一种同时测定动物源食品中杀线威和杀线威肟的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时测定动物源食品中杀线威和杀线威肟的方法，采用乙腈对动物源样品进行提取及固相萃取小柱净化提取物，并利用低温高速离心去除小颗粒杂质，对基质复杂的动物源食品进行高效的净化，从而减少杂质的干扰，制得供试品溶液，并配制系列浓度的基质匹配标准溶液，利用液相色谱‑串联质谱法多反应监测(MRM)方式同时测定样品中的杀线威和杀线威肟，该方法具有定量限低、灵敏度高等优点，且其回收率和重复性也符合要求，即本发明专利技术的测定方法是适用于动物源食品中杀线威和杀线威肟残留量同时测定的有效方法。

A method for simultaneous determination of animal source foods oxamyl and oxamyl oxime

The invention discloses a method for simultaneous determination of animal source foods oxamyl and oxamyl oxime, were extracted by acetonitrile and solid-phase extraction for sample purification animal extracts, and the use of low temperature and high speed centrifugation to remove small particles of impurities, high efficient purification of a complex matrix of animal food, thereby reducing the interference of impurities and prepare for the test solution, and the preparation of matrix series concentration, standard solution, using liquid chromatography tandem mass spectrometry multiple reaction monitoring (MRM) for simultaneous determination of line and kill oxamyl oxime in the sample, the method has the advantages of high sensitivity, low limit of quantification, and the recovery rate and repeatability also in accordance with the requirements of the determination method of the invention is the effective method is applicable to animal source foods nematicidal determination and oxamyl oxime residues.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品残留物的
，尤其涉及一种同时测定动物源食品中杀线威和杀线威肟的方法。
技术介绍
杀线威(CAS﹟:23135-22-0)，又名草肟威，英文名Oxamyl，化学名N,N-二甲基-α-甲基氨基甲酰基氧代亚氨-α-甲硫基乙酰胺，属于氨基甲酸酯类农药，主要用作广谱性杀虫剂，兼有杀螨和杀线虫等活性。杀线威已登记作物有柑橘、甜瓜、番茄、甜椒、黄瓜、胡萝卜、马铃薯、花生和棉花等。杀线威为剧毒农药，对人体有神经毒性。杀线威及其代谢物可残留于农产品、食物或环境中，对人体具有潜在的健康风险。GB2763-2014规定杀线威在花生仁等食品中最大残留限量(MRL)为0.05-2mg/kg。中国(GB2763-2014)及联合国食品法典委员会(CAC)均定义杀线威残留物为杀线威及其代谢物杀线威肟之和，以杀线威表示。我国已制定了果蔬、乳品等几种食品中杀线威残留量测定的标准，现行标准多采用LC-MS/MS法以多反应监测(MRM)方式对杀线威进行测定。SN/T0697-2014《出口肉及肉制品中杀线威残留量的测定》采用乙腈进行提取，N-丙基乙二胺(PSA)小柱净化。SN/T0134-2010《进出口食品中杀线威等12种氨基甲酸酯类农药残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法》采用乙腈进行提取，活性炭和弗罗里硅土串联小柱净化。