诊断肝纤维化的方法技术

本发明专利技术涉及用于诊断患有肥胖症的受试者中的肝纤维化或用于选择患有肥胖症的受试者用于肝活检或治疗的方法，特别是体外方法。本发明专利技术还涉及用于筛选适用于预防和/或治疗肝纤维化的益生菌、益生元、化学化合物或生物化合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】诊断肝纤维化的方法本专利技术涉及用于诊断患有肥胖症的受试者中的肝纤维化或用于选择患有肥胖症的受试者用于肝活检或治疗的方法。本专利技术还涉及用于筛选适用于预防和/或治疗肝纤维化的益生菌、益生元、化学化合物或生物化合物的方法。肝脏是通过门静脉与来自小肠和大肠的静脉血相遇的第一个肠外器官。在健康的生物体中，只有少量的易位细菌产物到达肝脏。一般来说，肝免疫系统耐受这些细菌产物，从而避免有害反应，这种现象称为“肝耐受”。在这方面，肝脏不仅由实质肝细胞组成，而且还含有非实质细胞，包括免疫和非免疫细胞。肝免疫系统的成员是驻留的肝组织巨噬细胞(枯否细胞)，天然杀伤(NK)细胞，NKT细胞，T细胞和B细胞。这些细胞类型严格调节肝免疫系统，包括肝耐受性。数条线的证据表明细菌易位在酒精性肝病中发挥重要作用。已经观察到，由酒精和/或其代谢物(例如乙醛)诱导的肠道中的细菌增殖和肠紧密连接的功能的损伤增强细菌易位到肝脏。这进而导致免疫细胞(包括枯否细胞)的活化，以及各种促炎细胞因子和趋化因子的释放。此外，已经观察到，在长期摄取乙醇的动物和患者中，抗微生物蛋白Reg3b和Reg3g的肠表达减少，这表明乙醇诱导的肠生态失调由抗微生物分子表达的失调介导。在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)中，也存在细菌易位进入肝脏的作用的证据。首先，肠道菌群在肥胖症中的作用已被证明。当喂食标准食物饮食的野生型无菌小鼠用从ob/ob或瘦供体收获的微生物群定植时，“肥胖”微生物群的接受者中的肥胖比“瘦”微生物群的接受者中的肥胖增加得更多，表明微生物群在肥胖症和因而脂肪肝疾病中的关键作用。然而，根据本专利技术人的知识，在受试者的细菌易位进入肝脏或甚至进入血液循环中与所述受试者中肝纤维化的存在之间未曾建立相关性。肝纤维化是一个重要的健康问题，每年约150万例死亡的世界范围内死亡率可归因于肝硬化和原发性肝癌。肝硬化是纤维化的最后阶段，其主要响应于病毒和毒性代谢损伤发生。纤维化进展的最常见原因是慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、酒精性肝病和非酒精性脂肪性肝病。即使在肝硬化阶段，肝纤维化也是可治疗的，主要使用针对丙型肝炎和乙型肝炎的抗病毒治疗，而且还通过减少饮酒和改善超重、糖尿病及非酒精性脂肪性肝病的代谢因素来治疗。因此，需要筛查肝纤维化。肝活检是诊断肝纤维化和诊断引起纤维化的潜在肝病的标准。然而，肝活检是侵入性的，导致10％至20％风险的轻微并发症(例如术后疼痛)和0.5％至1％风险的严重并发症(例如显著出血)。此外，肝活检受限于采样误差和在组织学发现的解释上不完全的观察者间一致性。因此，可能不总是进行肝活检，并且非常需要用于诊断肝纤维化的替代的非侵入性方法。本专利技术首先源自本专利技术人的意想不到的发现，即细菌16SrDNA的血液浓度与患有肥胖症的患者中肝纤维化的存在特异相关，而其与其它类型的脂肪肝疾病(例如肝脂肪变性)不相关。因此，细菌16SrDNA的血液浓度可用于诊断患有肥胖症的患者的肝纤维化。