一种车前子药材与其配方颗粒中四种成分的含量测定方法组成比例

本发明专利技术涉及一种车前子药材与其配方颗粒中京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量测定方法。其特征：以乙腈为A相、0.5％乙酸为B相，经4次比例变换梯度洗脱，流速0.3mL/min；柱温30℃；检测波长：京尼平苷酸为239nm、咖啡酸为325nm、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷为330nm；同时测定了车前子药材与其配方颗粒中四成分的含量。波峰保留时间京尼平苷酸约3分钟、咖啡酸约6.5分钟、毛蕊花糖苷约10.7分钟、异毛蕊花糖苷约12.5分钟，在15分钟内四种成分出峰完毕，且各波峰分离良好，分离度都在3以上。方法简便、快捷，易于普及掌握。

Method for measuring content of four components in plantain seed medicine and its dispensing granule

The present invention relates to a method for determining content of Plantago medicinal granules and geniposidic acid, caffeic acid, verbascoside and acteoside. Its characteristics: with acetonitrile as A phase, 0.5% acetic acid is B, after 4 times the proportion of transform gradient elution, flow rate of 0.3mL/min; column temperature is 30 DEG C; detection wavelength: geniposidic acid 239nm, caffeic acid 325nm, verbascoside and ISO verbascoside for 330nm; at the same time the content of Semen Plantaginis and herbs in the four component of the granules was determined. The peak retention time of geniposidic acid and caffeic acid in about 3 minutes, about 6.5 minutes of verbascoside in about 10.7 minutes, verbascoside in about 12.5 minutes, 15 minutes of four components of the peak is completed, and the peak separation is good, the degree of separation was more than 3. The method is simple, fast and easy to popularize.

