一种牛传染性鼻气管炎的胶体金免疫层析试纸条制造技术

本实用新型专利技术公开了一种牛传染性鼻气管炎的胶体金免疫层析试纸条，包括PVC胶板，PVC胶板中间设置有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜两侧的PVC胶板上分别设置有血清样品垫和吸水纸，血清样品垫与所述硝酸纤维素膜之间设置有金标垫，金标垫上涂覆有经复溶缓冲液稀释的金标‑SPA，金标垫的一端位于所述血清样品垫下端，另一端位于硝酸纤维素膜上端；硝酸纤维素膜上靠近金标垫一端上设置有检测线，硝酸纤维素膜上背离金标垫一端上设置有质控线。本实用新型专利技术的目的是提供一种牛传染性鼻气管炎的胶体金免疫层析试纸条，其具有快速、简便、准确、高度特异性和敏感性，且结果直观可靠等优点，适用于牛传染性鼻气管炎的临床检测。

【技术实现步骤摘要】
一种牛传染性鼻气管炎的胶体金免疫层析试纸条
本技术涉及一种牛传染性鼻气管炎的胶体金免疫层析试纸条。
技术介绍
牛传染性鼻气管炎(Infectiousbovinerhinotracheitis,IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)也称牛疱疹病毒Ⅰ型(BovineherpesvirusⅠ，BHV-Ⅰ)引起牛的一种急性、热性、接触性传染病，临床症状有上呼吸道及气管粘膜发炎、呼吸困难、流鼻汁等，并伴有结膜炎、流产、乳腺炎，有时诱发小牛脑炎等。更严重的危害是导致持续性感染，给诊断、预防及治疗该病造成极大的困难。牛传染性鼻气管炎病毒粒子最外层的囊膜由11种糖蛋白组成，其中gB、gC和gD糖蛋白具有高免疫原性，能够刺激机体产生抗体并在补体存在下致使感染细胞裂解。目前，IBR的鉴别诊断方法主要包括传统的病毒分离、血清学实验、聚合酶链式反应(PCR)技术等，其中血清学实验又包括血清中和实验、琼脂扩散实验、间接血凝实验和ELISA诊断方法。这些检测方法对操作步骤、操作环境、仪器设备的要求都很高，很难应用于临床诊断。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本技术的目的是提供一种牛传染性鼻气管炎的胶体金免疫层析试纸条，其具有快速、简便、准确、高度特异性和敏感性，且结果直观可靠等优点，适用于牛传染性鼻气管炎的临床检测。为解决上述技术问题，本技术采用如下技术方案：本技术一种牛传染性鼻气管炎的胶体金免疫层析试纸条，包括PVC胶板，所述PVC胶板中间设置有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜两侧的PVC胶板上分别设置有血清样品垫和吸水纸，所述血清样品垫与所述硝酸纤维素膜之间设置有金标垫，所述金标垫上涂覆有经复溶缓冲液稀释的金标-SPA，所述金标垫的一端位于所述血清样品垫下端，另一端位于所述硝酸纤维素膜上端；所述硝酸纤维素膜上靠近金标垫一端上设置有用牛传染性鼻气管炎病毒融合蛋白gBF划线作为捕获抗原的检测线，所述硝酸纤维素膜上背离金标垫一端上设置有用提纯的兔IgG划线作为捕获抗体的质控线；所述PVC胶板下表面上设置有双面胶，所述PVC胶板周侧表面为磨砂面；所述吸水纸靠近所述硝酸纤维素膜一端位于所述硝酸纤维素膜的端侧上面。与现有技术相比，本技术的有益技术效果：能够快速有效的检测牛传染性鼻气管炎抗体；双面胶方便用于需要时粘接固定试纸条；PVC胶板周侧表面的磨砂面能够增加手持的摩擦力。附图说明下面结合附图说明对本技术作进一步说明。图1为本技术牛传染性鼻气管炎的胶体金免疫层析试纸条的示意图；附图标记说明：1-PVC胶板；2-血清样品垫；3-金标垫；4-硝酸纤维素膜；5-样品层析方向；6-检测线；7-质控线；8-吸水纸。具体实施方式如图1所示，一种牛传染性鼻气管炎的胶体金免疫层析试纸条，包括PVC胶板1，所述PVC胶板1中间设置有硝酸纤维素膜4，所述硝酸纤维素膜4两侧的PVC胶板1上分别设置有血清样品垫2和吸水纸8，所述血清样品垫2与所述硝酸纤维素膜4之间设置有金标垫3，所述金标垫3上涂覆有经复溶缓冲液稀释的金标-SPA，所述金标垫3的一端位于所述血清样品垫2下端，另一端位于所述硝酸纤维素膜4上端，吸水纸8靠近所述硝酸纤维素膜4一端位于所述硝酸纤维素膜4的端侧上面；所述硝酸纤维素膜4上靠近金标垫3一端上设置有用牛传染性鼻气管炎病毒融合蛋白gBF划线作为捕获抗原的检测线6，所述硝酸纤维素膜4上背离金标垫3一端上设置有用兔IgG划线作为捕获抗体的质控线7；所述PVC胶板1下表面上设置有双面胶，方便需要时粘接规定试纸条；所述PVC胶板1周侧表面为磨砂面，增加手持摩擦力。