因此，本专利技术涉及用于诊断患有肥胖症的受试者中的肝纤维化的方法，特别是体外方法，所述方法包括以下步骤：a1)测量受试者的生物样品中细菌16SrDNA的浓度或细菌16SrDNA的量与总DNA量的比率；和b)基于步骤a1)中的测量结果，诊断患有肥胖症的受试者中的肝纤维化。本专利技术还涉及用于选择患有肥胖症的受试者用于肝活检的方法，特别是体外方法，所述方法包括以下步骤：a1)测量受试者的生物样品中细菌16SrDNA的浓度或细菌16SrDNA的量与总DNA量的比率；和b)基于步骤a1)中的测量结果，选择患有肥胖症的受试者进行肝活检。根据另一方面，本专利技术涉及用于选择患有肥胖症的受试者用于靶向肝纤维化和/或其并发症的治疗方案的体外方法，所述方法包括以下步骤：a1)测量受试者的生物样品中细菌16SrDNA的浓度或细菌16SrDNA的量与总DNA量的比率；和b)基于步骤a1)中的测量结果，选择患有肥胖症的受试者进行靶向肝纤维化和/或其并发症的治疗方案。本专利技术的另一方面是用于治疗患有肝纤维化的肥胖受试者的方法，所述方法包括以下步骤：a1)测量受试者的生物样品中细菌16SrDNA的浓度或细菌16SrDNA的量与总DNA量的比率；b)基于步骤a1)中的测量结果，诊断患有肥胖症的受试者中的肝纤维化；和c)如果在步骤b)中已经诊断出肝纤维化，则向受试者施用靶向肝纤维化的治疗。本专利技术还涉及治疗患有肥胖症和肝纤维化和/或其并发症的受试者的方法，所述方法包括以下步骤：a1)测量受试者的生物样品中细菌16SrDNA的浓度或细菌16SrDNA的量与总DNA量的比率；b)基于步骤a1)中的测量结果，选择患有肥胖症的受试者进行靶向肝纤维化和/或其并发症的药物治疗；和c)向步骤b)中选择的受试者施用靶向肝纤维化和/或其并发症的药物治疗。本专利技术还涉及用于监测患有肥胖症和肝纤维化和/或其并发症的患者对靶向肝纤维化和/或其并发症的药物治疗的反应性的体外方法，所述方法包括以下步骤：a1)测量受试者的生物样品中细菌16SrDNA的浓度或细菌16SrDNA的量与总DNA量的比率；和b)基于步骤a1)中的测量结果，监测患者对所述药物治疗的反应性。细菌16SrDNA的血液浓度反映了疾病的原因而不是其结果，并因此可以用作靶向肠微生物群的治疗策略(例如前和益生菌)的伴随生物标志物。因此，本专利技术最后涉及用于筛选适用于预防和/或治疗肝纤维化的益生菌、益生元、化学化合物或生物化合物的方法，其包括以下步骤：-测量患有肝纤维化的肥胖受试者的生物样品中的细菌16SrDNA的浓度或细菌16SrDNA的量与总DNA量的比率，所述肥胖受试者已经用候选益生菌、益生元、化学化合物或生物化合物进行治疗；和-比较所述浓度或所述比率与未用所述候选益生菌、益生元、化学化合物或生物化合物治疗的患有肝纤维化的对照肥胖受试者的浓度或比率；其中在所述对照受试者的生物样品中测量的比在用所述候选益生菌、益生元、化学化合物或生物化合物治疗的受试者的生物样品中测量的更高的浓度或更高的比率表明所述候选益生菌、益生元、化学化合物或生物化合物适用于预防和/或治疗肝纤维化。专利技术详述纤维化如本文所用，术语“纤维化”、“肝纤维化”或“肝脏纤维化”是指其中过量的结缔组织在肝脏中积累的医学病症；该组织代表响应于慢性、反复的肝细胞损伤的瘢痕形成。通常，随着再生肝细胞试图替换和修复受损组织，纤维化进展，从而破坏肝结构和最终破坏肝功能。受试者在本专利技术的上下文中，“受试者”表示人或非人哺乳动物，例如啮齿动物(大鼠，小鼠，兔)，灵长类动物(黑猩猩)，猫科动物(猫)或犬科动物(狗)。优选地，受试者是人。