一种抗肿瘤的联合用药物制造技术

本发明专利技术公开了一种抗肿瘤的联合用药物。该抗肿瘤的联合用药物包括作为活性成分的双膦酸盐类化合物和CIK细胞，所述的双膦酸盐类化合物为临床用药依替膦酸二钠、氯膦酸二钠、帕米膦酸二钠、替鲁膦酸二钠、阿仑膦酸钠、奈立膦酸钠、奥帕膦酸钠、利塞膦酸钠、伊班膦酸钠、英卡膦酸二钠和唑来膦酸中的至少一种。本发明专利技术利用抗肿瘤骨转移的双膦酸盐药物与CIK细胞联合使用，极大提高CIK细胞对肿瘤细胞杀伤能力的方法，使达到相同治疗效果所需的CIK细胞数量大大减少，相比单独CIK细胞生物治疗，可保持其较高的安全性又显著地提高其治疗效果。

An antineoplastic combination drug

The present invention discloses an antineoplastic combination drug. The combined anti-tumor drugs used as active ingredients including bisphosphonates and CIK cells, bisphosphonates for the clinical medication etidronic acid two sodium chloride, two sodium phosphonic acid, pamidronic acid two sodium, tiludronic acid, two sodium alendronate, neridronic acid sodium, Oprah alendronate, risedronate sodium, sodium ibandronate, incadronate sodium and two of at least one kind of phosphonic acid. The invention uses anti tumor bone metastasis and CIK cells combined with bisphosphonate use, greatly improve the method on cytotoxicity of CIK cells to tumor cells, to achieve the same therapeutic effect to CIK cells significantly reduced the number of CIK cells, compared with biological treatment, can maintain its high safety and significantly improve the curative effect.

