胶层析和重结晶纯化；所述的酸水解步骤是在30℃～100℃和0.05Mpa～1MPa下进行的；所述的有机酸或无机酸的浓度为0.01％～80％(w/v)；所述的有机酸或无机酸包括甲酸、乙酸、盐酸、硫酸或硝酸。本专利技术还进一步提供了含有20(R)-人参皂苷Rh2的药物组合物的制备方法，所述的药物组合物的制备方法是选择添加药学上所适用的辅料分别制成胶囊、软胶囊、片剂或注射剂等。具体实施例方式通过下面给出的具体实施例，可以进一步清楚地了解本专利技术。但它们不是对本专利技术的限定。实施例1配制60％的醋酸水溶液100毫升，加入人参二醇组皂苷干粉20克，在0.1兆帕压力下，搅拌加热，在100℃下进行水解反应2小时，反应完成后，用水将反应混合物洗至中性，过滤，滤物在100℃干燥，得水解产物12克。以硅胶柱层析法，洗脱液为氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水＝2∶2∶4∶1(体积比)层析纯化，收集洗脱物于甲醇-水中重结晶，得到20(R)-人参皂苷Rh2的白色结晶体983毫克，收率4.92％。晶体纯度经HPLC法测定为97.6％。经过TLC、MS、13C-NMR、1H-NMR、13C-1HCOSY、1H-1HCOSY、比旋光度及熔点测定，并与20(R)-人参皂苷Rh2的文献数据核实，确认该白色晶体为20(R)-人参皂苷Rh2。实施例2将60毫升冰醋酸加入40毫升95％的乙醇中，加入人参二醇组皂苷干粉20克，在0.1兆帕压力下，搅拌加热，在75℃下进行水解反应1.5小时，反应完成后，趁热倒入400毫升25℃水中稀释，减压回收乙醇。反应物继续用水洗至中性，过滤，滤物在80℃下干燥，得水解产物13.6克。以硅胶柱层析法，洗脱液为氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水＝2∶2∶4∶1(体积比)层析纯化，收集洗脱物于甲醇-水中重结晶，得到20(R)-人参皂苷Rh2的白色结晶体1082毫克，收率7.95％。其纯度经HPLC法测定为95.3％。经TLC、MS、13C-NMR、1H-NMR、13C-1H COSY、1H-1HCOSY、比旋光度及熔点测定，并与20(R)-人参皂苷Rh2的文献数据核实，确认该白色晶体为20(R)-人参皂苷Rh2。实施例3将10毫升36％的盐酸溶入水中，使呈100毫升，加入人参二醇组皂苷干粉20克，在0.1兆帕压力下，搅拌加热，在100℃下进行水解反应1.5小时，反应完成后，用水将反应混合物洗至中性，过滤，滤物在100℃干燥，得水解产物11.4克。以硅胶柱层析法，洗脱液为氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水＝2∶2∶4∶1(体积比)层析纯化，收集洗脱物于甲醇-水中重结晶，得到20(R)-人参皂苷Rh2的白色结晶体869毫克，收率4.35％。其纯度经HPLC法测定为96.2％。经TLC、MS、13C-NMR、1H-NMR、13C-1HCOSY、1H-1HCOSY.比旋光度及熔点测定，并与20(R)-人参皂苷Rh2的文献数据核实，确认该白色晶体为20(R)-人参皂苷Rh2。实施例4配制60％的醋酸水溶液10升，加入人参二醇组皂苷干粉2公斤，在0.1兆帕压力下，搅拌加热，在100℃下进行水本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以五加科人参属植物茎叶总皂苷或原人参二醇组皂甙为起始材料制备２０（Ｒ）－人参皂苷Ｒｈ↓［２］的方法，该方法包括将所述的植物茎叶总皂苷或原人参二醇组皂甙溶入有机酸或无机酸的水溶液或醇溶液中，进行酸水解反应，然后收集反应物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高崇昆，杨晓源，董汛，唐文旭，
申请(专利权)人：云南白药集团天然药物研究院，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]