根据本专利技术的受试者可以特别是男性或女性。根据本专利技术，受试者患有肥胖症。如本文所用，术语“肥胖症”、“一般性肥胖症”或“总体肥胖症”是指这样的医学病症，其中过量的体脂肪已累积到可能对健康有不利影响的程度，从而导致减少的预期寿命和/或增加的健康问题。一般性肥胖通常通过评估体重指数(BMI)来确定，体重指数(BMI)是关联体重和身高的测量。特别地，如果人们的BMI在25kg/m2和30kg/m2之间，则他们被定义为超重，并且当BMI大于30kg/m2时，则他们被定义为肥胖。在本专利技术的上下文中，受试者优选具有高于30kg/m2，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于诊断患有肥胖症的受试者中的肝纤维化的体外方法，所述方法包括以下步骤：a1)测量受试者的生物样品中细菌16S rDNA的浓度或细菌16S rDNA的量与总DNA量的比率；和b)基于步骤a1)中的测量结果，诊断患有肥胖症的受试者中的肝纤维化。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.23 EP 14305597.81.一种用于诊断患有肥胖症的受试者中的肝纤维化的体外方法，所述方法包括以下步骤：a1)测量受试者的生物样品中细菌16SrDNA的浓度或细菌16SrDNA的量与总DNA量的比率；和b)基于步骤a1)中的测量结果，诊断患有肥胖症的受试者中的肝纤维化。2.一种用于选择患有肥胖症的受试者用于肝活检的体外方法，所述方法包括以下步骤：a1)测量受试者的生物样品中细菌16SrDNA的浓度或细菌16SrDNA的量与总DNA量的比率；和b)基于步骤a1)中的测量结果，选择患有肥胖症的受试者进行肝活检。3.一种用于选择患有肥胖症的受试者用于靶向肝纤维化和/或其并发症的治疗方案的体外方法，所述方法包括以下步骤：a1)测量受试者的生物样品中细菌16SrDNA的浓度或细菌16SrDNA的量与总DNA量的比率；和b)基于步骤a1)中的测量结果，选择患有肥胖症的受试者进行靶向肝纤维化和/或其并发症的治疗方案。4.一种治疗患有肥胖症和肝纤维化和/或其并发症的受试者的方法，所述方法包括以下步骤：a1)测量受试者的生物样品中细菌16SrDNA的浓度或细菌16SrDNA的量与总DNA量的比率；b)基于步骤a1)中的测量结果，选择患有肥胖症的受试者进行靶向肝纤维化和/或其并发症的药物治疗；和c)向步骤b)中选择的受试者施用靶向肝纤维化和/或其并发症的药物治疗。5.一种用于监测患有肥胖症和肝纤维化和/或其并发症的患者对靶向肝纤维化和/或其并发症的药物治疗的反应性的体外方法，所述方法包括以下步骤：a1)测量受试者的生物样品中细菌16SrDNA的浓度或细菌16SrDNA的量与总DNA量的比率；和b)基于步骤a1)中的测量结果，监测患者对所述药物治疗的反应性。6.根据权利要求1至5中任一项所述的体外方法，还包括将步骤a1)中测量的浓度或比率与阈值进行比较的步骤a2)。7.根据权利要求6所述的用于诊断肝纤维化的体外方法，其中在步骤a1)中测量的高于所述阈值的浓度或比率指示所述受试者中的肝纤维化。8.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·考特尼，B·勒卢威尔，M·费代里克，J·M·费尔南德斯雷亚尔，S·佩瑟，
申请(专利权)人：维欧梅尔公司，罗马第二大学，何塞普·特鲁塔博士赫罗纳生物医学研究所基金会，
类型：发明
国别省市：法国,FR