芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了生物防治领域的一种芽孢杆菌及其应用；所述芽孢杆菌菌株为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)C1，保藏号为GDMCC No.60046；所述应用为作为生防菌株在拮抗作物病原菌中的应用；作为抑制作物病原菌的脂肽类和/或蛋白质的发酵菌株的用途；作为促生菌株在促进作物生长中的应用；作为植物生长素的发酵菌株的用途。本发明专利技术菌株具有广谱抑菌活性；不产生对禾谷镰刀菌具有抑制作用的脂肽类物质，但产生对对禾谷镰刀菌具有抑制作用的蛋白质；菌株C1对玉米的生长具有促进作用，与对照相比，实验组玉米的根长、茎长分别是对照组的3.15倍、3.05倍，根、茎、种子重量分别是对照组的5.02倍、4.33倍、1.4倍。但是，菌株C1仅产生少量的生长素。

Bacillus and its application

The invention discloses a Bacillus biological control and its application; the Bacillus strain was Bacillus methylotrophicus (Bacillus methylotrophicus) C1, GDMCC preservation number is No.60046; the application is used as biocontrol strains in antagonistic crop pathogens in use as lipopeptide fermentation strains; inhibition crop pathogens and / or protein; as promoting strains in promoting the application of crop growth in; use as fermentation strains of auxin. The strain with broad-spectrum antimicrobial activity; does not produce lipopeptide has an inhibitory effect on Fusarium graminearum, but has inhibitory effect on the Fusarium graminearum protein; strain C1 has the effect of promoting the growth of maize, compared with the control group, the experimental group of maize root length and stem length were 3.15 in the control group times, 3.05 times, roots, stems and seeds weight control group respectively 5.02 times, 4.33 times, 1.4 times. However, strain C1 produced only a small amount of auxin.

