一种以中药威灵仙为原料提取的有效部位威灵仙总皂苷，含有威灵仙皂苷ＣＰ↓［１］、ＣＰ↓［２］、ＣＰ↓［２ｂ］、ＣＰ↓［３ｂ］、ＣＰ↓［３］、ＣＰ↓［４］、ＣＰ↓［５］、ＣＰ↓［６］、ＣＰ↓［７］、ＣＰ↓［８］、ＣＰ↓［９］、ＣＰ↓［１０］等多种三萜皂苷成分，经对动物一般性炎症和免疫性炎症模型药理试验，发现具有显著的治疗作用，证明用于临床治疗类风湿性关节炎有重要治疗价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及从中药威灵仙中提取的威灵仙总皂苷，并经动物试验证明对类风湿性关节炎具有显著的治疗作用。
技术介绍
威灵仙是中医临床上传统的祛风湿要药，来源为毛茛科植物威灵仙Clematis chinensisOsbeck、棉团铁线莲Clematis hexapetala Pall.或东北铁线莲Clematis manshurica Rupr.的干燥根及根茎。性温，味辛、咸，功能祛风除湿，用于治疗“痹症”的历史悠久，唐朝嵩阳子周君巢作《威灵仙传》记载威灵仙去众风，通十二经脉，朝服暮效，疏宣五脏冷脓宿水变满，微利不泻人，服此四肢轻健，手足微暖，并得清凉。先时商州有人病手足不遂，不履地数十年，良医殚技莫能疗，所亲置之道旁，以求救者，遇一新罗僧见之，告曰此疾一药可活，但不知此土有否？因为之人入山求采，果得，乃威灵仙也，使服之，数日能步履。其后邓思齐知之，遂传某事。现代研究表明，威灵仙具有显著的抗炎镇痛作用。但对其祛风除湿、抗炎镇痛的物质基础尚未见报道。类风湿性关节炎是一种以关节病变为主的慢性全身性的自身免疫性疾病，其病程长期反复，致残率高。临床上应用的化学合成药主要有糖皮质激素和非甾体抗炎药，但尚不能确切根治本病，且不良反应较多。因此世界各国致力于对传统医药进行深入研究，从中提取分离有效成分和有效部位，寻找疗效好，副作用少的抗炎新药。
技术实现思路
本专利技术的目的是从传统抗风湿中药威灵仙中提取出治疗实验性类风湿性关节炎的有效成分，以便进一步研制出安全、有效、可控的中药抗风湿新药。精制的提取物用于制备各种剂型的药物具有检测方便、服用剂量小、服用方便、疗效高的优点，本专利技术中制备威灵仙总皂苷的大孔吸附树脂方法具有操作简单、工艺流程短、生产成本低的优点，具有广阔的市场前景。本专利技术应用大孔吸附树脂分离纯化技术从威灵仙中提取出有效部位总皂苷，为三萜皂苷类化学成分，主要含以下化学成分，其化学结构式如下 R1R2威灵仙皂苷CP1OH 3-O-α-L-阿拉伯糖威灵仙皂苷CP2H3-O-α-L-鼠李糖-(1-2)-α-L-阿拉伯糖威灵仙皂苷CP2bH3-O-β-D-木糖-(1-2)-α-L-阿拉伯糖威灵仙皂苷CP3bOH 3-O-α-L-鼠李糖-(1-2)-α-L-阿拉伯糖威灵仙皂苷CP3H3-O-β-D-木糖-(1-3)-α-L-鼠李糖-(1-2)-α-L-阿拉伯糖威灵仙皂苷CP4H3-O-β-D-核糖-(1-3)-α-L-鼠李糖-(1-2)-α-L-阿拉伯糖威灵仙皂苷CP5OH 3-O-β-D-木糖-(1-3)-α-L-鼠李糖-(1-2)-α-L-阿拉伯糖威灵仙皂苷CP6OH 3-O-β-D-核糖-(1-3)-α-L-鼠李糖-(1-2)-α-L-阿拉伯糖威灵仙皂苷CP7H3-O-β-D-葡萄糖-(1-4)-β-D-核糖-(1-3)-α-L-鼠李糖-(1-2)-α-L-阿拉伯糖威灵仙皂苷CP8OH 