一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法技术

一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，包括：(1)实验材料的选择；(2)具体实验步骤：(2.1)无菌外植体的获取；(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤；(2.3)速生无刺槐生根培养步骤；(2.4)速生无刺槐继代培养及生根培养条件；和(2.5)速生无刺槐组培苗的炼苗与移栽。本发明专利技术通过继代增殖培养实现速生无刺槐的大规模生产，增殖系数高，平均增殖系数达到4以上；生根率高，最高可达95％；炼苗成活率高，平均为90％以上。

Rooting culture method for fast growing non locust tissue culture seedling

A fast-growing non locust plantlets rooting method, including: (1) experimental material selection; (2) the specific experimental steps: (2.1) obtaining sterile explants; (2.2) the fast-growing locust subculture without steps; (2.3) no fast-growing locust (2.4 steps rooting; no) fast-growing locust subculture and rooting conditions; and (2.5) no fast-growing seedlings of Robinia pseudoacacia seedling and transplanting. The invention realizes through the subculture of fast-growing mass production without locust, the proliferation coefficient is high, average proliferation coefficient above 4; the rooting rate is high, the highest was 95%; seedling survival rate is high, the average is above 90%.

【技术实现步骤摘要】
一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法
本专利技术涉及一种植物组织培养的方法，具体涉及一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，属于生物

