对HLA‑A2呈递的WT1肽特异的T细胞受体样抗体制造技术

本发明专利技术提供与维尔姆斯瘤蛋白(WT1)特异性结合的抗原结合蛋白，包括针对WT1的人源化抗体、嵌合抗体和完全的人抗体、其抗体片段、嵌合抗原受体(CAR)、融合蛋白和缀合物。抗原结合蛋白和抗体与HLA‑A0201限制型WT1肽结合。此类抗体、其片段、融合蛋白和缀合物对于治疗WT1相关癌症是有用的，所述WT1相关癌症包括例如乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、慢性髓细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性淋巴母细胞白血病(ALL)、急性髓样/骨髓性白血病(AML)和骨髓增生异常综合征(MDS)。在更具体的实施方案中，抗WT1/A抗体可以包含设计的用来改善蛋白质稳定性、抗体结合和/或表达水平的一个或多个构架区氨基酸置换。

T cell receptor like antibody of WT1 peptide specific HLA A2 presentation of the

The present invention provides with Wilms' tumor specific binding protein (WT1) antigen binding proteins, including the WT1 humanized antibody, chimeric antibody and fully human antibodies, antibody fragments, chimeric antigen receptor (CAR), and fusion protein conjugates. Antigen binding protein and antibody and HLA A0201 restricted WT1 peptide binding. Such antibodies, fragments, and fusion protein conjugates are useful for the treatment of WT1 related cancers, the WT1 related cancers such as breast cancer, ovarian cancer, prostate cancer, chronic myeloid leukemia, multiple myeloma and acute lymphoblastic leukemia (ALL), acute myeloid leukemia (AML /) and myelodysplastic syndrome (MDS). In more specific embodiments, anti WT1/A antibodies may contain one or more framework amino acid substitutions designed to improve protein stability, antibody binding and / or expression levels.

【技术实现步骤摘要】
对HLA-A2呈递的WT1肽特异的T细胞受体样抗体本申请是中国专利申请201280026656.X的分案申请，原申请的申请日是2012年4月2日，专利技术名称是“对HLA-A2呈递的WT1肽特异的T细胞受体样抗体”。相关申请的交叉引用本申请要求来自2011年4月1日提交的美国临时申请号61/470,635和2011年5月31日提交的美国临时申请号61/491,392的优先权。这些临时申请在此通过引用的方式完整并入本公开中作为参考。联邦资助研究的权利声明本专利技术借助美国政府支持在美国国家健康研究所资助的基金P01CA23766和R01CA55349下做出。美国政府享有本专利技术中的某些权利。序列表本申请含有2012年3月29日创建的序列表；将处于ASCII格式的该文件命名为3314013AWO_SequenceListing_ST25.txt。该文件在此通过引用方式完整地并入本申请中作为参考。
本专利技术总体上涉及针对胞质蛋白的抗体。更具体地，本专利技术涉及针对维尔姆斯瘤癌基因蛋白(WT1)的抗体，特别地是识别与主要组织相容性抗原结合的WT1肽的抗体。专利技术背景维尔姆斯瘤癌基因蛋白(WT1)是针对大多数白血病和广泛类型癌症的吸引人的免疫治疗靶。WT1是胚发生期间正常情况下在中胚层组织中表达的锌指转录因子。在正常成年组织中，WT1表达限于CD34+造血干细胞中的低水平，但是在多个谱系的白血病和广泛类型的实体瘤中过量表达(1-2)。最近，已经报道WT1表达成为最小残留疾病的标志物。处于形态学缓解的急性髓样白血病(AML)患者中增加的转录物水平已经预示明显的临床复发(3，4)。另外，在患有造血系统恶性肿瘤和实体瘤的患者中检测到针对WT1的抗体，这表明WT1是一种高度免疫原性抗原(7)。就绝大部分而言，临床批准的治疗性单克隆抗体(mAb)识别细胞表面蛋白的结构。然而，WT1是一种核蛋白并且因此是经典抗体疗法不可接近的。直至现在，靶向WT1的免疫疗法限于细胞方法，排他地旨在产生识别由MHCI类分子在细胞表面上呈递的肽的WT1特异性细胞毒CD8T细胞(CTL)反应。为了诱导CTL反应，胞内蛋白通常由蛋白酶体或内体/溶酶体降解，并且所产生的肽片段与MHCI或II类分子结合。这些肽-MHC复合体展示在细胞表面，在细胞表面它们通过肽-MHC(pMHC)-T细胞受体(TCR)相互作用为T细胞识别提供靶(8，9)。用源自WT1蛋白的肽接种诱导HLA限制型细胞毒CD8T细胞，后者能够杀伤肿瘤细胞。为了改善功效，可以采用单克隆抗体疗法靶向癌抗原。单克隆抗体(mAb)疗法已经显示通过多种机制产生强有力的抗肿瘤作用，所述机制包括补体依赖的细胞毒性(CDC)、抗体依赖的细胞毒性(ADCC)和直接细胞抑制或凋亡诱导针对过量表达靶分子的肿瘤细胞的作用。另外，mAb可以用作向肿瘤细胞特异性递送细胞毒部分如放射性核素、细胞毒药物或毒素的载体(18)。如果除细胞免疫疗法方案之外，还能获得体液免疫疗法方案来靶向非细胞表面肿瘤抗原，将存在巨大的益处。因此，模拟T细胞受体的单克隆抗体(mAb)将单独是一种新颖和有效的治疗药或作为能够递送强力抗癌剂如药物、毒素和放射性元素的运载体，原因在于所述单克隆抗体是对包含与MHC分子结合的胞内蛋白片段的靶(例如，WT1肽/HLA-A2复合体)特异的。这类种mAb也将可用作诊断工具或预测工具。专利技术概述本公开鉴定并表征了能够靶向胞质/胞内蛋白(例如，WT1癌蛋白)的抗原结合蛋白，如抗体。所公开的抗体靶向肽/MHC复合体，因为在WT1蛋白由细胞进行抗原加工和呈递后，它一般将出现在细胞的表面上。在这个方面，抗体模拟T细胞受体，原因在于该抗体具有特异性识别并结合于MHC限制形式的肽(即，该肽与MHC抗原结合时)的能力。肽/MHC复合体重现抗原，因为在WT1蛋白受到抗原加工和呈递给细胞后，它一般将出现在细胞的表面上。所公开的抗体特异性识别并结合至肽/HLA-A2复合体、尤其WT1/HLA-A0201复合体的表位。由本专利技术的抗原结合蛋白作为HLA-肽复合体的部分所识别的肽的例子包括但不限于表7中显示的那些，例如，具有氨基酸序列RMFPNAPYL(SEQIDNO：1)的肽。因此，在一个方面，当具有氨基酸序列RMFPNAPYL的肽与MHC抗原如HLA-A2结合时，本专利技术涉及与所述肽结合的分离抗体或其抗原结合片段。在另一个方面，本专利技术涉及分离的抗原结合蛋白、抗体、或其抗原结合片段，包含：(A)(i)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：2、3和4的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：8、9和10的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(ii)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：20、21和22的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：26、27和28的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(iii)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：38、39和40的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：44、45和46的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(iv)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：56、57和58的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：62、63和64的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(v)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：74、75和76的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：80、81和82的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；或(vi)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：92、93和94的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：98、99和100的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。在另一个方面，本专利技术涉及分离的抗原结合蛋白、抗体、或其抗原结合片段，其包含分别含有选自SEQIDNOS：14和16；32和34；50和52；68和70；86和88；以及104和106的第一和第二氨基酸序列的VH和VL。在又一个方面，本专利技术涉及分离的抗原结合蛋白、抗体、或其抗原结合片段，其包含选自SEQIDNOS：18、36、54、72、90和108的氨基酸序列。在一个相关方面，分离的抗原结合蛋白包含如表1-8的任一个中公开的抗原结合区域。抗原结合蛋白可以是融合蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的抗体或其抗原结合片段，包含以下之一：(A)(i)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQ ID NOS：2、3和4的HC‑CDR1、HC‑CDR2和HC‑CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQ ID NOS：8、9和10的LC‑CDR1、LC‑CDR2和LC‑CDR3；(ii)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQ ID NOS：20、21和22的HC‑CDR1、HC‑CDR2和HC‑CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQ ID NOS：26、27和28的LC‑CDR1、LC‑CDR2和LC‑CDR3；(iii)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQ ID NOS：38、39和40的HC‑CDR1、HC‑CDR2和HC‑CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQ ID NOS：44、45和46的LC‑CDR1、LC‑CDR2和LC‑CDR3；(iv)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQ ID NOS：56、57和58的HC‑CDR1、HC‑CDR2和HC‑CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQ ID NOS：62、63和64的LC‑CDR1、LC‑CDR2和LC‑CDR3；(v)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQ ID NOS：74、75和76的HC‑CDR1、HC‑CDR2和HC‑CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQ ID NOS：80、81和82的LC‑CDR1、LC‑CDR2和LC‑CDR3；或(vi)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQ ID NOS：92、93和94的HC‑CDR1、HC‑CDR2和HC‑CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQ ID NOS：98、99和100的LC‑CDR1、LC‑CDR2和LC‑CDR3；或(B)分别包含选自SEQ ID NOS：14和16；32和34；50和52；68和70；86和88；以及104和106的第一和第二氨基酸序列的V...

【技术特征摘要】
2011.04.01 US 61/470,635;2011.05.31 US 61/491,3921.分离的抗体或其抗原结合片段，包含以下之一：(A)(i)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：2、3和4的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：8、9和10的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(ii)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：20、21和22的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：26、27和28的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(iii)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：38、39和40的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：44、45和46的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(iv)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：56、57和58的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：62、63和64的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(v)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：74、75和76的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：80、81和82的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；或(vi)重链(HC)可变区和轻链(LC)可变区，所述重链(HC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：92、93和94的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链(LC)可变区包含分别含有氨基酸序列SEQIDNOS：98、99和100的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；或(B)分别包含选自SEQIDNOS：14和16；32和34；50和52；68和70；86和88；以及104和106的第一和第二氨基酸序列的VH和VL；或(C)选自SEQIDNOS：18、36、54、72、90和108的氨基酸序列。2.分离的抗体或其抗原结合片段，包含：(A)重链(HC)可变区，其包含分别含有选自SEQIDNOS：(i)2、3、和4；(ii)20、21和22；(iii)38、39和40；(iv)56、57和58；(v)74、75和76；和(vi)92、93和94的氨基酸序列HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；和(B)轻链(LC)可变区，其包含分别含有选自SEQIDNOS：(i)8、9和10；(ii)26、27和28；(iii)44、45和46；(iv)62、63和64；(v)80、81和82；和(vi)98、99和100的氨基酸序列LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。3.分离的抗体或其抗原结合片段，包含分别含有选自SEQIDNOS：(i)14和16；(ii)32和34；(iii)50和52；(iv)68和70；(v)86和88；和(vi)104和106的第一和第二氨基酸序列的VH和VL。4.分离的抗体或其抗原结合片段，包含选自SEQIDNOS：18、36、54、72、90和108的氨基酸序列。5.权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中抗体包含人可变区构架区。6.权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中抗体是完全的人抗体。7.权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中所述抗体与结合于HLA-A2的WT1肽特异性结合。8.权利要求7所述的抗体，其中所述WT1肽具有氨基酸序列RMFPNAPYL。9.权利要求7所述的抗体，其中所述HLA-A2是HLA-A0201。10.权利要求1至9中任一项所述的抗体，其中所述抗体的抗原结合片段是Fab、Fab'、F(ab')2、Fv或单链Fv(scFv)。11.与治疗剂缀合的权利要求1至9中任一项所述的抗体。12.权利要求11所述的抗体，其中所述治疗剂是药物、毒素、放射性同位素、蛋白质或肽。13.分离的核酸，其编码权利要求1至4中任一项所述的抗体。14.分离的核酸，其包含：(A)(i)选自SEQIDNOS：5、6和7；23、24和25；41、42和43；58、59和60；77、78和79；以及95、96和97的第一、第二和第三核苷酸序列；和(ii)选自SEQIDNOS：11、12和13；29、30和31；47、48和49；65、66和67；83、84和85；以及101、102和103的第四、第五和第六核苷酸序列；或(B)选自SEQIDNOS：15和17；33和35；51和53；69和71；87和89；以及105和107的第一和第二核苷酸序列；或(C)选自SEQIDNOS：19、37、55、73、91和109的核苷酸序列。15.分离的核酸，其包含：(A)选自SEQIDNOS：(i)5、6和7；(ii)23、24和25；(iii)41、42和43；(iv)58、59和60；(v)77、78和79；和(vi)95、96和97的第一、第二和第三核苷酸序列；和(B)选自SEQIDNOS：(vii)11、12和13；(viii)29、30和31；(ix)47、48和49；(x)65、66和67；(xi)83、84和85；和(xii)101、102和103的第四、第五和第六核苷酸序列。16.权利要求15所述的核酸，其中所述第一、第二和第三...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·A·沙因博格，T·道，C·刘，S·严，
申请(专利权)人：纪念斯隆凯特琳癌症中心，优瑞科生物技术公司，
类型：发明
国别省市：美国,US