【技术实现步骤摘要】
一种车前子药材与其配方颗粒中四种成分的含量测定方法
一种车前子药材及其配方颗粒中京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量测定方法。
技术介绍
车前子为车前科植物车前PlantagoasiaticaL.或平车前PlantagodeprossaWilld.的干燥成熟种子。是一种常用中药，具清热利尿，渗湿止泻，明目，祛痰的功效。用于热淋涩痛，水肿胀满，暑湿泄泻，目赤肿痛，痰热咳嗽。车前子主含黄酮类、三萜类、挥发油、多糖类及其他等。黄酮类有木犀草素、高车前苷、车前甙等；三萜类有熊果酸、齐墩果酸等；挥发油有2，6二叔丁基对甲酚、3-叔丁基-4-羟基茴香醚等；糖类有L-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-葡萄糖等；其他有京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷等。其质量标准在中国药典2015年版一部车前子药材项下，收载了京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的梯度洗脱HPLC定量测定，二种成分的HPLC运行时间是50分钟。文献虽有采用HPLC以梯度洗脱的方式，测定盐制车前子中京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷三成分含量的报道，但运行时间至少也要40分钟，而且未报道波峰分离图谱。目前还未查阅到同时测定车前子药材与其配方颗粒中京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷四种成分的含量报道。在上述背景情况下，为简便、快捷、多指标控制车前子药材及其配方颗粒的质量，专利技术了以乙腈为A相、0.5％乙酸为B相，采用梯度洗脱方式，即0～1min，6％～15％A；1～13min，15％～20％A；13～13.5min，20％～6％A；13.5～20min，6％A；流速0.3mL/min；柱温30℃；检测波长：京尼平苷酸为239nm、咖啡酸为325nm、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷为330nm；在15分钟内测定京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷四成分含量的快速测定方法。车前子药材配方颗粒的制备方法取车前子6500-6700g，分别加水8倍量，煎煮提取二次，每次1-2小时，滤过，滤液70℃减压浓缩，浓缩液喷雾干燥或70℃减压干燥，加糊精适量，混匀，制粒成1000g，分装，即得车前子配方颗粒。
技术实现思路
以乙腈为A相、0.5％乙酸为B相，采用梯度洗脱方式，即0～1min，6％～15％A；1～13min，15％～20％A；13～13.5min，20％～6％A；13.5～20min，6％A；流速0.3mL/min；柱温30℃；检测波长：京尼平苷酸为239nm、咖啡酸为325nm、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷为330nm；在15分钟内京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷出峰完毕，波峰分离良好。方法简便、快捷、易于普及实施。通过方法学考察，京尼平苷酸进样量在0.2921～2.921μg，与峰面积呈良好的线性关系(见表1、图1)，回归方程为Y＝52.781X+0.8012，r＝0.9999；咖啡酸进样量在0.0034～0.0336μg，与峰面积呈良好的线性关系(见表2、图2)，回归方程为Y＝171.34X-0.022，r＝0.9997；毛蕊花糖苷进样量在0.0476～0.476μg，与峰面积呈良好的线性关系(见表3、图3)，回归方程为Y＝63.501X-0.005，r＝0.9996；异毛蕊花糖苷进样量在0.1027～1.027μg，与峰面积呈良好的线性关系(见表4、图4)，回归方程为Y＝61.501X-0.031，r＝0.9996。采用加样回收实验，结果表明：京尼平苷酸的平均回收率为99.31％，RSD为1.51％(n＝9，见表5)；咖啡酸的平均回收率为98.64％，RSD为1.40％(n＝9，见表6)；毛蕊花糖苷的平均回收率为98.23％，RSD为1.62％(n＝9，见表7)；异毛蕊花糖苷的平均回收率为99.46％，RSD为1.99％(n＝9，见表8)。精密度(见表9)、稳定性(见表10)、重复性(见表11)，均符合方法学要求。适用于车前子药材与其配方颗粒中京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量测定。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案为：(1)色谱条件与系统适用性试验以乙腈为A相、0.5％乙酸为B相，采用梯度洗脱方式，即0～1min，6％～15％A；1～13min，15％～20％A；13～13.5min，20％～6％A；13.5～20min，6％A；流速0.3mL/min；柱温30℃；检测波长：京尼平苷酸为239nm、咖啡酸为325nm、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷为330nm；理论板数按京尼平苷酸峰计算应不低于3000；(2)对照品溶液的制备精密称取京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成质量浓度分别为0.2921，0.0034，0.0476，0.1027mg/mL的混合对照品溶液；(3)供试品溶液的制备取车前子药材细粉1.5g，精密称定；或车前子配方颗粒0.5g，研细，精密称定；分别置棕色具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇25ml，密塞，称定重量，药材细粉以功率250W，频率33kHz超声处理30分钟；配方颗粒以功率250W，频率33kHz超声处理10分钟；放冷，再称定重量，用60％甲醇补足各自减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm的微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液；(4)测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量(见表12)。本专利技术的原理如下：京尼平苷酸属于环烯醚萜类与糖结合成的苷；咖啡酸属于酚酸类化合物；毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷则都属于苯丙素苷类化合物，水解后形成1分子咖啡酸和去咖啡酰毛蕊花糖苷与去咖啡酰异毛蕊花糖苷，都是偏水溶性化合物，易溶于含水醇。从其紫外光谱图得知，京尼平苷酸在约239nm(图5)、咖啡酸在约325nm(图6)、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷在约330nm(图7、图8)有最大吸收，所以选择其最大吸收为检测波长，进行含量测定。直接以含水甲醇超声提取药材或配方颗粒中的四种成分，滤过后，进样即可。无萃取、无蒸干、简便、快捷、实用。通过经时地调整A相和B相体积比，使四种成分在15分钟内出峰完毕。再依据该四种成分的进样量在一定范围内，与其峰面积呈现良好的线性关系，而用于定量测定。本专利技术的创新点及有益效果如下：(1)以乙腈为A相、0.5％乙酸为B相，采用梯度洗脱方式，即0～1min，6％～15％A；1～13min，15％～20％A；13～13.5min，20％～6％A；13.5～20min，6％A；流速0.3mL/min；柱温30℃；检测波长：京尼平苷酸为239nm、咖啡酸为325nm、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷为330nm；在15分钟内使京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷出峰完毕，且波峰分离良好。方法简便、快捷、易于普及实施，为首次报道。(2)中国药典2015年版一部车前子药材项下，收载的京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的梯度洗脱HPLC定量测定，二种成分的HPLC运行时间是50分钟。本专利技术测定车前子的四种成分，其运行时间才15分钟，测定效率是药典方法的3倍以上。(3)本申请能在15分钟内，使京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷四成分测定完毕，且波峰分离度良好，其关键技术还在于将流动相的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种车前子药材与其配方颗粒中京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量测定方法，其特征在于：(1)色谱条件与系统适用性试验 以乙腈为A相、0.5％乙酸为B相，采用梯度洗脱方式，即0～1min，6％～15％A；1～13min，15％～20％A；13～13.5min，20％～6％A；13.5～20min，6％A；流速0.3mL/min；柱温30℃；检测波长：京尼平苷酸为239nm、咖啡酸为325nm、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷为330nm；理论板数按京尼平苷酸峰计算应不低于3000；(2)对照品溶液的制备 精密称取京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成质量浓度分别为0.2921，0.0034，0.0476，0.1027mg/mL的混合对照品溶液；(3)供试品溶液的制备 取车前子药材细粉1.5g，精密称定；或车前子配方颗粒0.5g，研细，精密称定；分别置棕色具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇25ml，密塞，称定重量，药材细粉以功率250W，频率33kHz超声处理30分钟；配方颗粒以功率250W，频率33kHz超声处理10分钟；放冷，再称定重量，用60％甲醇补足各自减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm的微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液；(4)测定法 分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量。...

【技术特征摘要】
1.一种车前子药材与其配方颗粒中京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量测定方法，其特征在于：(1)色谱条件与系统适用性试验以乙腈为A相、0.5％乙酸为B相，采用梯度洗脱方式，即0～1min，6％～15％A；1～13min，15％～20％A；13～13.5min，20％～6％A；13.5～20min，6％A；流速0.3mL/min；柱温30℃；检测波长：京尼平苷酸为239nm、咖啡酸为325nm、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷为330nm；理论板数按京尼平苷酸峰计算应不低于3000；(2)对照品溶液的制备精密称取京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成质量浓度分别为0.2921，0.0034，0.0476，0.1027mg/mL的混合对照品溶液；(3)供...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛丽颖，田伟，甄亚钦，王鑫国，韩桂茹，
申请(专利权)人：河北中医学院，
类型：发明
国别省市：河北,13