一种超高效液相色谱‑串联质谱检测三乙膦酸铝的方法技术

本发明专利技术属于分析化学领域，涉及一种超高效液相色谱‑串联质谱检测三乙膦酸铝的方法，是在取样品中加入乙腈进行预处理，然后加入氯化钠，剧烈震荡后离心，取上层乙腈溶液；在乙腈溶液中加入无水硫酸镁和PSA吸附剂，剧烈震荡后离心，取上清液作为提取液，待测。使用超高效液相色谱—串联质谱测定提取液中乙基磷酸离子和亚磷酸离子的含量，最后利用公式计算提取液中三乙膦酸铝含量。本发明专利技术根据不同溶液中乙基磷酸离子和亚磷酸离子的比例，采用超高效液相色谱‑串联质谱法检测乙基磷酸和亚磷酸离子的含量，经计算、折算得到待测物中三乙膦酸铝的含量，符合食品安全国家标准的规定，适用于三乙膦酸铝残留量的准确、快速分析。

A method with tandem mass spectrometric detection phosethyl al ultra high performance liquid chromatography

The invention belongs to the field of analytical chemistry, and relates to a method of tandem mass spectrometry detection phosethyl al ultra high performance liquid chromatography, adding acetonitrile in samples of pretreatment, then adding sodium chloride, severe concussion after centrifugation, taking the acetonitrile solution; adding anhydrous Magnesium Sulfate and PSA adsorbent in acetonitrile solution. Severe concussion after centrifugation, the supernatant was used as the extract to be tested. The content of ethyl phosphate ion and phosphite ion in extraction liquid was determined by ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. Finally, the content of aluminium triethyl phosphate in extraction liquid was calculated by formula. According to the different phosphate ion solution and ethyl phosphite ion ratio, the content of ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry ethyl phosphite and phosphate ions, the content of phosethyl al analytes were obtained by calculation and conversion, in conformity with the provisions of the national food safety standard, accurate and applicable fast analysis of fosetyl aluminium residue.

