一种特女贞苷对照品的制备方法技术

本发明专利技术提供一种特女贞苷对照品的制备方法。具体地，本发明专利技术的制备方法包括以下步骤：(i)提供特女贞苷醇提物；(ii)所述的特女贞苷醇提物与溶剂混合，得到第一混合物，并利用中压制备柱对所述的第一混合物进行过柱分离，从而获得特女贞苷粗品；(iii)利用纯水对所述的特女贞苷粗品进行重结晶；和(iv)分离并干燥步骤(iii)中所得的结晶物，即获得特女贞苷对照品。本发明专利技术工艺稳定、操作方便、分离效率高，成本低廉经济环保，具有较高的经济价值和学术价值。

Preparation method of Ligustrum lucidum extract

The present invention provides a method for preparing a reference substance of Ligustrum lucidum glycosides. Specifically, the preparation method of the invention comprises the following steps: (I) providing specnuezhenide alcohol extract; (II) alcohol specnuezhenide the extraction mixture with a solvent to obtain a first mixture, and the preparation of the first column and column separation using a mixture of medium voltage system, resulting in a special nuezhenoside crude; (III) using pure water specnuezhenide crude on the recrystallization; and (IV) separating and drying steps (III) crystals in income, to obtain the specnuezhenide control products. The invention has the advantages of stable process, convenient operation, high separation efficiency, low cost, economy and environment protection, and has high economic value and academic value.