牛传染性鼻气管炎病毒融合蛋白gBF是利用DNAstar对牛传染性鼻气管炎病毒的主要抗原糖蛋白gB进行预测分析，选出3段抗原指数高的抗原表位基因，根据3段氨基酸序列起始位置找出3段对应基因序列，并分别命名为gBa、gBb和gBc，3段基因之间用Linker序列连接，并选定EcoRI和XhoI为酶切位点，将融合好的基因序列送与合成得到重组克隆载体PUCK-(gBa-linker-gBb-linker-gBc)，重组克隆载体存在于大肠杆菌DH-5α中，通过摇菌的方式克隆以及扩增目的基因，通过质粒提取、双酶切以及胶回收得到带有粘性末端的目的基因gBabc。目的基因gBabc与线性化原核表达载体pET-28(+)连接成功构建了重组表达质粒pET28a-gBabc，转化入表达宿主菌BL21(DE3)plyss中，经诱导表达纯化及复性得到具有免疫学活性的融合蛋白，并命名为gBF，作为检测抗原用于牛传染性鼻气管炎抗体的检测。用检测试纸条检测牛传染性鼻气管炎标准阳性血清，在检测线6处出现红色反应带，检测阴性血清时试纸条检测线6处未出现反应条带，上述两种检测在质控线7处均出现红色反应条带，表明用试纸条检测牛传染性鼻气管炎标准阳性血清时呈阳性反应，检测阴性血清时呈阴性反应；试纸条检测牛传染性鼻气管炎阴性血清、牛副结核病、牛布氏杆菌病、牛病毒性腹泻和牛口蹄疫的阳性血清，结果都为阴性反应。以上所述的实施例仅是对本技术的优选方式进行描述，并非对本技术的范围进行限定，在不脱离本技术设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本技术的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本技术权利要求书确定的保护范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牛传染性鼻气管炎的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：包括PVC胶板，所述PVC胶板中间设置有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜两侧的PVC胶板上分别设置有血清样品垫和吸水纸，所述血清样品垫与所述硝酸纤维素膜之间设置有金标垫，所述金标垫上涂覆有经复溶缓冲液稀释的金标‑SPA，所述金标垫的一端位于所述血清样品垫下端，另一端位于所述硝酸纤维素膜上端；所述硝酸纤维素膜上靠近金标垫一端上设置有用牛传染性鼻气管炎病毒融合蛋白gBF划线作为捕获抗原的检测线，所述硝酸纤维素膜上背离金标垫一端上设置有用兔IgG划线作为捕获抗体的质控线；所述PVC胶板下表面上设置有双面胶，所述PVC胶板周侧表面为磨砂面；所述吸水纸靠近所述硝酸纤维素膜一端位于所述硝酸纤维素膜的端侧上面。

【技术特征摘要】
1.一种牛传染性鼻气管炎的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：包括PVC胶板，所述PVC胶板中间设置有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜两侧的PVC胶板上分别设置有血清样品垫和吸水纸，所述血清样品垫与所述硝酸纤维素膜之间设置有金标垫，所述金标垫上涂覆有经复溶缓冲液稀释的金标-SPA，所述金标垫的一端位于所述血清样品垫下端，另一端位于所...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦建华，刘腾，赵月兰，史万玉，包永占，景翠，王敏，赵越，刘立元，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：新型
国别省市：河北,13