一种猕猴桃根部内生放线菌的分离及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种猕猴桃根部内生放线菌菌及其应用，猕猴桃根部内生放线菌为球孢链霉菌，命名为球孢链霉菌SCAU‑1，保藏编号为CCTCC NO：M 2016577。本发明专利技术从患溃疡病猕猴桃植株根部中分离出的功能内生放线菌菌，不仅促进植物生长也可以明显抑制植物病原真菌和病原细菌的生长的能力，可用于“肥药兼效型”微生物肥料的制作，促进猕猴桃的生长；连续三次盆栽实验显示SCAU‑1发酵液经清水稀释后，采用灌根方式对猕猴桃苗表现出明显的促生作用，能够明显提高猕猴桃苗期的根数、根长、株高、叶片数量和叶面积。

Isolation and application of Endophytic Actinomycetes from Actinidia chinensis root

The invention discloses an actinomycete bacteria and its application in kiwifruit root, actinomycete Streptomyces globisporus born Kiwi root, named Streptomyces SCAU 1, the preservation number is CCTCC NO:M 2016577. Actinomycetes isolated from the invention of the ulcer of the plant roots in kiwifruit function, not only the ability to promote plant growth can also inhibit plant pathogenic fungi and pathogenic bacteria growth, can be used for making fertilizer and microbial fertilizer effect \, promote the growth of kiwifruit; three consecutive pot experiments show that SCAU 1 fermentation broth by water dilution, on Kiwifruit seedlings showed significant growth promoting effect by root irrigation, can significantly improve the kiwifruit seedling root number, root length, plant height, leaf number and leaf area.

