一种抗癌药物五环三萜类化合物，它是从传统中药桔梗中提取分离得到的抗癌单体化合物，其制备方法是首先将粉碎后的桔梗生药用７０％乙醇提取，浓缩得浸膏；再用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇分别提取，正丁醇层经大孔树脂柱层析，用洗脱剂洗脱后再经硅胶柱反复柱层析而得到五环三萜类化合物，经抗癌药理实验，对肝癌，胃癌细胞生长有明显的抑制作用，并具有高效低毒、毒副作用小、抗癌谱广、抗癌活性高等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设计一种抗癌药物及其制备方法，具体地说是以传统中药桔梗为原料提取的一种 抗癌活性物质五环三萜类化合物及其制备方法。二、
技术介绍
癌症是威胁人类健康的三大顽疾之一。世界上每年因癌症死去的人数达千万人，治疗癌 症对于人类发展来说已经迫在眉睫。植物药近年来发展方兴未艾，从植物中发现的很多有效 成分具有抗癌活性，因其副作用小，抗癌效果好而日益受到人们的重视。本专利技术人系统的研究了中药桔梗的皂苷类化合物，经动物实验表明桔梗皂苷类化合物对 癌细胞有显著的抗癌效果。在上述基础之上，本专利技术人又从桔梗总皂苷中分离得到活性强的 抗癌单体化合物，即活性成分。三、
技术实现思路
1、 专利技术目的本专利技术的目的是提供一种高效低毒，抗癌效果显著的单体化合物及其制备方 法，具体地说是以传统中药桔梗为原料提取的一种五环三萜皂苷类化合物及其在制备治疗 肝癌和胃癌药物方面的应用。2、 技术方案本专利技术人在现有技术的基础上又作了进一步的研究，发现桔梗皂苷D为桔梗 皂苷类化学成分中具有较强抗癌活性的单体化合物。并经査阅中外文文献，未发现有报道 桔梗皂苷D用于肝癌和胃癌等癌症的治疗。本专利技术从桔梗中提取的一种五环三蔽化合物， 它是3-0-p-D-glucopyranosyl-2p， 3J3， 16a， 23， 24-pentahydroxyolean-12-ene-28-oic acid 28-0-卩-D-apiofUranosyl-( 1 —3)-卩-D-xylopyranosyl-(1 —4)-a-L-rhamnopyranosyl-(l ~>2)-cc-L-arabinopyranosyl ester,分子式为C57H92028，其化学结构如下:<formula>formula see original document page 3</formula>一种从桔梗中制备桔梗皂苷D的制备方法，其步骤是A、 将桔梗生药粉碎后用5000mL的70%乙醇超声波提取，回收乙醇然后将提取液浓缩得浸膏。B、 浸膏用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇分别提取，得正丁醇提取液。C、 将正丁醇层过NKA-12柱色谱，以水和5000mL的70%乙醇洗脱，回收乙醇，得到提取 物。D、 将C步骤中所得到得提取物再进行硅胶(300-400目)柱层析,用3500mL氯仿-甲醇(10 :3) 淋洗，得到在薄层板上斑点最大的化合物即为本专利技术的桔梗皂苷D，它可以用半制备高效液 相色谱纯化。本专利技术涉及一种五环三結化合物桔梗皂苷D在制备肝癌的药物方面的应用采用MTT法测定桔梗中五环三萜化合物桔梗皂苷D对肝癌细胞生长抑制作用。选用对数 生长期的贴壁肝癌细胞，用胰酶消化后，再用含10%小牛血清RPMI1640的培养基配成所需 浓度的细胞悬液，接种在96孔培养板中，每孔接种100pL，在37t的5%002孵箱中培养24h。 实验组换新的含不同浓度被测样品的培养基，对照组则换含等体积溶剂的培养基，每组设3 个平行孔，另设药液对照孔，在37'C的5%(302孵箱中培养82h。弃去上清液，每孔加入100pL 无血清的培养基和10ul5mg/mL的MTT,在上述条件下培养4h,小心弃上清液，并加入 lOO)ilDMSO溶解MTT沉淀，用微型振荡器混匀后，在酶标仪上经波长为540nm测定光密度 值。抑制率％=(1 —实验组光密度值/对照组光密度值)><100%。实验结果表明，随着桔梗中五环三萜化合物桔梗皂苷D浓度的升高，对肝癌细胞生长抑 制率也升高，五环三萜化合物桔梗皂苷D在20ng/mL以上时对肝癌肝癌细胞生长有明显的抑 制作用，其中20吗/ml时抑制率最高，其抑制率达87.39%。本专利技术涉及一种五环三萜化合物桔梗皂苷D在制备宵癌的药物方面的应用采用MTT法测定桔梗中五环三萜化合物桔梗皂苷D对胃癌细胞生长抑制作用。选用对数 生长期的贴壁肝癌细胞，用胰酶消化后，再用含10%小牛血清RPMI1640的培养基配成所需 浓度的细胞悬液，接种在％孔培养板中，每孔接种100nL，在37'C的5%C02孵箱中培养24h。 