【技术实现步骤摘要】
一种特女贞苷对照品的制备方法
本专利技术属于中药现代化
，涉及一种中药化学对照品的制备方法，具体而言，本专利技术涉及一种从中药材女贞子中快速分离特女贞苷对照品的方法。
技术介绍
女贞子又名冬青子，为木犀科植物女贞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果实，是我国传统的扶正固体药物。《神农本草经》列之为上品，谓其“味苦平，主补中，安五脏，养精神，除百病”。具有滋补肝肾、明目乌发之功效，用于肝肾阴虚、头昏目眩、耳鸣、腰膝疲软、须发早白等症。现代药理学研究表明，女贞子具有提高机体免疫功能、增加白细胞、降血脂降血糖、抗菌消炎、降低眼压、抗氧化作用、保肝护肾和抗癌，对心血管疾病也有较好的疗效。临床上常用语治疗骨质疏松、结肠癌、肺癌等疾病。特女贞苷(Specnuezhenide)，分子式为C31H42O17，结构式如下：女贞子的主要活性成分有三萜类、环烯醚萜类、苯乙醇类和黄酮类等成分，而特女贞苷是女贞子中含量最高环烯醚萜苷类化合物，因此2010版《中国药典》选择特女贞苷作为女贞子的鉴别和含量测定用对照品，用以控制女贞子的药材质量。所以特女贞苷对照品的需求量越来越大，而目前国内关于特女贞苷分离纯化的文献报道较少，即使有少量专利文献报道了特女贞苷的分离纯化，方法，所得的特女贞苷纯度也并不高，比如申请号为201110337108.6的专利申请公开了“一种特女贞苷的制备方法”和申请号为200910093290.8的专利申请公开了“一种女贞子专属性成分特女贞苷的分离纯化工艺”，两篇专利中所得的特女贞苷的纯度仅在98％以上。如申请号为201010186867.2的专利申请公开了“一种特女贞苷的制备方法”，该方法采用甲醇或乙醇作为重结晶所用的溶剂，所得的特女贞苷的纯度为98.1％。因此制备高纯度的特女贞苷对照品方法显得非常必要，通过本专利技术所涉及的制备方法得到的特女贞苷对照品纯度高于全部现有技术方案所得的特女贞苷的纯度，本制备方法具有广泛的应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从女贞子药材中分离特女贞苷对照品的制备方法。该方法简便易行、消耗溶剂少、得率高，适于工业化生产。本专利技术的第一方面提供了一种特女贞苷对照品的制备方法，所述的方法包括以下步骤：(i)提供特女贞苷醇提物；(ii)所述的特女贞苷醇提物与溶剂混合，得到第一混合物，并利用中压制备柱对所述的第一混合物进行过柱分离，从而获得特女贞苷粗品；(iii)利用纯水对所述的特女贞苷粗品进行重结晶；和(iv)分离并干燥步骤(iii)中所得的结晶物，即获得特女贞苷对照品。在另一优选例中，所述的纯水的电导率≤18.2μs/cm。在另一优选例中，所述步骤(ii)中的中压制备柱的柱压下限选自下组：0MPa、0.1MPa、0.2MPa、0.3MPa、0.4MPa、或0.5MPa。在另一优选例中，所述步骤(ii)中的中压制备柱的柱压上限选自下组：2MPa、2.1MPa、2.2MPa、2.3MPa、2.4MPa、或2.5MPa。在另一优选例中，所述步骤(ii)中的中压制备柱设有柱压0-2MPa,较佳地为0.5-2MPa。此处，当中压制备柱的柱压为0MPa时，是指中压制备柱处于标准大气压状态。在另一优选例中，所述步骤(ii)中的中压制备柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶。在另一优选例中，所述步骤(ii)中的中压制备柱的填料粒径为40-60μm。在另一优选例中，所述步骤(ii)的中压制备柱中使用的洗脱剂为体积比20-50％(v/v)的甲醇溶液。在另一优选例中，所述步骤(ii)的中压制备柱中洗脱剂流速为50-70ml/min。在另一优选例中，步骤(ii)中选择甲醇为溶剂与所述的特女贞苷醇提物混合，用以溶解所述的特女贞苷醇提物。在另一优选例中，所述的特女贞苷粗品纯度≥95.0％在另一优选例中，所述的特女贞苷醇提物由包括以下步骤的方法制备得到：(i-1)混合女贞子药材和乙醇溶液，在50-80℃下进行醇提，固液分离后浓缩液体部分，从而获得第一浓缩液；(i-2)使用大孔树脂吸附所述的第一浓缩液，然后分别用2-3倍量柱体积的水和1-3倍量柱体积的15-25％乙醇溶液洗脱杂质，再用1-3倍量柱体积的35-50％(v/v)乙醇溶液洗脱目标物质，收集洗脱液，浓缩以获得第二浓缩液；和(i-3)使用硅胶柱层析分离所述的第二浓缩液采用乙酸乙酯:甲醇:水洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩以获得步骤(i)中所述的特女贞苷醇提物。在另一优选例中，所述的乙酸乙酯:甲醇:水洗脱剂中各组分的体积比为20:1:0-10:1:0.1。在另一优选例中，所述的乙醇溶液与女贞子药材以体积质量比(L/kg)为10-20倍量混合。在另一优选例中，所述步骤(i-1)中的乙醇溶液的体积百分比浓度为45-55％(v/v)。在另一优选例中，所述的大孔树脂的原料包括苯乙烯型非极性共聚体。在另一优选例中，所述的大孔树脂的粒径为0.3-1.25mm。在另一优选例中，所述的大孔树脂的孔隙率≥90％。本专利技术的第二方面提供了一种特女贞苷对照品，所述的特女贞苷对照品由如本专利技术第一方面所述的方法制备所得。在另一优选例中，所述的特女贞苷对照品纯度≥99.0％，较佳地，纯度≥99.3％，更佳地，纯度≥99.4％。在另一优选例中，所述的特女贞苷对照品含有≤0.077％的新女贞苷。在另一优选例中，所述的特女贞苷对照品含有≤0.55％的女贞苷杂质。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1为实施例1所得特女贞苷对照品的HPLC检测图谱。具体实施方式本专利技术人经过广泛而深入地研究，首次研发出一种高纯度特女贞苷对照品的制备方法。本制备方法采用中压制备柱分离纯化特女贞苷醇提物，在一定的压强下，分离效率大大提高。通过纯水重结晶特女贞苷，进一步提高特女贞苷的纯度。在此基础上，完成了本专利技术。本专利技术一种优选的技术方案如下：A.原料提取：将女贞子药材粉碎，按照体积质量比L/Kg加入10倍量的乙醇溶液，所使用的乙醇溶液的体积百分比浓度为45-55％；将女贞子药材和乙醇溶液在60℃下热提取至少2次，每次大约2小时，冷却至室温，抽滤，合并滤液，浓缩至无醇味；B.大孔树脂富集：将步骤A的浓缩液用大孔树脂静态吸附过夜，所使用的大孔树脂为D101型。然后分别用2-3倍量柱体积的水和1-3倍量柱体积的20％乙醇溶液洗脱杂质，再用1-3倍量柱体积的40％乙醇溶液洗脱目标物质，收集洗脱液，浓缩至原体积的1/10；C.硅胶柱层析：将步骤B的浓缩液用100-200目硅胶拌样，烘干后碾碎，取200-300目硅胶，乙酸乙酯湿法装柱。上样后，采用乙酸乙酯：甲醇：水洗脱剂，并按20:1:0-10:1:0.1的体积比由高到低梯度洗脱，TLC跟踪检测，收集洗脱液，浓缩得特女贞苷半成品；D.中压制备：将步骤C的特女贞苷粗品用甲醇溶解上中压制备柱，用35％甲醇洗脱，浓缩得到纯度为95％左右的特女贞苷粗品。中压制备柱设有柱压0-2MPa,较佳地为0.5-2MPa，此处，当中压制备柱的柱压为0MPa时，是指中压制备柱处于标准大气压状态；产品回收：将步骤D得到95％左右的特女贞苷粗品本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特女贞苷对照品的制备方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：(i)提供特女贞苷醇提物；(ii)所述的特女贞苷醇提物与溶剂混合，得到第一混合物，并利用中压制备柱对所述的第一混合物进行过柱分离，从而获得特女贞苷粗品；(iii)利用纯水对所述的特女贞苷粗品进行重结晶；和(iv)分离并干燥步骤(iii)中所得的结晶物，即获得特女贞苷对照品。

【技术特征摘要】
1.一种特女贞苷对照品的制备方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：(i)提供特女贞苷醇提物；(ii)所述的特女贞苷醇提物与溶剂混合，得到第一混合物，并利用中压制备柱对所述的第一混合物进行过柱分离，从而获得特女贞苷粗品；(iii)利用纯水对所述的特女贞苷粗品进行重结晶；和(iv)分离并干燥步骤(iii)中所得的结晶物，即获得特女贞苷对照品。2.如权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述步骤(ii)中的中压制备柱设有柱压0-2MPa,较佳地为0.5-2MPa。3.如权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述步骤(ii)中的中压制备柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶。4.如权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述步骤(ii)中的中压制备柱的填料粒径为40-60μm。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(ii)的中压制备柱中使用的洗脱剂为体积比20-50％(v/v)的甲醇溶液。6.如权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述步骤(ii)的中压制备柱中洗脱剂流速为50-70ml/min。7.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：辛振强，何小义，余小青，张田勇，戴军旗，
申请(专利权)人：上海诗丹德标准技术服务有限公司，上海诗丹德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31