【技术实现步骤摘要】
一种超高效液相色谱-串联质谱检测三乙膦酸铝的方法
本专利技术属于分析化学领域，涉及一种有机污染物的定量分析方法，具体地说，是一种利用超高效液相色谱-串联质谱同时测定乙基磷酸和亚磷酸离子的含量，通过计算其比例并折算成为三乙膦酸铝含量的定量方法。
技术介绍
三乙膦酸铝(fosetyl-aluminium)是一种有机磷类高效、广谱、内吸性低毒杀菌剂。它在植物体内可以上、下双向传导，对单轴霉菌属、霜霉属、疫霉属引起的病害有良好的防治效果，是目前国内外防治水稻稻瘟病、果树、蔬菜霜霉病、疫病应用较多的药剂。三乙膦酸铝由乙基磷酸离子和铝离子以化学键的形式构成，其在基质中通常解离后以化学离子乙基磷酸和亚磷酸离子的形式存在。传统的分析方法以络合滴定测定三乙膦酸铝含量[化工技术与开发,2007,36(1):39-41,35]，但是该方法操作复杂，在做痕量分析时，误差较大。近年来，随着色谱技术的普及，各类基于色谱分离后的分析技术也被应用于三乙膦酸铝的测定当中。常规方法使用三甲基硅重氮甲烷在恒温下进行衍生化[农药,2009,48(10):747-748,759]，或将三乙膦酸铝在密闭的反应瓶中完全碱解后生成乙醇[色谱,1993,11(5):285-287]，通过气相色谱法测定衍生化或碱解后的产物对三乙膦酸铝进行定量，但是这些方法前处理较复杂，实验条件较难掌控。考虑到三乙膦酸铝以离子的形式存在，有文献报道使用离子色谱分析样品离子的含量[MicrochemicalJournal,1995,52(1):68-76]，并使用乙基膦酸离子的含量进行定量，但是该方法容易受到复杂基质的干扰，影响测定结果。此外，液相色谱技术也被应用于三乙膦酸铝的定量分析当中，有文献报道使用离子对反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定三乙膦酸铝的含量[色谱,2009,27(6):849-851]，但是该方法的检出限较高，不能满足三乙膦酸铝残留分析的需求。我国的食品安全国家标准《食品中农药最大残留限量》(GB2763-2014)中规定三乙膦酸铝的残留定义为乙基磷酸和亚磷酸及其盐之和，以乙基磷酸表示。现有的文献中仅测定乙基磷酸的含量[JournalofAOACInternational,2003,86(4):832-838]，不能满足国家标准中关于三乙膦酸铝残留定义的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种超高效液相色谱-串联质谱检测三乙膦酸铝的方法，采用超高效液相色谱-串联质谱法检测乙基磷酸和亚磷酸离子的含量，同时通过计算其比例并折算成为三乙膦酸铝含量，用于三乙膦酸铝残留量的准确、快速分析。本专利技术所采用的技术原理：低毒杀菌剂--三乙膦酸铝在溶液中以乙基磷酸和亚磷酸两种形式存在，对两种酸进行离子化裂解，然后利用超高效液相色谱-串联质谱测定乙基磷酸和亚磷酸两种离子的含量。根据不同溶液中两种离子的存在比例基本为40：60的规律，将测定的离子含量经计算、折算即可得到待测物中三乙膦酸铝的含量。本专利技术所采用的技术方案：一种超高效液相色谱-串联质谱检测三乙膦酸铝的方法，其步骤如下：1、准确称取样品后加入乙腈进行预处理，然后以乙腈为标准按质量体积比为1：10～15(g/mL)的比例加入氯化钠，剧烈震荡1～3min后，以4000r/min的转速离心4～6min，取上层乙腈溶液；在乙腈溶液中按体积质量比为1：0.02～0.025(mL/g)的比例分别加入无水硫酸镁和PSA吸附剂，剧烈震荡1～3min后，以4000r/min的转速离心5～7min，取上清液作为提取液，待测。所述样品是果蔬样品、土壤样品或水样品。所述预处理过程是：在果蔬样品中按质量体积比为1：2～3(g/mL)的比例加入乙腈，然后高速匀浆2～5min；在土壤样品中按质量体积比为1：2～3(g/mL)的比例加入乙腈，然后振荡13～18min；在水样品中按体积比为1：2～3(mL/mL)的比例加入乙腈，然后振荡13～18min。2、使用超高效液相色谱—串联质谱测定提取液中乙基磷酸离子和亚磷酸离子的含量，其中乙基磷酸的母离子和定量离子对分别为109和81/63，亚磷酸的母离子和定量离子对分别为81和79/63。3、色谱工作条件：UPLC色谱柱为ACQUITYBEHHILIC(1.7μm，2.1mm×50mm)，柱温：35℃，流速：0.25mL/min，进样量：2μL；流动相：A相为乙腈，B相为0.05％甲酸水(10/90，v/v)，其梯度洗脱条件为：0～0.5min，流动相A保持10％；0.5～3.0min，流动相A从10％变为90％；3.0～3.5min，流动相A从90％变为10％；3.5～5.0min，流动相A保持10％；5.0min停止。4、质谱工作条件：扫描方式：电喷雾负离子(ESI-)扫描；检测方式：多反应监测(MRM)；雾化气：379.225kPa；喷雾电压：4500kV。