一种核酸提取试剂和其制备方法以及其用途技术

本发明专利技术的目的是提供一种稳定且能快速结合核酸的核酸提取试剂，所述的核酸提取试剂包含天然白云岩颗粒。并提供了这种核酸提取试剂的制备方法以及其在提取，纯化核酸中的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，特别涉及从生物材料中分离，制备或纯化核酸。
技术介绍
由核酸分析得到的基因信息广泛应用于医疗，临床检查，制药产业和食品 产业等各种领域，而进行核酸分析时从生物材料中分离，制备和纯化核酸是必 不可少的步骤。已知的分离核酸的方法，如核酸与羟基磷灰石结合制备标层析纯化核酸(参见分子克隆实验指南第2版970页，J sambrook， E F Fritsch， TManiatis著，金冬雁，黎孟枫译)，在应用中主要的问题是需要浓縮从柱上洗 脱下来的处于高离子强度磷酸盐缓冲液中的核酸样品，而在进行乙醇沉淀以前 必须先去除磷酸根离子，常会造成核酸样品的大量丢失，且不适合单人份核酸 样品的纯化；又如美国戴维斯等编著的分子生物学实验技术中73 — 75页，介绍 了玻璃粉结合核酸技术，但玻璃粉不能直接使用，需要经过浓硝酸活化，在通 风厨中加热至接近沸腾，制备时必须非常小心，避免碰到皮肤和衣服。另外，在蛋白质
，蛋白质提纯的第一步就是去除核酸，除核酸的 传统方法是用阳离子(Mn2+、链霉素和精蛋白等)沉淀核酸，但是此法在有些情 况下不适用，例如所需要的蛋白质会在沉淀核酸的条件下失活，或提取液中核 酸含量太高，或所要提纯的酶用于蛋白质体外合成实验，在这些情况下就必须 用相分配法除核酸，右旋糖苷T500或聚乙二醇6000能在很宽的浓度范围内形 成双相分离系统。核酸酶处理可用于从细胞提取液中除去DNA，大分子RNA和大 部分tRNA，但寡核苷酸不易除去，因此尽量不用核酸酶处理，除非大量制备时， 非用核酸酶低溶液粘度不可。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种稳定且能快速结合核酸的核酸提取试剂，所述的 核酸提取试剂包含天然白云岩颗粒。天然白云岩的主要组分为碳酸钙和碳酸镁 的复盐，该钙镁复合物性质稳定，在低温和高温下不改变化学性质、外观白色， 经加工制成粉剂可有效地结合核酸。天然白云岩颗粒制备非常容易，其原材料 来源于天然矿床，制备工艺如下1. 开采矿石2. 人工破碎3. 机械粉碎4. 目筛筛选按100 — 500目收集颗粒5. 干燥100—200。C烤干备用基于木专利技术提出的天然白云岩颗粒对高温的稳定性特点，将该颗粒分别与ra6.0-11的水溶液经高压灭菌配制成悬液可获得不同作用的核酸提取试剂。PH 10以上的水溶剂和天然白云岩颗粒配成悬液、具有双功能作用，在高温时裂解 病毒和细菌，同时可将裂解后裸露的DNA快速的结合到天然白云岩颗粒上，离 心去掉大量的蛋白成份，保留沉淀物，从而达到浓缩DNA和纯化DNA的作用。 ra 6-8的水溶剂配制成悬液在常温条件下、无裂解病毒或细菌的功能、仅有快 速结合核酸达到浓縮核酸和纯化核酸的作用。还可以将含这种天然白云岩颗粒的核酸提取试剂用于从蛋白质制品中去除 核酸杂质。具体可以采用柱层析法或悬浮吸收法。本专利技术提出的核酸提取试剂中包含的天然白云岩颗粒对核酸的结合效果为 100mg可结合50pg商品鱼精DNA和酵母RNA。也可以根据具体需要，将该天然白云岩颗粒溶于TE缓冲液等其他液体，以更好地结合核酸。 附图说明图1为实施例1的实验结果，即核酸提取试剂用于聚合酶链反应中提取纯化DNA效果M为Marker (100 bp)，泳道1为核酸提取试剂提取纯化乙型肝炎 病毒感染原血清(HBV DNA拷贝数1.019E+06)的核酸，泳道2—6为核酸提 取试剂提取纯化乙型肝炎病毒感染10"—10'5的稀释血清的核酸，7、 8分别为小 牛血清和水，作为阴性对照。HBVDNA目的片段大小为HBVC区190bp。