【技术实现步骤摘要】
芽孢杆菌及其应用
本专利技术涉及生物防治领域，具体涉及一种芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
芽孢杆菌(Bacillus)因可以产生具有抑菌、抗肿瘤、免疫增强等活性的多糖、蛋白质等物质而成为人们研究的热点。此外，芽孢杆菌还可以用于生物防治。除苏云金芽孢杆菌产生的伴孢晶体可以毒杀鳞翅目的幼虫而被开发为细菌杀虫剂外，芽孢杆菌产生的孢子可以长久存在于自然环境中因而可以开发为经济实用的生物农药。解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)，枯草芽孢杆菌(B.subtilis)，巴氏芽孢杆菌(B.pasteurii)，蜡样芽孢杆菌(B.cereus)和蕈状芽孢杆菌(B.mycoides)都可以用作控制不同作物真菌疾病的生物制剂。蜡样芽孢杆菌(B.cereus)AR156可以有效诱导拟南芥抑制由丁香假单胞菌番茄致病变种DC3000引起的病变；解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)FLN13对从病变小麦中筛选的5种镰刀菌都具有抗性作用，并且解淀粉芽孢杆菌FLN13与植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)SLG17的混合物应用于大田中的抽穗期至开花期小麦时可以降低小麦赤霉病指数；两种植物内生菌B.oryzicola菌株YC7007和YC7010T具有抗微生物、促进水稻生长和系统诱导抑制活性。但是，上述生防菌都仅对农作物或水果疾病有防治作用，目前还没有对引起谷类(小麦、大麦、玉米)和蔬菜水果(黄瓜、番茄)疾病的某些植物病原菌都有抑制作用的生物制剂的报道。基于上述现状，经检索，2013年王洪梅等研究的甲基营养芽孢杆菌N5对番茄青枯病致病菌茄科劳尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)具有抑制作用。但是，N5显现如下特性：第一，N5菌落周边不规则；第二，N5培养温度为30℃；第三，N5发酵液提取的脂肽类物质具有抑菌作用；第四，N5发酵液用硫酸铵提取的粗蛋白仅30％～50％饱和度具有抑菌作用。2013年和2014年，黄霄等研究的甲基营养芽孢杆菌BM-24对香蕉枯萎病菌尖孢镰刀菌古巴专化型Fusariumoxysporumf.sp.cubense(FOC)具有抑菌活性，并且，BM-24菜籽饼发酵液对粉蕉枯萎病具有一定的防治作用，还可以促进粉蕉苗的生长。粉蕉枯萎病是制约粉蕉生产的主要因素，粉蕉是芭蕉属一个不可替代的香蕉杂交栽培种，易被香蕉枯萎病菌1号生理小种侵染。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷，本专利技术的目的是提供一种芽孢杆菌及其应用。本专利技术所涉的芽孢杆菌菌株为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)C1，保藏号为GDMCCNo.60046，能够作为生防菌株起到拮抗作物病原菌中的作用；能够作为抑制作物病原菌的脂肽类和/或蛋白质的发酵菌株，能够作为促生菌株促进作物生长，能够作为植物生长素的发酵菌株本专利技术菌株具有广谱抑菌活性；不产生对禾谷镰刀菌具有抑制作用的脂肽类物质，但产生对对禾谷镰刀菌具有抑制作用的蛋白质。本专利技术是通过以下技术方案实现的：第一方面，本专利技术提供一种芽孢杆菌，所述芽孢杆菌菌株为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)C1，保藏号为GDMCCNo.60046。优选地，所述芽孢杆菌的16SrDNA序列如SEQIDNO.3所示。优选地，所述芽孢杆菌的形态特征包括：短杆状，0.5～1.7×1.6～4.3μm；革兰氏染色呈紫色；菌落乳白色、圆形、较湿润、边缘较规则。优选地，所述芽孢杆菌的培养条件包括：温度为25～46℃、pH值为4～9、装液量为每250mL体积装培养液25～200mL。更优选地，所述芽孢杆菌的培养条件包括：温度为39℃、pH值为7、装液量为每250mL体积装培养液25mL。优选地，所述芽孢杆菌的生理生化特征包括如表2和表3所示的特性。第二方面，本专利技术提供一种所述芽孢杆菌作为生防菌株在拮抗作物病原菌中的应用。优选地，所述病原菌包括串珠镰刀菌、禾谷镰刀菌、瓜类炭疽病菌、尖孢镰刀菌、玉米弯孢菌。第三方面，本专利技术提供一种所述芽孢杆菌作为抑制作物病原菌的蛋白质的发酵菌株的用途。优选地，所述病原菌包括禾谷镰刀菌。第四方面，本专利技术提供一种所述芽孢杆菌作为促生菌株在促进作物生长中的应用。优选地，所述作物包括玉米。第五方面，本专利技术提供一种所述芽孢杆菌作为植物生长素发酵菌株的用途。与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：1、从抗菌谱上来讲，本专利技术的菌株甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)C1是一株对禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum，引起小麦、大麦赤霉病和玉米穗腐病)、串珠镰刀菌(Fusariummoniliforme，引起玉米穗腐病、玉米弯饱菌(Curvularialunata，引起玉米叶斑点病)、尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporium，引起番茄镰刀菌枯萎病)和瓜类炭疽病菌(Colletotrichumorbiculare，引起黄瓜炭疽病)等5种植物病原菌都有抑制作用的菌株。2、从抗菌机制上来讲，本专利技术甲基营养型芽孢杆菌C1菌株是通过产生抗性蛋白对禾谷镰刀菌的生长具有抑制作用，并且，菌株C1对玉米的生长具有促进作用。3、现有甲基营养芽孢杆菌N5(2013年王洪梅等报道)相比，本专利技术的菌株具备如下特性：(1)C1菌落规则、较圆，而N5菌落周边不规则；(2)C1最适培养温度为39℃，而N5培养温度为30℃；(3)C1发酵液提取的脂肽类物质不具有抑菌作用，而N5发酵液提取的脂肽类物质具有抑菌作用；(4)C1发酵液用硫酸铵不同饱和度(0～30％饱和度、30％～50％饱和度和50％～80％饱和度)提取的粗蛋白质都具有抑菌作用，而N5发酵液用硫酸铵提取的粗蛋白仅30％～50％饱和度具有抑菌作用。4、与现有甲基营养芽孢杆菌BM-24(2013年和2014年，黄霄等)相比，本专利技术菌株C1抑制的尖孢镰刀菌主要引起番茄镰刀菌枯萎病。因此，菌株C1与BM-24抑制的病原菌不同。附图说明通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更明显：图1拮抗菌株对病原菌的抑制；其中：A为菌株C1抑制弯孢菌；C为菌株C1抑制禾谷镰刀菌；E为菌株C1抑制瓜类炭疽菌；图2菌株C1菌落形态；图3菌株C1革兰氏染色显微观察(1000×)；图4菌株C116SrDNA序列进化树；图5温度对菌株C1的影响；图6pH值对菌株C1的影响；图7装液量对菌株C1的影响；图8菌株C1的生长曲线；图9菌株C1脂肽类物质抗菌活性的检测；其中，A是检测平板的反面，B是检测平板的正面，A和B中:1为脂肽类物质，2为脂肽类物质，3为酸沉淀后的上清液，4为甲醇；图10菌株C1发酵液经硫酸铵不同饱和度分级沉淀的抑菌效果；其中，1、0～30％饱和度2、30％～50％饱和度3、50％～80％饱和度4、80％～100％饱和度；图11菌株C1促进玉米生长的效果；图12菌株C1分泌植物生长素的测定；其中，1是对照(无菌水)，2是菌株C1。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种芽孢杆菌，其特征在于，所述芽孢杆菌菌株为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)C1，保藏号为GDMCC No.60046。

【技术特征摘要】
1.一种芽孢杆菌，其特征在于，所述芽孢杆菌菌株为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)C1，保藏号为GDMCCNo.60046。2.根据权利要求1所述的芽孢杆菌，其特征在于，所述芽孢杆菌的16SrDNA序列如SEQIDNO.3所示。3.一种根据权利要求1或2所述的芽孢杆菌作为生防菌株在拮抗作物病原菌中的应用。4.根据权利要求3所述的芽孢杆菌作为生防菌株在拮抗作物病原菌中的应用，其特征在于，所述病原...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆娟，唐俊，张从武，张齐玉，仰洁玉，
申请(专利权)人：安徽瑞虎肥业有限公司，阜阳师范学院，
类型：发明
国别省市：安徽,34