技术介绍
速生无刺槐是人工选育出的一个刺槐优良无性系新品种，豆科刺槐属落叶乔木，树高可达30～35m。托叶刺小而软，1～2年生树有刺，3年生以后刺基本脱落。树体高大，干型通直，生长迅速，年胸径生长量为2.5～3.0cm，年树高生长量2m以上。叶色浓绿，花白色，有香气，花期5月。主要分布在北部暖温带落叶阔叶林区，分布的城市有沈阳、大连、北京、天津、石家庄、济南、青岛等。适应性强，抗寒、抗旱、耐瘠薄、耐盐碱，是盐碱地以及城市绿化的优良树种。速生无刺槐属豆科刺槐属树种，有关无刺槐的研究尚处于起始阶段，仅中国农业大学有一篇关于《无刺桅杆槐和无刺槐再生体系的研究》的报道，该文章主要是从叶片再生角度进行无刺槐的研究，主要目的是为了通过建立再生体系进行基因工程育种，文章中无刺桅杆槐和无刺槐的再生率人别为60％、50％，生根率分别为55.6％、72.2％，组培苗移栽成活率为85％。本专利主要目的是通过继代增殖培养实现速生无刺槐的大规模生产，专利中速生无刺槐的增殖系数达到4以上，生根率达到95％以上，大棚炼苗移栽成活率达到90％以上，各项指标标准高，有利于速生无刺槐生产成本的降低，易于实现大规模的工厂化生产。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，以克服现有技术所存在的上述缺点和不足。本专利技术所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，其特征在于，包括：(1)实验材料的选择：选取继代周期为30～40天，生长健壮、叶片舒展，株高为3～5cm的速生无刺槐组培苗为实验材料，切除基部愈伤及基部叶片，保留1cm左右的顶芽、茎段及芽团；(2)具体实验步骤：(2.1)无菌外植体的获取；(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤；(2.3)速生无刺槐生根培养步骤；(2.4)速生无刺槐继代培养及生根培养条件；(2.5)速生无刺槐组培苗的炼苗与移栽。其中，步骤(2.1)无菌外植体的获取选取1～2年生带芽体的健壮根系埋于育苗基质中，待新芽萌发出来后切割成1～2cm长的顶芽或带腋芽的茎段，剪去叶片留3～5mm叶柄，用75％酒精擦拭外植体表面，用洗衣粉水浸泡2min，再置于流水下冲洗0.5～1h；在超净工作台上，用0.05～0.1％的升汞处理10～15min，用无菌水冲洗5～6次，接种至诱导培养基中(MS+0.01～0.1mg/L6-BA+30g/L糖+5～7g/L卡拉胶)，每瓶接种一株，获得的无菌外植体的成功率为80％。其中，步骤(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤：(2.2.1)试验材料选取步骤1中诱导出来的芽直接进行增殖培养，所选材料生长健壮、叶片舒展，利用顶芽、茎段及芽团进行繁殖，其中顶芽高0.8～1.2cm左右、茎段高0.5～1cm左右含至少一个腋芽、芽团高0.5～1cm至少含两个小芽；(2.2.2)速生无刺槐继代培养的实验方案设计速生无刺槐继代培养的基本培养基为改良DKW培养基，其中添加蔗糖30g/L，卡拉胶5～7g/L，土豆30g/L，pH为5.8～6.0。选用6-BA(6-苄基腺嘌呤)、IBA(吲哚丁酸)、NAA(萘乙酸)植物生长调节剂,速生无刺槐继代培养最佳配方为：改良DKW+0.1mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+30g/L土豆+30g/L蔗糖+5～7g/L卡拉胶，采用该配方继代培养的速生无刺槐的最大增殖比例为4.1，且植株长高明显，能用于生根培养的单株苗多。其中，步骤(2.3)速生无刺槐生根培养步骤(2.3.1)选取继代培养的速生无刺槐组培苗，选取标准为高度1.5～3cm、健壮、叶片舒展的单株组培苗；(2.3.2)将选取的继代培养的速生无刺槐组培苗接种至1/2MS生根培养基上，1/2MS生根培养基中包括：NH4NO3825mg/L、KNO3950mg/L、KH2PO485mg/L、MgSO4·7H2O185mg/L、CaCl2·2H2O220mg/L、FeSO4·7H2O13.9mg/L、Na2·EDTA·2H2O18.65mg/L、KI0.42mg/L、H3BO33.1mg/L、MnSO4·H2O8.45mg/L、ZnSO4·7H2O4.25mg/L、Na2MoO4·2H2O0.05mg/L、CoCl2·6H2O0.0125mg/L、CuSO4·5H2O0.0125mg/L、肌醇50mg/L、烟酸0.25mg/L、盐酸吡哆醇0.25mg/L、盐酸硫胺素0.05mg/L、甘氨酸1.0mg/L、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、20g/L蔗糖、5～7g/L卡拉胶；(2.3.3)接种30天后统计生根率，生根率＝生根株数/接种株数×100％；筛选出的最适生根配方为：1/2MS+0.01mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.2mg/LIBA+20g/L土豆+20g/L蔗糖+5～7g/L卡拉胶。其中，步骤(2.4)速生无刺槐继代培养及生根培养条件速生无刺槐组培苗继代及生根培养的条件为：光培养与暗培养交替进行，光培养条件为连续进行12h光照，光照强度为3000lx，培养温度为25℃；暗培养条件为连续进行12h，温度为20℃。其中，步骤(2.5)速生无刺槐组培苗的炼苗与移栽(2.5.1)生根培养30～45天的生根苗可进温室炼苗移栽，选取叶色正常、无枯叶黄叶的健壮植株进行移栽；(2.5.2)将速生无刺槐生根苗根系上的培养基洗净，种植在含珍珠岩、草炭、河沙等基质的营养杯或穴盘中，湿度控制在75～80％，待新根与新叶发出后逐渐降低湿度，培养45～60天，即可得速生无刺槐容器苗，其大棚炼苗成活率为90％以上；(2.5.3)上述所说基质配方包括上下两层，其中上层1/3容量体积为蛭石：珍珠岩＝1:1；下层2/3容量体积为园土：草炭：河沙：珍珠岩＝2:1:1:1。该基质配方的特点是上层基质疏松透气、保水保湿，利于炼苗前期新根及新叶的发出；下层基质营养丰富，利于后期组培苗营养生长，且根系与基质易于成团、便于容器苗运输。本专利技术的有益效果：本专利技术主要目的是通过继代增殖培养实现速生无刺槐的大规模生产，采用该方法繁殖的速生无刺槐具有如下优点：(1)增殖系数高，平均增殖系数达到4以上；(2)生根率高，最高可达95％；(3)炼苗成活率高，平均为90％以上。与扦插繁殖相比，速生无刺槐组织培养繁殖的方式，生产上不受季节的限制，繁殖系数大；与再生培养相比，后代不易发生变异，操作方便，能实现大规模的工厂化生产，利于速生无刺槐的繁育及推广。具体实施方式以下结合具体实施例，对本专利技术作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本专利技术而非用于限定本专利技术的范围。实施例1一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，包括：一实验材料选取继代周期为30～40天，生长健壮、叶片舒展，株高为3～5cm的速生无刺槐组培苗为实验材料，切除基部愈伤及基部叶片，保留1cm左右的顶芽、茎段及芽团。二具体实验步骤一种速生无刺槐组培苗继代培养的方法，步骤如下：1、无菌外植体的获取选取1～2年生带芽体的健壮根系埋于育苗基质中，待新芽萌发出来后切割成1～2cm长的顶芽或带腋芽本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，其特征在于，包括：(1)实验材料的选择：选取继代周期为30～40天，生长健壮、叶片舒展，株高为3～5cm的速生无刺槐组培苗为实验材料，切除基部愈伤及基部叶片，保留1cm左右的顶芽、茎段及芽团；(2)具体实验步骤：(2.1)无菌外植体的获取；(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤；(2.3)速生无刺槐生根培养步骤；(2.4)速生无刺槐继代培养及生根培养条件；(2.5)速生无刺槐组培苗的炼苗与移栽。