图2为实施例12的实验结果，即包含500目白云岩的核酸提取试剂200mg 常温对cFDNA的吸收效果其中泳道6为10jxg cFDNA，不加核酸提取试剂 的对照，泳道ll为160(ag cFDNA，加入上述核酸核酸提取试剂200mg，泳道 12为320昭cFDNA，加入上述核酸核酸提取试剂200mg，泳道13为480吗cF DNA，加入上述核酸核酸提取试剂200mg，泳道14为950吗cF DNA，加入上 述核酸提取试剂200mg，泳道15为950吗cF DNA，不加核酸提取试剂的对照。 泳道11无带产生，即在常温下200mg包含500目白云岩的核酸提取试剂可吸收 160吗cFDNA。泳道12，表明常温下200mg包含500目白云岩的核酸提取试剂 对320吗cFDNA吸收不完全。图3为实施例12的实验结果，即包含500目白云岩的核酸提取试剂200mg 55 。C时对cFDNA的吸收效果其中泳道6为10吗cFDNA，不加核酸提取试剂 的对照，泳道16为200吗cFDNA，加入上述核酸核酸提取试剂200mg，泳道 17为250昭cFDNA，加入上述核酸核酸提取试剂200mg，泳道18为30(Vg cF DNA，加入上述核酸核酸提取试剂200mg。泳道16和17无带产生，表明55°C 下，200mg包含500目白云岩的核酸提取试剂可完全吸收200吗和250吗cF DNA，泳道18表明55。C下，200mg包含500目白云岩的核酸提取试剂对300吗8cFDNA吸收不完全。 具体实施例方式以下是本专利技术的具体实施方式，但并不构成对本专利技术的保护范围的限制。 实施例l核酸提取试剂用于聚合酶链反应中纯化DNA取被检样品10[il，加入核酸提取试剂5(^1，充分混匀，95。C裂解10分钟， 再次混匀，10000转/分钟，离心10分钟，吸去液体，留沉淀物，这时样品中的 大量蛋白组份被吸掉，核酸可快速地被吸附到天然白云岩颗粒上，从而达到去 除聚合酶反应样品中的蛋白质，纯化核酸的目的。直接将聚合酶反应液，加入 含有天然白云岩颗粒的管内，进行聚合酶反应。例如将该方法用于纯化乙型肝炎病毒核酸时，可用以下扩增条件，94°C 预变性60秒，94。C变性30秒、55。C退火30秒、72。C45秒，最后，72。C300秒， 扩增35个循环。电泳结果见说明书附图1:实施例2核酸提取试剂在用于浓縮DNA含量较低样品中的应用(1) 碱性核酸提取试剂浓縮DNA:取被检样品100pl，加入碱性核酸提取试剂 200^1，混匀，95。C加热10分钟，再充分混匀，10000转/分钟，离心10分钟，吸去含大量蛋白质的液体，使ioow样品中的核酸吸附到天然白云岩颗粒上，达到浓缩的目的。(2) 中性核酸提取试剂浓縮DNA:取含核酸样品100^1，加入中性核酸提取 试剂200^1，混匀，10000转/分钟，离心10分钟，吸去含蛋白质的液体，留沉 淀物，即为天然白云岩颗粒与核酸形成的复合物，含核酸样品。实施例3核酸提取试剂用于从蛋白质制品中去除核酸杂质 柱层析法取300目天然白云岩颗粒，按以下方法制成层析柱 (1)首先在12ml无菌一次性注射器出口，加入两层尼龙稠园形膜片，防止300目白云岩颗粒漏出来；(2) 装柱，用TE(10毫克分子三羟甲基氨基甲垸(Tris)， 1毫克分子EDTA， pH7.5) 悬浮约13克300目白云岩颗粒，用吸管移至注射器内；(3) 平衡层析柱用TE缓冲液洗柱三次。(4) 上样；将合有核酸物质的蛋白质溶液约10ml加入层析柱上，收集蛋白质制品。 悬浮吸收法(1) 洗涤，取500目天然白云岩颗粒约10克，放本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核酸提取试剂，其特征在于包含天然白云岩颗粒。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杜谚语，
申请(专利权)人：杜谚语，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]