关于工频电磁辐射的趋化因子剂量标志物制造技术

本发明专利技术公开了一种检测工频电磁辐射的方法，其包括以下步骤：1）将实验动物置于辐射环境中；2）抽取实验动物血液，分离血清；3）检测血清中工频趋化因子标志物的含量，分析得到工频电磁环境的情况。其中，工频电磁辐射趋化因子标志物为MCP‑1、EOTAXIN‑1中的至少一种。该检测方法具有准确度高，灵敏度好，应用简便的特点。

Chemokine dose markers for power frequency electromagnetic radiation

The invention discloses a method for detecting the frequency of electromagnetic radiation, which comprises the following steps: 1) will be the animal under radiation environment; 2) from the experimental animal blood serum, serum separation; 3) the frequency of chemokine marker levels, analysis of power frequency electromagnetic environment. The power frequency electromagnetic radiation chemokine markers MCP 1, EOTAXIN 1 in at least one. The method has the advantages of high accuracy, good sensitivity and simple application.

【技术实现步骤摘要】
关于工频电磁辐射的趋化因子剂量标志物
本专利技术涉及趋化因子的标志物，特别涉及可检测工频电磁辐射的趋化因子标志物。
技术介绍
工频电磁场是由各种电压等级的输电线及各种电器所产生的一种极低频电磁场，其波长达6000km。居民生活环境中的工频电磁场主要由高压输电线路产生，由其对人体健康的影响也愈来愈引起人们的重视。2000年国际癌症研究所(IARC)将工频电磁场列为“可疑人类致癌物一类(2B)”。目前，由于流行病学和实验室证据的不足，国内外还没有确定的电磁场暴露限值的标准。为保护环境和工作人员健康，国内外学者对不同等级的电磁场与人体健康的关系进行了临床血细胞、生化、电解质等研究。免疫系统作为人体重要的防御屏障，在极低频电磁场引起机体健康影响中同样发挥着重要功能。国内外许多研究集中在对淋巴细胞、NK细胞、CD3细胞含量检测，免疫球蛋白水平分析，T、B淋巴细胞凋亡测定等方面，但结果并不一致。在对居住在高压输变电线廊下生活的居民进行相关免疫学指标的检测中发现，暴露组IgM含量显著高于对照组，提示磁场暴露对免疫功能有一定的增强作用。电磁场的强度、暴露时间及空间等因素都可以影响动物的免疫学功能，在一定强度和时间内可以增强机体的免疫反应，当强度增大时可抑制机体的免疫活性。研究发现，长期工作在30万伏特超高压环境中的工作人员，机体T淋巴细胞凋亡程度明显低于健康对照人群，细胞凋亡过少，则炎性反应会过强，易导致变态反应和自身免疫病及肿瘤。现有的研究结果中，还没有快速检测极低频电磁场对机体产生影响的免疫学指标，也不能确定极低频电磁场对人体产生促进或是抑制的剂量限值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于寻找机体受极低频电磁场照射后的时间和剂量标志物，以弥补现有技术的不足。本专利技术所采取的技术方案是：1)将实验动物置于辐射环境中；2)抽取实验动物血液，分离血清；3)检测血清中工频趋化因子标志物的含量，分析得到工频电磁环境的情况。优选的，实验动物为小鼠。优选的，工频电磁辐射趋化因子标志物为MCP-1、EOTAXIN-1中的至少一种。本专利技术提供的趋化因子标志物，具有准确度高，灵敏度好，应用简便的特点。附图说明图1MCP-1浓度变化曲线；其中，(A)为对照组和三个实验组小鼠血清MCP-1在各个时间点上的浓度值；(B)为0.5mT组小鼠血清MCP-1与对照组在各个时间点上的浓度比较；图2EOTAXIN-1浓度变化曲线；其中，(A)为对照组和三个实验组小鼠血清EOTAXIN-1在各个时间点上的浓度值；(B)为0.5mT组小鼠血清EOTAXIN-1与对照组在各个时间点上的浓度比较。具体实施方式实施例1动物分组及磁场暴露选择4～6周龄雄性BALB/c小鼠为研究对象，共290只。实验组根据极低频电磁场暴露的剂量不同分为3组，分别为0.1mT组、0.5mT组、2.5mT组，每组10只，每组每天暴露8h，持续照射1天、5天、10天、20天、30天、60天、90天，对照组在暴露开始前设有10只，于持续暴露各天数分设平行对照。实施例2血清的收集采用眼球后静脉丛取血法对每只小鼠进行取血。