【技术实现步骤摘要】
一种猕猴桃根部内生放线菌的分离及其应用
本专利技术属于微生物
，尤其涉及一种猕猴桃内生放线菌的分离及其应用。
技术介绍
猕猴桃营养非富，汁多味美，被人们誉为“水果之王”，是理想的绿色食品，近年来需求日益增加。但是因为果农一味追求高产，采用不科学的栽培管理方式，如氮磷肥的重施、钾肥的轻施，有机肥的缺施等导致猕猴桃易患溃疡病、叶片黄化病等病害，致使猕猴桃优果率下降、土壤肥力急速削减，严重影响猕猴桃产量及品质。微生物肥料能够有效的改良土壤肥力，提高化肥的利用率同时提高能源利用率。实践证明，微生物肥料在绿色有机食品生产、农业生态环境保护以及高产、优质、高效农业的持续发展中发挥着重要的作用。微生物肥料的功能核心是有益微生物，施入土壤后，能固定空气中的氮素，活化土壤中的养分，改善植物的营养环境，微生物在生命活动过程中产生活性物质，刺激植物的生长。但是当前的微生物肥料普遍存在功能单一、菌株活性退化的问题，因此，挖掘新的功能微生物对于多功能微生物肥料的研发具有重要意义。内生菌是一类生活在活体植物组织内、不会引起植物明显病害的微生物，能作为外源基因的载体，具有促进植物生长、抗逆境、抗病害、增加宿主植物的他感作用以及对病虫害的防治等作用。猕猴桃根部内生菌丰富，而患病植株会诱导自身根部的微生物群落发生响应变化，以患溃疡病的猕猴桃植株根部为分离材料，可以提高具有潜在抗病促生的功能微生物的分离效率。以患溃疡病的猕猴桃植株根部为分离源，进行内生放线菌的分离筛选对于挖掘新的具有抗病促生复合功能的微生物菌种资源并应用于新型复合微生物菌剂的开发具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种猕猴桃内生放线菌及其应用，通过综合评价筛选猕猴桃内部放线菌的功能特性，旨在解决当前微生物肥料生产菌种单一、菌株优良性状退化、猕猴桃专用微生物菌剂环境适应性弱等问题。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种猕猴桃根部内生放线菌，所述猕猴桃根部内生放线菌为球孢链霉菌，命名为球孢链霉菌SCAU-1(StreptomycesglobisporusSCAU-1)，已于2016年10月18日保藏至武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为：CCTCCNO：M2016577。该菌具有较广泛的抗菌作用，同时能促进植物生长，兼具“肥药”双效功能，使用该菌制成的微生物肥料对于在农业种植业中减少化学肥料和农药施用具有重要意义。本专利技术的另一目的在于一种猕猴桃根部内生放线菌的分离方法，采集患溃疡病的猕猴桃根部样品，用0.1％Tween20清洗30s，无菌水冲洗3次，75％乙醇浸泡5min，无菌水冲洗3次，有效氯含量2％次氯酸钠溶液浸泡3-5min，无菌水冲洗3次；10％NaHCO3浸泡10min，无菌水清洗3次，然后研磨成匀浆后接于TSA培养基平板中，在28℃导致培养30d，根据菌落大小、形态和色泽等表观特征挑取单菌落并进行划线纯化，通过分离获得32株菌落形态各不相同的菌株。进一步的，该菌株的生物学特征如下：该菌株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、丁香假单胞菌、玉米纹枯病菌、西瓜枯黄病菌和番茄早疫病菌具有抑制作用，IAA产量大于40mg/L，可产生纤维素酶。本专利技术的另一目的在于一种利用权利要求1所述猕猴桃内生放线菌制备的发酵液。进一步的，包括：将筛选得到的球孢链霉菌SCAU-1活化后接种于高氏一号培养液中，30℃，120r/min的恒温摇床中培养，培养96h后，作为种子液以1:1比例加入高氏一号培养基，30℃，120r/min的恒温摇床中培养96h使其活菌数达到10亿以上，取出备用。本专利技术的另一目的在于一种利用猕猴桃内生放线菌制备的球孢链霉菌SCAU-1菌液体菌剂。本专利技术的另一目的在于一种猕猴桃内生放线菌发酵液在猕猴桃种植中的应用。进一步的，将按50-200比例稀释SCAU-1菌株发酵液，在猕猴桃移栽时，将SCAU-1进行猕猴桃灌根处理，活菌含量约为2×107cfu/ml。本专利技术发酵液在猕猴桃盆栽中的应用，将按50-200比例稀释的SCAU-1菌株的发酵液采用灌根的方式进行猕猴桃苗的接菌处理。本专利技术的有益技术效果是：本专利技术提供的猕猴桃内生放线菌及其应用，从猕猴桃中分离出特异内生放线菌，不仅可以促进植物的生长，还可以抑制植物病原真菌和细菌的生长，且具备高效纤维素降解能力，可用于抗病促生型多功能微生物肥料的制作，改善土壤理化性质，促进植物生长；连续三次盆栽实验显示SCAU-1发酵液经清水稀释后，采用灌根的方式对猕猴桃表现出明显的促生作用，能够明显提高猕猴桃苗期的根数、根长、株高、叶片数量和叶面积。本专利技术的球孢链霉菌SCAU-1，具有较广泛的抗菌作用，同时能促进植物生长，具有“肥药”兼效功能，使用该菌制成的发酵菌剂对于在农业种植业中减少化学肥料和农药施用具有重要意义；菌株具有广泛的抗菌活性，高效纤维素降解能力，同时产生IAA，对植物具有明显的促进生长作用，表现出多重生物学功能。该菌制作的生物肥料能够促进猕猴桃等植物的生长，同时促进猕猴桃品质。对于在猕猴桃栽培中开展“减肥减药”具有潜在应用价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术实施例提供的猕猴桃内生放线菌的制备方法流程图；图2是本专利技术实施例提供的猕猴桃盆栽实验前后对比图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术实施例的猕猴桃内生放线菌，经形态、生理、分子鉴定为球孢链霉菌(Streptomycesglobisporus)，命名为球孢链霉菌SCAU-1(ShreptamyccsglablsporusSCAU-1)，已于2016年10月18日保藏至武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为：CCTCCNO：M2016577。如图1所示，本专利技术实施例的猕猴桃内生放线菌的制备方法包括以下步骤：S101：猕猴桃选择，采自四川传统猕猴桃主产区-都江堰，植物体患溃疡病；S102：猕猴桃根部内生放线菌的分离，以患溃疡病猕猴桃根部为分离材料，将根剪短成1cm左右，利用75％酒精以及2％次氯酸钠表面消毒。研磨成匀浆后涂布于高氏一号培养基平板中，以最后一次洗涤水作对照，以检测表面消毒是否彻底；S103：在28℃导致培养30d，根据菌落大小、形态和色泽等表观特征挑取单菌落并进行划线纯化。通过分离，共获得32株菌落形态各不相同的菌株。下面结合具体实施例对本专利技术的应用原理作进一步的描述。(一)球孢链霉菌(Streptomycesglobisporus)SCAU-1菌株筛选1、猕猴桃选择采自四川传统猕猴桃种植基地-都江堰，猕猴桃患溃疡病；2、猕猴桃内生放线菌的分离采用患溃疡病猕猴桃根部样品，用0.1％Tween20清洗30s，无菌水冲洗3次，75本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猕猴桃根部内生放线菌，其特征在于，所述猕猴桃根部内生放线菌为球孢链霉菌，命名为球孢链霉菌SCAU‑1，保藏编号为：CCTCC NO：M 2016577。

【技术特征摘要】
1.一种猕猴桃根部内生放线菌，其特征在于，所述猕猴桃根部内生放线菌为球孢链霉菌，命名为球孢链霉菌SCAU-1，保藏编号为：CCTCCNO：M2016577。2.一种如权利要求1所述猕猴桃根部内生放线菌的分离方法，其特征在于，采集患溃疡病的猕猴桃根部样品，用0.1％Tween20清洗30s，无菌水冲洗3次，75％乙醇浸泡5min，无菌水冲洗3次，有效氯含量2％次氯酸钠溶液浸泡3-5min，无菌水冲洗3次；10％NaHCO3浸泡10min，无菌水清洗3次，然后研磨成匀浆后接于TSA培养基平板中，在28℃导致培养30d，根据菌落大小、形态和色泽等表观特征挑取单菌落并进行划线纯化，通过分离获得32株菌落形态各不相同的菌株。3.根据权利要求1或2所述猕猴桃根部内生放线菌，其特征在于，该菌株的生物学特征如下：该菌株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、丁香假单胞菌、玉米纹枯病菌、西瓜枯黄病菌和番茄早疫病菌具有抑制作用，IAA产量大于40mg/L，可产生纤维素酶。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：辜运富，吴海冰，彭漪，尼玛扎西，刘松青，陈强，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川,51