对丙型肝炎病毒具有感染抑制活性的抗体制造技术

本发明专利技术提供具有丙型肝炎病毒(HCV)感染抑制活性的抗丙型肝炎病毒E2蛋白抗体或抗原结合性抗体片段。本发明专利技术还提供具有特定可变区的、具有丙型肝炎病毒(HCV)感染抑制活性、显示逃逸突变株出现抑制性的抗丙型肝炎病毒E2蛋白抗体或抗原结合性抗体片段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对丙型肝炎病毒具有感染抑制活性的抗体
本专利技术涉及对丙型肝炎病毒具有感染抑制活性的抗体及其片段。
技术介绍
丙型肝炎病毒(C型肝炎病毒，HepatitisCvirus，以下有时也记载为HCV)是被分类为黄病毒科丙型肝炎病毒(Hepacivirus)属的RNA病毒，作为非A非B肝炎(非甲非乙肝炎)的主要原因病毒被鉴定(非专利文献1)。HCV主要通过输血而感染，但目前已经确立了高灵敏度的HCV的检测方法，因此通过输血而导致的新的HCV感染病人骤降。另一方面，现在已经推定：包含未显现出肝炎的病毒携带者在内的HCV持有者，在日本上升至200万人以上、全世界上升至1亿7000万人以上。最大的原因在于：因HCV感染而导致的肝炎的慢性化率高达70～80%或药物治疗不能显示充分的效果。由于HCV感染而引起的慢性肝炎、即丙型慢性肝炎，其后经过20几年之中有可能进展至肝硬化、最终恶化至肝癌。已知病状进行到肝硬化的丙型慢性肝炎病人可通过活体肝移植进行治疗，但活体肝移植后约半数复发肝炎，现状是没有防止肝炎复发的对策(非专利文献2)。为了防止活体肝移植后的肝炎复发，期望开发以病毒的感染抑制或排除为目的的抗体药物。作为HCV感染的最初过程的HCV与细胞表面结合，认为HCV包膜蛋白发挥作用，因此研究了制作针对HCV包膜蛋白的抗体。但是，丙型肝炎病人的10%左右在血清中可见抗HCV包膜蛋白抗体，由于抗HCV包膜蛋白抗体的出现而使丙型肝炎自然治愈者，占其中的约10%(非专利文献3)，因此认为由于抗HCV包膜蛋白抗体而治愈的病人只占全部丙型肝炎病人的仅1%左右。推测这是由于存在针对HCV包膜蛋白的抗体产生受到阻碍或抑制的机制(非专利文献4)。另外，还研究了将从多个抗HCV抗体阳性丙型慢性肝炎病人的血浆获得的免疫球蛋白混合而得的制剂。但是，明确了：来源于病人的抗HCV抗体混合制剂，自活体肝移植时给予的情形，也没有抑制血浆中HCV量(非专利文献5)。另一方面，非专利文献4中公开了：在哺乳动物中表达的、作为HCV的包膜蛋白之一的E2蛋白与存在于人细胞表面的CD81特异性结合。根据该实验结果尝试了从丙型肝炎病人分离显示抑制E2蛋白与CD81结合的NOB(Neutralisationofbinding)活性的抗体。作为其代表性的例子，使用噬菌体展示法，自感染了基因型1a的HCV的丙型慢性肝炎病人的骨髓淋巴细胞制作抗体基因文库，从中分离显示NOB活性的抗体(专利文献1)。并且，自感染了基因型1b的HCV的丙型肝炎病人的末梢B细胞制作杂交瘤，从中分离显示NOB活性的抗体(非专利文献6、专利文献2)。但是，还报道了：显示NOB活性的抗体未必均抑制感染(非专利文献7)。另外，将抗HCV抗体用作抗体药物时，由于病毒基因组突变有可能出现对于HCV感染抑制抗体的抑制活性获得耐性的病毒突变株、即逃逸突变株。由于抗HCV抗体的给予而出现HCV的逃逸突变株在使用黑猩猩的实验中得到了证实(非专利文献8)。在非专利文献9中，暗示了对基因型2a的HCV具有感染抑制活性的抗HCV抗体抑制逃逸突变株的出现，实际上还公开了暗示逃逸突变株的出现的数据(专利文献3)。另外，在专利文献3中，这些抗体未显示对基因型1b的HCV的感染抑制活性，另外，对公开的基因型1b的HCV的结合活性弱，因此认为这些抗体不具有对基因型1b的HCV的充分的感染抑制活性。并且，在专利文献3中，关于这些抗体对基因型2a以外的基因型的HCV是否抑制逃逸突变株的出现仍未解明。现有技术文献专利文献专利文献1：国际公开第2003/064473号；专利文献2：国际公开第2004/005316号；专利文献3：国际公开第2013/033319号；非专利文献非专利文献1：Choo等人、Science、1989年、第244卷、第359-362页；非专利文献2：Gane等人、LiverTransplantation、2003年、第9卷、第s28-s34页；非专利文献3：Matsuura等人、J.Virol.、1992年、第66卷、第1425-1431页；非专利文献4：Gerlach等人、Gastroenterology、1999年、第117卷、第933-941页；非专利文献5：Davis等人、LiverTransplantation、2005年、第11卷、第941-949页；非专利文献6：Hadlock等人、J.Virol.、2000年、第74卷、第10407-10416页；非专利文献7：Burioni等人、J.Virol.、2002年、第76卷、第11775-11779页；非专利文献8：Morin等人、PlosPathogens、2012年、第8卷、e1002895；非专利文献9：Keck等人、PlosPathogens、2012年、第8卷、e1002653。