【技术特征摘要】
1.一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，其特征在于，包括：(1)实验材料的选择：选取继代周期为30～40天，生长健壮、叶片舒展，株高为3～5cm的速生无刺槐组培苗为实验材料，切除基部愈伤及基部叶片，保留1cm左右的顶芽、茎段及芽团；(2)具体实验步骤：(2.1)无菌外植体的获取；(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤；(2.3)速生无刺槐生根培养步骤；(2.4)速生无刺槐继代培养及生根培养条件；(2.5)速生无刺槐组培苗的炼苗与移栽。2.根据权利要求1所述的一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，其特征在于：步骤(2.1)无菌外植体的获取,选取1～2年生带芽体的健壮根系埋于育苗基质中，待新芽萌发出来后切割成1～2cm长的顶芽或带腋芽的茎段，剪去叶片留3～5mm叶柄，用75％酒精擦拭外植体表面，用洗衣粉水浸泡2min，再置于流水下冲洗0.5～1h；在超净工作台上，用0.05～0.1％的升汞处理10～15min，用无菌水冲洗5～6次，接种至诱导培养基中(MS+0.01～0.1mg/L6-BA+30g/L糖+5～7g/L卡拉胶)，每瓶接种一株，获得的无菌外植体的成功率为80％。3.根据权利要求1所述的一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，其特征在于：步骤(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤：(2.2.1)试验材料，选取步骤1中诱导出来的芽直接进行增殖培养，所选材料生长健壮、叶片舒展，利用顶芽、茎段及芽团进行繁殖，其中顶芽高0.8～1.2cm左右、茎段高0.5～1cm左右含至少一个腋芽、芽团高0.5～1cm至少含两个小芽；(2.2.2)速生无刺槐继代培养的实验方案设计，速生无刺槐继代培养的基本培养基为改良DKW培养基，其中添加蔗糖30g/L，卡拉胶5～7g/L，土豆30g/L，pH为5.8～6.0；选用6-BA(6-苄基腺嘌呤)、IBA(吲哚丁酸)、NAA(萘乙酸)植物生长调节剂,速生无刺槐继代培养最佳配方为：改良DKW+0.1mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+30g/L土豆+30g/L蔗糖+5～7g/L卡拉胶，采用该配方继代培养的速生无刺槐的最大增殖比例为4.1，且植株长高明显，能用于生根培养的单株苗多。4.根据权利要求1所述的一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，其特征在于：步骤(2.3)速生无刺槐生根培养步骤，(2.3.1)选取继代培养的速生无刺槐组培苗，选取标准为高度1.5～3cm、健壮、叶片舒展的单株组培苗；(2...

【专利技术属性】
技术研发人员：冒文娟，董举文，李文剑，张玉杰，林大为，张承妹，苏涌，
申请(专利权)人：上海杉一植物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31