5、根据提取液中乙基磷酸离子和亚磷酸离子的存在比例为40：60，利用如下公式计算提取液中三乙膦酸铝含量：三乙膦酸铝含量＝乙基磷酸离子含量×0.4+亚磷酸含量离子×0.6。本专利技术测定的对象为不同样品中三乙膦酸铝的含量，具体的样品可为苹果、香蕉、黄瓜、甘蓝等不同果蔬及水、土壤等。本专利技术根据不同溶液中乙基磷酸离子和亚磷酸离子的存在比例基本为40：60的规律，采用超高效液相色谱-串联质谱法检测乙基磷酸和亚磷酸离子的含量，经计算、折算得到待测物中三乙膦酸铝的含量，在10-500μg/L浓度范围内，乙基磷酸和亚磷酸离子的线性相关系数均大于0.999，所得结果更能体现三乙膦酸铝的含量，且误差在合理范围内，符合食品安全国家标准《食品中农药最大残留限量》中的规定，而且测定三乙膦酸铝的定量限为0.52μg/kg，适用于三乙膦酸铝残留量的准确、快速分析。附图说明图1是在不同溶液中乙基磷酸和亚磷酸离子的比例。图2是乙基磷酸和亚磷酸离子的裂解途径。具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。本专利技术建立一种利用超高效液相色谱-串联质谱法同时测定乙基磷酸和亚磷酸离子的含量，通过计算其比例并折算成为三乙膦酸铝含量。三乙膦酸铝在溶液中以乙基磷酸和亚磷酸两种形式存在，两种酸在溶液中的存在比例对三乙膦酸铝的定量存在影响。实施例一研究不同溶液中乙基磷酸离子和亚磷酸离子的存在比例，分别配制0.5μg/mL的三乙膦酸铝溶液，其中一组为乙腈与水的比例分别为4:1、2:1、1:1、1:2和1:4，另一组为甲醇与水的比例分别为4:1、2:1、1:1、1:2和1:4。使用乙基磷酸和亚磷酸两种酸的标准溶液对三乙膦酸铝溶液中的两种酸进行定量，并计算其与酸总量的比例。实验结果见图1，可以看出，乙基磷酸和亚磷酸两种离子的比例均约为40％和60％。实施例二三乙膦酸铝在溶液中以乙基磷酸和亚磷酸两种形式存在，两种酸在离子化的裂解规律是其准确定量的关键。本专利技术首先选择负离子模式进行激发，使用直接进样的方式优化质谱分析乙基磷酸和亚磷酸的条件。乙基磷酸和亚磷酸分子在质谱中的裂解碎片如图2所示，在一级质谱中，乙基磷酸和亚磷酸分别产生稳定的[M－H]本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种超高效液相色谱‑串联质谱检测三乙膦酸铝的方法，其特征在于，其步骤如下：1)、准确称取样品后加入乙腈进行预处理，然后以乙腈为标准按质量体积比为1：10～15的比例加入氯化钠，剧烈震荡1～3min后，以4000r/min的转速离心4～6min，取上层乙腈溶液；在乙腈溶液中按体积质量比为1：0.02～0.025的比例分别加入无水硫酸镁和PSA吸附剂，剧烈震荡1～3min后，以4000r/min的转速离心5～7min，取上清液作为提取液，待测；所述样品是果蔬样品、土壤样品或水样品；所述预处理过程是：在果蔬样品中按质量体积比为1：2～3的比例加入乙腈，然后高速匀浆2～5min；在土壤样品中按质量体积比为1：2～3的比例加入乙腈，然后振荡13～18min；在水样品中按体积比为1：2～3的比例加入乙腈，然后振荡13～18min；2)、使用超高效液相色谱—串联质谱测定提取液中乙基磷酸离子和亚磷酸离子的含量，其中乙基磷酸的母离子和定量离子对分别为109和81/63，亚磷酸的母离子和定量离子对分别为81和79/63；3)、色谱工作条件：UPLC色谱柱为ACQUITY

【技术特征摘要】
1.一种超高效液相色谱-串联质谱检测三乙膦酸铝的方法，其特征在于，其步骤如下：1)、准确称取样品后加入乙腈进行预处理，然后以乙腈为标准按质量体积比为1：10～15的比例加入氯化钠，剧烈震荡1～3min后，以4000r/min的转速离心4～6min，取上层乙腈溶液；在乙腈溶液中按体积质量比为1：0.02～0.025的比例分别加入无水硫酸镁和PSA吸附剂，剧烈震荡1～3min后，以4000r/min的转速离心5～7min，取上清液作为提取液，待测；所述样品是果蔬样品、土壤样品或水样品；所述预处理过程是：在果蔬样品中按质量体积比为1：2～3的比例加入乙腈，然后高速匀浆2～5min；在土壤样品中按质量体积比为1：2～3的比例加入乙腈，然后振荡13～18min；在水样品中按体积比为1：2～3的比例加入乙腈，然后振荡13～18min；2)、使用超高效液相色谱—串联质谱测定提取液中乙基磷酸离子和亚磷酸离子的含量，...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩丙军，李雅，何燕，黄海珠，林冰，汤建彪，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院分析测试中心，
类型：发明
国别省市：海南,46