技术实现思路
专利技术所要解决的课题对不限于特定基因型的HCV的多个基因型的HCV具有感染抑制活性的抗HCV抗体，不仅对感染了多个基因型的HCV的病人具有效果，而且对象病人的适用范围广，因而作为药物特别有用。因此，期望对多个基因型的HCV具有高的感染抑制活性的抗HCV抗体。并且，期望可强有力地抑制在干扰素和病毒唑治疗中难治性的基因型1b的HCV的感染的抗体。另外，逃逸突变株的出现成为将抗HCV抗体作为药物开发时的重大障碍。因此，期望难以诱导逃逸突变株的出现、显示逃逸突变株出现抑制性的抗HCV抗体。因此，本专利技术的目的在于提供抑制多个基因型的HCV的感染的抗HCV抗体。并且，本专利技术的另一目的在于提供显示HCV的逃逸突变株出现抑制性的抗HCV抗体。用于解决课题的手段本专利技术人为了解决上述的课题而进行了深入的研究，结果发现了：对多个基因型的HCV具有高的感染抑制活性的抗HCV抗体，并且发现了：显示逃逸突变株出现抑制性的抗HCV抗体。即，本专利技术提供以下的内容。(1)抗丙型肝炎病毒E2蛋白抗体或抗原结合性抗体片段，其具有丙型肝炎病毒(HCV)感染抑制活性。(2)上述(1)所述的抗体或抗原结合性抗体片段，其显示逃逸突变株出现抑制性。(3)上述(1)或(2)所述的抗体或抗原结合性抗体片段，其中，上述抗体或抗原结合性抗体片段包含以下的(a)或(b)的重链可变区：(a)重链可变区，其包含：由SEQIDNO:5所示氨基酸序列构成的CDR1、由SEQIDNO:6所示氨基酸序列构成的CDR2、和由SEQIDNO:7所示氨基酸序列构成的CDR3；(b)重链可变区，其包含SEQIDNO:2所示氨基酸序列。(4)上述(3)所述的抗体或抗原结合性抗体片段，其进一步包含轻链可变区。(5)上述(1)～(4)的任一项中所述的抗体或抗原结合性抗体片段，其中，上述抗体或抗原结合性抗体片段包含以下的(c)～(f)的任一项的轻链可变区：(c)轻链可变区，其包含：由SEQIDNO:8所示氨基酸序列构成的CDR1、由SEQIDNO:9所示氨基酸序列构成的CDR2、和由SEQIDNO:10所示氨基酸序列构成的CDR3；(d)轻链可变区，其包含：由SEQIDNO:23所示氨基酸序列构成的CDR1、由SEQIDNO:24所示氨基酸序列构成的CDR2、和由SEQIDNO:25所示氨基酸序列构成的CDR3；(e)轻链可变区，其包本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗丙型肝炎病毒E2蛋白抗体或抗原结合性抗体片段，其具有丙型肝炎病毒即HCV感染抑制活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.03.20 JP 2014-0589361.抗丙型肝炎病毒E2蛋白抗体或抗原结合性抗体片段，其具有丙型肝炎病毒即HCV感染抑制活性。2.权利要求1所述的抗体或抗原结合性抗体片段，其显示逃逸突变株出现抑制性。3.权利要求1或2所述的抗体或抗原结合性抗体片段，其中，上述抗体或抗原结合性抗体片段包含以下的(a)或(b)的重链可变区：(a)重链可变区，其包含：由SEQIDNO:5所示氨基酸序列构成的CDR1、由SEQIDNO:6所示氨基酸序列构成的CDR2、和由SEQIDNO:7所示氨基酸序列构成的CDR3；(b)重链可变区，其包含SEQIDNO:2所示氨基酸序列。4.权利要求1～3的任一项中所述的抗体或抗原结合性抗体片段，其中，上述抗体或抗原结合性抗体片段包含以下的(c)～(f)的任一项的轻链可变区：(c)轻链可变区，其包含：由SEQIDNO:8所示氨基酸序列构成的CDR1、由SEQIDNO:9所示氨基酸序列构成的CDR2、和由SEQIDNO:10所示氨基酸序列构成的CDR3；(d)轻链可变区，其包含：由SEQIDNO:23所示氨基酸序列构成的CDR1、由SEQIDNO:24所示氨基酸序列构成的CDR2、和由SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：胁田隆字，筱原绿，横川宽，中村纪子，
申请(专利权)人：日本国立感染症研究所，株式会社医学生物学研究所，东丽株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP