一种羟基积雪草甙化学对照品的分离制备方法，其特征在于：以重量含量３０～９７％的羟基积雪草甙提取物为原料，以制备型高效液相色谱为分离手段，以甲醇－水溶液为洗脱体系，获得纯度９８％以上羟基积雪草甙化学对照品；具体步骤为， （１）样品预处理：将重量含量３０～９７％的羟基积雪草甙提取物用甲醇或乙醇溶液溶解，配置成重量浓度为２０～６０ｍｇ／ｍｌ的积雪草甙提取物溶液，经０．２２～０．４５μｍ微孔滤膜过滤； （２）色谱柱处理：高效液相色谱柱选择制备型高效液相色谱柱，以５～１０倍柱体积的洗脱体系溶液平衡色谱柱；洗脱体系溶液为甲醇水溶液，其体积浓度为５０～８０％； （３）进样：将过滤后的样品溶液进样，进样体积为１～１００ｍｌ； （４）洗脱：采用洗脱体系溶液洗脱色谱柱，流速控制在１０～６００ｍｌ／ｍｉｎ，在线紫外监测，收集含有羟基积雪草甙的洗脱液； （５）羟基积雪草甙化学对照品的获得：减压浓缩所收集到的羟基积雪草甙洗脱液至干，获得纯度高于９８％的羟基积雪草甙化学对照品。
【技术实现步骤摘要】
駄领域本专利技术涉及一种从羟基积雪草甙提取物中分离获得纯度大于98%的羟 基积雪草甙化学对照品的制备方法。羟基积雪草甙(Madecassoside)是积雪草中一种重要的活性化学成分， 属于五环三萜类化合物。羟基积雪草甙的结构式如下OH OH羟基积雪草的制备方法主要有如下方法:1. 大孔吸附树脂吸附法秦路平等(中国专利CN12110诉C， 2005年 公开)报道了积雪草总甙的提取方法，该方法采用皂甙型大孔吸附树脂吸 附积雪草提取物，经蒸馏水洗脱，去除杂质后，以水醇洗脱，得到积雪草 总甙溶液，乙酸乙酯结晶，减压浓縮至干，经核磁共振分析，所得总皂甙 主要由积雪草甙和羟基羟基积雪草甙组成，两种成分占总该提取物的60%以上。2. 正相色谱法陈瑶等(中国专利CN1377649， 2002年公开)报道了 采用正相色谱制备羟基积雪草甙的方法以积雪草总甙为原料，进行硅胶 正相层析，氯仿甲醇为洗脱液，收取其中的2: l比例部分洗脱液，回收 获得羟基积雪草甙晶体。3. 离子交换色谱法A"卢瓦索等报道(中国专利CN1774257， 2006 年公开)报道积雪草甙、羟基积雪草甙和另一种五环三萜成分特米诺甙总 含量为75%混合物可以通过如下方法获得积雪草地上部分的醇提取物经 过阴离子树脂后，用液/液提取的方法进行选择性脱脂，浓縮脱脂后的水一 醇液依次通过阳离子树脂、阴离子树脂获得混合物。该混合物如通过选择 性色谱分离可以获得羟基积雪草甙和特米诺甙两种成分总量占混合物含量95%以上的混合物。羟基积雪草是积雪草中一种具有很强生物活性的化合物，将积雪草甙和 羟基积雪草甙共同做为研究对象开展有关研究成为积雪草植物研究的趋 势。积雪草苷和羟基积雪草苷含量之和大于40%的积雪草总甙可以用来用 于防治冠心病、心绞痛、心肌梗死、脑血栓形成、脑梗塞等心脑血管疾病。 当积雪草甙、羟基积雪草甙和特米诺甙三种成分总量占混合物含量75%以上时具有抗炎作用，可以用于治疗多种炎性疾病及银屑病、白癜风等皮肤 疾病。但目前羟基积雪草甙的提取方法都无法稳定获得纯度为98%以上的 羟基积雪草甙化学对照品，无法满足羟基积雪草药材或相关制剂的质量分 析及控制要求。制约了积雪草及羟基积雪草甙的科学研究及应用。开发一 种可以获得克级纯度在98%以上羟基积雪草甙化学对照品的方法是当前积 雪草研究的难点。针对该问题,我们开发了一种可以获得10克/月以上规模、 纯度在98%以上羟基积雪草甙的制备方法。
技术实现思路
为克服现有技术的缺陷，优化分离条件，本专利技术的目的在于提供一种分 离时间短、分离效果好、产品纯度高(纯度在98%以上)的羟基积雪草甙 化学对照品的分离制备方法。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案对照品的分离制备方法，以 重量含量30 97% (优选60 97%)的羟基积雪草甙提取物为原料，以制 备型髙效液相色谱为分离手段，以甲醇-水溶液为洗脱体系，获得纯度98% 以上羟基积雪草甙化学对照品；具体步骤为，(1) 样品预处理将重量含量30 97%的羟基积雪草甙提取物用甲醇 或乙醇溶液溶解，配置成重量浓度为20 60mg/ml的积雪草甙提取物溶液， 经0.22 0.45nm微孔滤膜过滤；(2) 色谱柱处理高效液相色谱柱选择制备型高效液相色谱柱，以5 20倍柱体积的洗脱体系溶液平衡色谱柱；洗脱体系溶液为甲醇水溶液，其 体积浓度为50—80%;(3) 进样将过滤后的样品溶液通过六通阀或泵进样，进样体积为l 100ml;(4) 洗脱采用洗脱体系溶液洗脱色谱柱，流速控制在10 600ml/min， 在线紫外监测，收集含有羟基积雪草甙的洗脱液；(5) 羟基积雪草甙化学对照品的获得减压浓縮所收集到的羟基积雪 草甙洗脱液至干，获得纯度高于98%的羟基积雪草甙化学对照品。所述制备型高效液相柱选用商品化或自己装填的制备型高效液相柱;其 填料可为C8或C18键合相填料；自己装填的制备型高效液相柱装填方式为湿法装柱，填料粒径为5-20nm，柱效在2000以上；在线紫外检测，其检 测波长为l卯nm 220nm，具体监测波长根据样品中干扰成分与羟基积雪草 甙的灵敏度确定，在所选择波长下，可以灵敏监测到千扰成分与羟基积雪草甙的信号；羟基积雪草甙洗脱液收集后，减压浓縮，浓縮温度控制在40 70'C。以本方法从羟基积雪草提取物中分离羟基积雪草甙化学对照品具有如 下优点和进步1. 本专利技术以制备型高效液相为分离手段，在保证羟基积雪草甙得到高 效分离的前提下，提高了羟基积雪草甙化学对照品的产量，可以获得克级 纯度在诉％以上的羟基积雪草甙化学对照品。2. 本专利技术所述的甲醇-水洗脱体系能有效的保证羟基积雪草甙与其他成 分得到有效分离，从而保证分离的效果。3. 本专利技术采用紫外监测器在线监测，监测波长为200至220nm间任一 波长，使羟基积雪草甙的分离情况可以直接监测，并可以选择性收集，显 著提高收集效果。4. 本专利技术所述方法操作简便，条件温和，能有效的保证羟基积雪草甙 的稳定性。5. 可产业推广。色谱柱规格为20X250mm时，其规模可达到10克/ 月以上。图i为本专利技术实施例i制备的羟基积雪草甙化学对照品的纯度分析色谱图。具体实肪式下面通过实施例和附图对本专利技术做进一步详细说明。 实施例i本实施例中，以30%的羟基积雪草甙提取物为原料，以5阿C18键合 相填料为吸附剂，以含有甲醇-水(50: 50，体积比)溶液为洗脱溶剂，具 体工艺步骤如下1. 样品预处理羟基积雪草甙提取物用甲醇溶解，配置成浓度为60mg/ml的羟基积雪 草甙溶液，经0.22阿微孔滤膜过滤。2. 色谱柱处理制备型高效液相柱选择为日本Sheshido生产的固定相为C18的制备柱 (5pm， 20X250mm)，以约5倍柱体积的洗脱体系溶液平衡色谱柱。3. 上样将过滤后的样品溶液通过六通阀进样，进样体积为lml。4. 洗脱流速控制在10ml/min，在线200nm紫外监测，收集含有羟基积雪草武 的洗脱液，5. 羟基积雪草甙化学对照品的获取减压浓縮羟基积雪草甙洗脱液，减压浓縮，浓縮温度控制在7(TC。得到纯度为98.89。/。的羟基积雪草甙化学对照品；如附图说明图1所示，其分析结果如 表l所示表l<table>table see original document page 6</column></row><table>实施例2本实施例中，以60%羟基积雪草甙提取物为原料，以10pm的C8键合 相填料为吸附剂，以含有甲醇-水(70: 30,体积比)溶液为洗脱溶剂，具 体工艺步骤如下1. 样品预处理60%羟基积雪草甙提取物用乙醇溶解，配置成浓度为40mg/ml的羟基积 雪草甙溶液，经0.45Mm微孔滤膜过滤。2. 色谱柱处理制备型高效液相柱是自己装填的制备柱，填料为粒径为10拜的C18 键合相填料，湿法装柱，色谱柱规格为50X250mm，以约10倍柱体积的洗 脱体系溶液平衡色谱柱。3. 上样将过滤后的样品溶液通过六通阀进样，进样体积为5ml。4. 洗脱流速控制在90ml/min，在线207nm紫外监测，收集含有羟基积雪草甙 的洗脱液，5. 羟基积雪草甙化学对照品的获取减压浓縮羟基积雪草甙洗脱液，减压浓本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：肖红斌，高明哲，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：
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