3-O-β-D-葡萄糖-(1-4)-β-D-核糖-(1-3)-α-L-鼠李糖-(1-2)-α-L-阿拉伯糖威灵仙皂苷CP9H3-O-β-D-葡萄糖-(1-4)-β-D-葡萄糖-(1-4)-β-D-核糖-(1-3)-α-L-鼠李糖-(1-2)-α-L-阿拉伯糖威灵仙皂苷CP10OH 3-O-β-D-葡萄糖-(1-4)-β-D-葡萄糖-(1-4)-β-D-核糖-(1-3)-α-L-鼠李糖-(1-2)-α-L-阿拉伯糖经动物试验，发现上述威灵仙总皂苷对实验性类风湿性关节炎具有显著治疗作用，试验方法与结果如下1实验材料1.1实验动物昆明种小鼠，雄性(热板试验中为雌性)，体重18～22g，购自安徽省实验动物管理中心动物房，合格证号皖医实动准字第01号。Wistar大鼠，雄性，体重180～220g，购自安徽省实验动物管理中心动物房，合格证号皖医实动准字第03号。空调控制室温20-25℃，湿度40-70％，自由饮水，摄食。1.2药品与试剂威灵仙总皂苷(Total Saponins of Clematis)，用时以纯化水配制成所需浓度的混悬液。确定小鼠低、中、高剂量分别为37.5mg/kg、75mg/kg、150mg/kg。大鼠低、中、高剂量分别为25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg。雷公藤多苷片浙江得恩德制药有限公司，批号0311116。确定小鼠剂量为15mg/kg，大鼠剂量为10mg/kg。伊文思蓝、醋酸、二甲苯等均为分析纯；鸡蛋市售。弗氏完全佐剂，中国科学院上海生物化学研究所，批号020605。1.3主要仪器设备8543E紫外-可见分光光度计；美国安捷伦公司；BP211D十万分之一电子天平；德国Sartorius公司；HH-S型恒温水浴箱河南英峪予华仪器厂；秒表深圳惠波科工贸公司；大鼠足容积测定器本室自制。高速离心机，上海手术器械厂；8543E紫外-可见分光光度计，美国安捷伦公司。2.方法与结果2.1醋酸致小鼠血管通透性增加试验小鼠50只，随机分为正常对照组、威灵仙总皂苷38、75、150mg/kg组和阳性对照组(雷公藤多苷片)，每组10只。每天灌胃给药一次，连续3天，末次给药后1h小鼠尾静脉注射0.5％伊文思蓝5ml/kg，5min后腹腔注射0.5％醋酸10ml/kg，30min后小鼠脱臼处死。用生理盐水反复洗出腹腔内伊文思蓝液，稀释为10ml，纯水调零，于分光光度计上590nm处比色测吸光度。试验数据以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用t检验。结果见表1。表1 对小鼠腹腔染料渗出的影响(x±s，n＝10) (与对照组比较，*示P＜0.05，**示P＜0.01，下同)表1显示威灵仙总皂苷能明显减少小鼠腹腔伊文思蓝渗出量，与对照组比较，高、中剂量组均有非常显著性差异(p＜0.01)，表明威灵仙总皂苷能抑制醋酸致小鼠血管通透性增加。2.2二甲苯诱导小鼠耳肿胀试验小鼠50只，分组及给药同2.2.1，于末次给药后1h于小鼠右耳前后两面涂抹二甲苯0.02ml，左耳作对照，2h后将小鼠脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径8mm的打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，以左右耳片重量之差为肿胀度。试验数据以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用t检验。