【技术实现步骤摘要】
一种抗肿瘤的联合用药物
本专利技术属于生物治疗药物领域，特别涉及提供一种抗肿瘤的联合用药物。
技术介绍
癌症的发病率日益增高，据世界卫生组织报道，2012年全球约有1400万新发癌症病例和820万例癌症相关死亡。癌症成为全球发病和死亡的主要原因，并且预计今后二十年新发病例数将增加约70％(WTO，2014年世界癌症报告)。虽然当今人们对癌症的治疗手段越来越多，可使用药物也在增加，但目前大多数癌症仍无法治愈，病人生存期较短。因此，任何新的安全有效的癌症治疗方法或能提高现有治疗方法效果的手段都会对癌症患者的健康具有实际意义。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercells,CIK)是一种在体外扩增培养获得的细胞，由外周血或脐带血等来源的单核细胞经CD3抗体、IFN-γ和IL-2诱导而成(LuP.HandNegrinR.S.AnovelpopulationofexpandedhumanCD3+CD56+cellsderivedfromTcellswithpotentinvivoantitumoractivityinmicewithseverecombinedimmunodeficiency.J.Immunol,1994.153(4):1687-1696；IntronaM,etal.Rapidandmassiveexpansionofcordblood-derivedcytokine-inducedkillercells:aninnovativeproposalforthetreatmentofleukemiarelapseaftercordbloodtransplantation.BoneMarrowTransplant,2006.38(9):621-627)。CIK细胞为一群异质性细胞群体，主要包括CD3+CD56+细胞，CD3+CD56-T细胞和CD3-CD56+NK细胞，其中CD3+CD56+细胞被认为是主要的具有非MHC限制性抗肿瘤活性的成分。CIK细胞有着在体外扩增易获得，移植免疫源性低、毒副作用小和非MHC限制性抗肿瘤活性的特点，CIK过继疗法被认为是一种极具潜力的免疫治疗方法。然而临床上使用CIK治疗肿瘤还面临着CIK细胞数量不够多，对肿瘤细胞杀伤能力不够强等不足。双膦酸盐类药物是上世纪80年代以来人们研究开发出的，用于治疗骨钙代谢疾病和一些骨相关疾病的药物。经过数十年的发展，如今已经研制出第三代双膦酸盐类药物。唑来膦酸是第三代双膦酸盐药物的典型代表，是目前为止发现的作用最强的双膦酸盐类药物，具有很强的抑制骨吸收作用及较低毒副作用，在临床上用于预防和治疗癌性骨转移及抗代谢性骨病。唑来膦酸抑制骨吸收的机制已经有比较深入的了解。经静脉注射后，唑来膦酸主要吸附在骨矿物质上，在骨吸收的过程中，唑来膦酸从骨表面释放并被破骨细胞吸收。进入破骨细胞后的唑来膦酸能主要通过从两个机制引起破骨细胞的凋亡。首先双膦酸盐在细胞内被代谢为ATP(腺嘌呤核苷三磷酸)的类似物，对细胞内多种以ATP做为底物的酶和生化反应具有抑制作用，产生细胞毒性；其次，唑来膦酸作为一种含氮双膦酸盐还可直接抑制法尼基焦磷酸(FPP)合成酶的活性，抑制甲羟戊酸通路，该通路的产物类异戊二烯脂是细胞内蛋白异戊烯化(法尼基化和香叶酰化)的必需成分。甲羟戊酸通路的抑制阻碍了细胞内许多重要蛋白的异戊烯化，包括Ras，Rho，Rab等小G蛋白，导致这些蛋白的正常定位及功能被破坏，引起细胞凋亡。此外，FPP合酶的抑制还导致该酶的底物异戊烯焦磷酸(IPP)的积累，IPP被合成为ATP的类似物，进一步促进细胞的凋亡(A.J.Roelofs,K.Thompson,F.H.Ebetino,M.J.RogersandF.P.Coxon,Currentpharmaceuticaldesign,2010,16,2950-2960.)。最近研究表明，双膦酸盐特别是唑来膦酸，不仅能够治疗癌症的骨转移作用，同时还具有直接的抗肿瘤作用。其作用机制包括多种不同的途径。其中之一与在破骨细胞中的作用类似，即被肿瘤细胞吸收后被代谢在ATP类似物、以及抑制FPP合成酶活性引物的凋亡作用。其他报道的机制还有抑制血管新生、抑制肿瘤细胞迁移与侵袭、抑制肿瘤细胞在骨面的黏附、激活体内的γδT免疫细胞的扩增等(R.Coleman,R.Cook,V.Hirsh,P.MajorandA.Lipton,Cancer,2011,117,11-23.)。但是目前关于双膦酸盐药物对CIK细胞杀伤能力的增强作用还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种抗肿瘤的联合用药物。本专利技术的另一目的在于提供双膦酸盐类化合物和CIK细胞在制备抗肿瘤联用药物中的应用。利用双膦酸盐类化合物与CIK细胞联合使用，双膦酸盐类药物可以显著提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种抗肿瘤的联合用药物，包括作为活性成分的双膦酸盐类化合物和CIK细胞。所述的抗肿瘤联合用药物还可以含有一种或者是至少两种药学上可以接受的载体。所述的抗肿瘤联合用药物可以进一步制成注射剂等多种形式，各种剂型的药物可以按照药学领域的常规方法制备。所述的双膦酸盐类化合物为临床用药依替膦酸二钠、氯膦酸二钠、帕米膦酸二钠、替鲁膦酸二钠、阿仑膦酸钠、奈立膦酸钠、奥帕膦酸钠、利塞膦酸钠、伊班膦酸钠、英卡膦酸二钠和唑来膦酸中的至少一种；优选为唑来膦酸。所述的CIK细胞为用常规方法得到的CIK细胞，如取自肿瘤患者或其他健康人的外周血、骨髓或脐带血，经单核细胞分离、在体外利用CD3抗体、IFN-γ和IL-2诱导培养获得。所述的CIK细胞优选通过如下方法制备得到：(1)将人的外周血加入PBS缓冲液，再加入人淋巴细胞分离液，离心，取位于上层血浆与下层分离液之间的白膜层，得到单个核细胞，其中，外周血、PBS缓冲液和人淋巴细胞分离液按体积比1：1：1进行配比；(2)向单个核细胞中加入PBS缓冲液，混匀后离心、洗涤，去除分离液；(3)向单核细胞中加入重组人IFN-γ进行培养，第二天加入CD-3单克隆抗体和重组人IL-2继续培养；(4)每隔2～3天加入新鲜的人淋巴细胞培养基培养，14～21天后，得到CIK细胞。步骤(1)中所述的人的外周血为通过无菌肝素抗凝采血管采集获得。步骤(1)中单个核细胞优选通过如下方法获得：在离心管中加入人淋巴细胞分离液，再将PBS稀释后的血样缓慢加于分离液上方，尽量避免血样与分离液混合，保持两液界面清晰，离心，取位于上层血浆与下层分离液之间的白膜层，得到单个核细胞。步骤(1)中所述的离心优选为800g离心20min。步骤(2)中所述的离心优选为250g离心10min。步骤(2)中所述的洗涤为采用PBS缓冲液进行洗涤，洗涤的次数为1～3次，优选为1～2次。步骤(2)中所述的单核细胞还包括用人淋巴细胞培养基进一步调细胞密度。步骤(2)中所述的培养优选为在含5％(v/v)CO2、温度为37℃的细胞培养箱中培养。步骤(4)中所述的新鲜的人淋巴细胞培养基为含有CD-3单克隆抗体和重组IL-2的人淋巴细胞培养基。所述的肿瘤包括肝癌、肺癌、恶性黑色素瘤、乳腺癌、结肠癌、鼻咽癌、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗肿瘤的联合用药物，其特征在于：包括作为活性成分的双膦酸盐类化合物和CIK细胞。

【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤的联合用药物，其特征在于：包括作为活性成分的双膦酸盐类化合物和CIK细胞。2.根据权利要求1所述的抗肿瘤的联合用药物，其特征在于：所述的双膦酸盐类化合物为临床用药依替膦酸二钠、氯膦酸二钠、帕米膦酸二钠、替鲁膦酸二钠、阿仑膦酸钠、奈立膦酸钠、奥帕膦酸钠、利塞膦酸钠、伊班膦酸钠、英卡膦酸二钠和唑来膦酸中的至少一种。3.根据权利要求1所述的抗肿瘤的联合用药物，其特征在于所述的CIK细胞通过如下方法制备得到：(1)将人的外周血加入PBS缓冲液，再加入人淋巴细胞分离液，离心，取位于上层血浆与下层分离液之间的白膜层，得到单个核细胞层，其中，外周血、PBS缓冲液和人淋巴细胞分离液按体积比1：1：1进行配比；(2)向单个核细胞层中加入PBS缓冲液，混匀后离心、洗涤，得到单核细胞；(3)向单核细胞中加入重组人IFN-γ进行培养，第二天加入CD-3单克隆抗体和重组人IL-2继续培养；(4)每隔2～3天加入新鲜的人淋巴细胞培养基培养14～21天后，得到CIK细胞。4.根据权利要求1所述的抗肿瘤的联...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈填烽，曾德龙，赵建夫，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44