每只小鼠约获得800-1200ul外周血。样品于4℃冰箱中静置4-5小时后，4000rpm，4℃，离心15分钟，立即使用或零下80度分装冻存。各收集每组每天5个样品，每个样品60μl用于检测细胞因子浓度。实施例3ProcartaPlex多重检测试流程(1)准备标准品1)将一管标准品冻干管取出，2000xg离心10s2)加入250μL的1XUniversalAssayBuffer3)轻轻混匀30s,2000xg离心10s4)置于冰上5-10min备用(2)标准品的稀释(4倍)1)取出试剂盒中提供的PCR8联管用于稀释标准品2)向第一管中加入200μL的混合标准品作为标准品13)向管2-7中分别加入150μL的的1XUniversalAssayBuffer4)从管1中取50μL混合标准品加入管2中，上下吹打10次混匀，尽量避免气泡的产生。5)更换新的枪头，从管2中吸取50μL的稀释标准品转移到管3中，上下吹打10次混匀。更换新的枪头,按顺序依次转移到第7管中，第8管中加入200μl1XUniversalAssayBuffer。6)置于冰上备用(3)准备微球1)稀释10X的WashBuffer至1X备用，例如将20mLWashBufferConcentrate(10X)加入180mLddH2O中。此稀释液在2-8℃下可保存半年2)涡旋微球30s3)根据样本及标准品、空白对照的数量，向96孔板中每孔加入50μL的微球4)将96孔板放入磁性分离板中，确保孔板被牢牢卡住。待板静止2min，让微球沉底。然后将磁板快速倒置，倒出孔板中的液体。此过程中不可将96孔板从磁性分离板中取出。5)向每孔中加入150μL1X的WashBuffer，静置30s，然后将磁板倒置，倒出孔板中的液体6)在倒置的状态下，用纸巾吸附孔板表面的残留液体(4)微球与样本孵育1)每孔中分别加入25μL的UniversalAssayBuffer2)向指定的孔中分别加入25μL的标准品或样本3)向空白对照中加入25μLUniversalAssayBuffer4)孔板封膜，500rpm室温下震荡孵育60-120min或室温震荡孵育30min,然后4℃静置过夜孵育(孵育结束后，需室温震荡孵育30min后再进行下一步操作)(5)洗板1)将96孔板置于磁性分离板中，静置2min2)轻轻去除封膜，避免液体飞溅3)将孔板中的液体倒置去掉4)向每孔中加入150μLWashBuffer，静置30s，将孔板中的液体倒置去掉。重复步骤4，共洗2次5)最后一次清洗结束时，用纸巾吸附残留液体(6)稀释检测抗体(50X→1X)根据实际样本量准备检测抗体稀释液，每孔需要25μL的稀释液，稀释好的抗体冰上备用。(7)加入检测抗体1)向每孔中加入25μL稀释后的检测抗体2)使用新的封膜密封孔板3)将96孔板从磁性分离板中取出，至于孔板振荡器中500rpm室温震荡30min(8)洗板1)将96孔板置于磁性分离板中，静置2min2)轻轻去除封膜，避免液体飞溅3)将孔板中的液体倒置去掉4)向每孔中加入150μLWashBuffer,静置30s,将孔板中的液体倒置去掉。重复步骤4，共洗2次5)最后一次清洗结束时，用纸巾吸附残留液体(9)加入SA-PE1)向每孔中加入50μLSA-PE2)使用新的密封膜密封孔板3)将96孔板从磁性分离板中取出，至于孔板振荡器中500rpm室温震荡30min(10)洗板1)将96孔板置于磁性分离板中，静置2min2)轻轻去除封膜，避免液体飞溅3)将孔板中的液体倒置去掉4)向每孔中加入150μLWashBuffer,静置30s,将孔板中的液体倒置去掉。重复步骤4，共洗2次5)最后一次清洗结束时，用纸巾吸附残留液体(11)上机前准备1)向每孔中加入120μLReadingBuffer2)使用新的密封膜密封孔板3)将96孔板从磁性分离板中取出，至于孔板振荡器中500rpm室温震荡5min4)轻轻去除密封膜，放入Luminex仪器中读数Luminex技术检测结果：本次实验检测了9种趋化因子：MCP-1、MCP-3、MIP-1α、MIP-1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测工频电磁辐射的方法，其包括以下步骤：1)将实验动物置于辐射环境中；2)抽取实验动物血液，分离血清；3)检测血清中工频趋化因子标志物的含量，分析得到工频电磁环境的情况。

【技术特征摘要】
1.一种检测工频电磁辐射的方法，其包括以下步骤：1)将实验动物置于辐射环境中；2)抽取实验动物血液，分离血清；3)检测血清中工频趋化因子标志物的含量，分析得到工频电磁环境的情况。2.根据权利要求1所述的电磁辐射监测方法，其特征在于：所述实验动物为小鼠。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：丁振华，周良，郝帅，张颖，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44