结果见表2。表2 对小鼠耳肿胀度的影响(x±s，n＝10) 表2显示威灵仙总皂苷能减轻小鼠耳肿胀程度，与对照组比较，低、高剂量组均有显著差异(p＜0.05)，中剂量组有非常显著性差异(p＜0.01)，表明威灵仙总皂苷能抑制小鼠急性炎症。2.3蛋清诱导大鼠足肿胀试验大鼠30只，随机分为正常对照组、威灵仙总皂苷25、50、100mg/kg组和阳性对照组(雷公藤多苷片)，每组6只。灌胃给药，每天一次，连续3天，末次给药后1h每鼠右足趾皮下注射1％蛋清0.1ml致炎，分别在致炎前和致炎后0.5h，测量致炎侧足容积，以各鼠致炎前、后容积的差值为肿胀度。试验数据以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用t检验。结果见表3。表3 对大鼠足肿胀度的影响(x±s，n＝6) 表3显示威灵仙总皂苷能减轻大鼠足肿胀程度，与对照组比较，高、中、低剂量组均有显著差异(p＜0.05)，表明威灵仙总皂苷能抑制大鼠急性炎症。2.4棉球诱导的大鼠肉本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种以中药威灵仙为原料提取的有效部位威灵仙总皂苷，其特征在于具有以下化学结构：＊＊＊威灵仙皂苷ＣＰ↓［１］ＯＨ３－Ｏ－α－Ｌ－阿拉伯糖威灵仙皂苷ＣＰ↓［２］Ｈ３－Ｏ－α－Ｌ－鼠李糖－（１－２）－α－Ｌ －阿拉伯糖威灵仙皂苷ＣＰ↓［２ｂ］Ｈ３－Ｏ－β－Ｄ－木糖－（１－２）－α－Ｌ－阿拉伯糖威灵仙皂苷ＣＰ↓［３ｂ］ ＯＨ３－Ｏ－α－Ｌ－鼠李糖－（１－２）－α－Ｌ－阿拉伯糖威灵仙皂苷ＣＰ↓［３］Ｈ３－ Ｏ－β－Ｄ－木糖－（１－３）－α－Ｌ－鼠李糖－（１－２）－α－Ｌ－阿拉伯糖威灵仙皂苷ＣＰ↓［４］Ｈ３－Ｏ－β－Ｄ－核糖－（１－３）－α－Ｌ－鼠李糖－（１－２）－α－Ｌ－阿拉伯糖威灵仙皂苷ＣＰ↓［５］ＯＨ３－Ｏ －β－Ｄ－木糖－（１－３）－α－Ｌ－鼠李糖－（１－２）－α－Ｌ－阿拉伯糖威灵仙皂苷ＣＰ↓［６］ＯＨ３－Ｏ－β－Ｄ－核糖－（１－３）－α－Ｌ－鼠李糖－（１－２）－α－Ｌ－阿拉伯糖威灵仙皂苷ＣＰ↓［７］Ｈ３－Ｏ－ β－Ｄ－葡萄糖－（１－４）－β－Ｄ－核糖－（１－３）－α－Ｌ－鼠李糖－（１－２）－α－Ｌ－阿拉伯糖威灵仙皂苷ＣＰ↓［８］ＯＨ３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖－（１－４）－β－Ｄ－核糖－（１－３）－α－Ｌ－鼠李糖－（１－２）－α－Ｌ－阿 拉伯糖威灵仙皂苷ＣＰ↓［９］Ｈ３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖－（１－４）－β－Ｄ－葡萄糖－（１－４）－β－Ｄ－核糖－（１－３）－α－Ｌ－鼠李糖－（１－２）－α－Ｌ－阿拉伯糖威灵仙皂苷ＣＰ↓［１０］ＯＨ３－Ｏ－β－Ｄ－ 葡萄糖－（１－４）－β－Ｄ－葡萄糖－（１－４）－β－Ｄ－核糖－（１－３）－α－Ｌ－鼠李糖－（１－２）－α－Ｌ－阿拉伯糖。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐先祥，夏伦祝，邵旭，
申请(专利权)人：徐先祥，夏伦祝，邵旭，
类型：发明
国别省市：34[中国|安徽]
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