实验组换新的含不同浓度被测样品的培养基，对照组则换含等体积溶剂的培养基，每组设3 个平行孔，另设药液对照孔，在37'C的5%(202孵箱中培养82h。弃去上清液，每孔加入10(HiLl 无血清的培养基和IOMI， 5mg/mL的MTT，在上述条件下培养4h，小心弃上清液，并加入 10(^1DMSO溶解MTT沉淀，用微型振荡器混匀后，在酶标仪上经波长为540nm测定光密度 值。抑制率％=(1 —实验组光密度值/对照组光密度值)><100%。实验结果表明，随着桔梗中五环三萜化合物桔梗皂苷D浓度的升高，对胃癌细胞生长 抑制率也升高，五环三萜化合物桔梗皂苷D在20txg/mL以上时对肝癌肝癌细胞生长有明显的抑制作用，其中20Hg/mL时抑制率最高，其抑制率达93.64%。 四具体实施方式实施例1:桔梗中五环三萜化合物桔梗皂苷D的提取方法(1) 桔梗生药购买于长春市光复路市场，干燥后粉碎过40目筛，粉碎后的桔梗2.5〖8,用 70%乙醇超声波提取，回收乙醇后浓縮得浸膏350g。(2) 将浸膏分别用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇提取，得正丁醇提取液。(3) 将正丁醇提取液过NKA-12 (4Kg)柱色谱，以7000mL水和5000mL 70%乙醇洗脱， 回收乙醇，得到提取物。(4) 将提取物再用硅胶(300-400目)400g进行柱层析，用3500mL氯仿-甲醇(10:3)为 洗脱剂B淋洗，每50mL为一个单位分贝接收，薄层板喷洒10%浓硫酸乙醇溶液ll(TC加热 5分钟显色，合并在薄层板上斑点最大的化合物即为本专利技术的桔梗皂苷D，它可以用半制备 高效液相色谱纯化。实施例2:五环三確化合物桔梗龟苷D结构鉴定桔梗皂苷D为白色无定形粉末，易溶于甲醇，乙醇，水等溶剂，李伯曼(Liebermann-Burchard) 反应呈阳性。结合核磁共振波谱综合分析，并与己知文献对照，确定桔梗皂苷D为五环三砲 化合物。分子式为<:571192028，其化学结构如下实施例3:桔梗皂苷D的抗肝癌作用1、 细胞培养与化合物肝癌细胞株(Bel7402))由中国医学科学院药物所提供。细胞培养于10%小牛血清 RPMI1640培养液中，恒温37'C， 5%<:02孵箱中培养24h。单体化合物是经化学结构鉴定 的桔梗皂苷D。2、 实验方法采用MTT法测定桔梗中五环三萜化合物桔梗皂苷D对肝癌细胞生长抑制作用。选用对数生长期的肝癌细胞，接种在96孔培养板中，在37t， 5%(302培养2411。实验组换新的含不 同浓度被测样品的培养基，对照组则换含等体积溶剂的培养基，每个浓度设9个复孔，分3 次重复测定，另设药液对照孔，在37i:的5o/。C02孵箱中培养82h。弃去上清液，每孔加入 100pL无血清的培养基和10pL， 5mg/mL的MTT，在上述条件下培养4h，小心弃上清液，并 加入100pL的DMSO溶解MTT甲瓒沉淀，30min后上酶标仪波长540nm处测定光密度值。 抑制率％=(1_实验组光密度值/对照组光密度值)><100%。3、实验结果结果如表1显本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗癌药物五环三萜化合物桔梗皂苷Ｄ，其特征是具有结构３－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ－２β，３β，１６α，２３，２４－ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｏｌｅａｎ－１２－ｅｎｅ－２８－ｏｉｃａｃｉｄ２８－Ｏ－β－Ｄ－ａｐｉｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ－（１→３）－β－Ｄ－Ｘｙｌｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ－（１→４）－α－Ｌ－ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ－（１→２）－α－Ｌ－ａｒａｂｉｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌｅｓｔｅｒ，分子式为Ｃ↓［５７］Ｈ↓［９２］Ｏ↓［２８］，其化学结构如下：＊＊＊。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李伟，郑毅男，齐云，张晶，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]
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