SN/T3156-2012《乳及乳制品中多种氨基甲酸酯类农药残留量的检测方法液相色谱-串联质谱法》采用乙腈进行提取，C18小柱净化。GB/T20772-2008《动物肌肉中461种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》采用乙酸乙酯-环己烷进行提取，凝胶渗透色谱净化。然而所有现行标准中仅制定了杀线威的测定方法，并未涉及杀线威肟。专利CN105548431A《同时检测蔬菜/水果中杀线威和杀线威肟残留量的方法》采用乙腈进行提取及基质分散固相萃取法进行净化，然后采用液相色谱质谱法(LC-MS/MS)以多反应监测(MRM)方式测定杀线威，以选择性离子监测(SIM)方式测定杀线威肟。该专利方法适用于果蔬类，但基质分散固相萃取法不适用于基质复杂的动物源食品，此外SIM方式获得的定性结果假阳性率高于MRM方式。鉴于杀线威在农业生产中的广泛应用及其残留毒性风险，以及我国标准(GB2763-2014)和联合国食品法典委员会(CAC)均定义杀线威残留物为杀线威及其代谢物杀线威肟之和，因而，建立适用于动物源食品、灵敏度高(定量限低于MRL)的杀线威与杀线威肟残留量的测定方法十分必要。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种同时测定动物源食品中杀线威和杀线威肟的方法，有效测定动物源食品中杀线威和杀线威肟残留量。本专利技术采用的技术手段如下：一种同时测定动物源食品中杀线威和杀线威肟的方法，取待测样品制备供试品溶液，并配制基质匹配标准溶液，利用液相色谱-质谱/质谱仪测定杀线威和杀线威肟；其中色谱条件为:色谱柱:C18柱，长50mm，内径2.1mm，填充料粒径1.7um，柱温:25～35℃，进样量:2～4μL，流速：0.25～0.35mL/min，流动相梯度洗脱方式见表3：表3流动相梯度洗脱方式表3中的甲酸水溶液体积浓度为0.1％。进一步的，所述质谱条件为:电离方式：电喷雾电离，正离子扫描(ESI+)，检测方式：多反应监测(MRM)，电喷雾电压(IS):4950～5050V，离子源温度(TEM):500～600℃，碰撞气(CAD)：medium，气帘气压力(CUR)：25psi，雾化器(GS1)：55psi，辅助加热器(GS2)：55psi。进一步的，所述多反应监测(MRM)的条件见表4:表4多反应监测的条件表4中带*的离子为定量离子。进一步的，配制所述供试品溶液的步骤为：(1)制样：取待检测的样品，切成小块，捣碎混匀，制成匀浆；(2)提取：称取步骤(1)的样品至离心管中，加入乙腈、无水硫酸钠进行匀浆，再用乙腈洗涤刀头，获得匀浆后混合物和洗涤液；将匀浆后混合物进行第一次离心，收集第一次上清液至蒸馏瓶，并于剩下的残留物中加入洗涤刀头的洗涤液，涡旋提取，并进行第二次离心，收集第二次上清液，合并两次上清液至蒸馏瓶，旋转蒸发至近干；加甲醇-二氯甲烷溶液至蒸馏瓶中，涡旋溶解残留物，待净化；(3)净化：用甲醇-二氯甲烷溶液淋洗活化乙二胺-N-丙基小柱，弃去淋洗液；将步骤(2)中待净化的样品溶液加到小柱中过柱，用甲醇-二氯甲烷溶液润洗残留有样品溶液的蒸馏瓶并将润洗液过柱，用干净的用蒸馏瓶收集所有流出的样品溶液和洗脱液，旋转蒸发至蒸干；加入甲醇-水溶液，涡旋溶解残渣；将混合溶液转移至离心管中，离心后过滤至样品瓶中，供测定。进一步的，配制所述基质匹配标准溶液的步骤为：称取杀线威、杀线威肟标准品，分别用甲醇溶解定容至不同的容量瓶，得到单标储备溶液；取各单标储备溶液至同一容量瓶中，用甲醇进行稀释，得到中间标准混合溶液；用甲醇对中间标准混合溶液进行稀释，以甲醇-水溶液为溶剂配制成系列浓度的标准工作液；称取不含有杀线威与杀线威肟的样品，进行制样、提取与净化，旋转蒸发至蒸干，分别加入各浓度的标准工作液，涡旋充分溶解残渣；将各混合溶液转移至不同的离心管中，离心后过滤至样品瓶中，得到系列浓度的基质匹配标准溶液。进一步的，所述柱温为30℃，所述进样量为3μL，所述流速为0.30mL/min。进一步的，所述电喷雾电压为5000V，所述离子源温度为550℃。进一步的，所述提取步骤(2)中具体操作为：称取制得的样品5g至50mL离心管中，加入20mL乙腈和5g无水硫酸钠，以15000rpm进行匀浆2min，再用10mL乙腈洗涤刀头1min，获得匀浆后混合物和洗涤液；将匀浆后混合物于4000rpm进行第一次离心10min，收集第一次上清液至蒸馏瓶，并于剩下的残留物中加入洗涤刀头的洗涤液，涡旋提取2min，并以4000rpm进行第二次离心10min，收集第二次上清液，合并两次上清液至100mL蒸馏瓶，于40℃旋转蒸发至近干；加3mL体积比为5：95的甲醇-二氯甲烷至蒸馏瓶中，涡旋溶解残留物，待净化。进一步的，所述净化步骤(3)中具体操作为：用5mL体积比为5：95的甲醇-二氯甲烷淋洗活化乙二胺-N-丙基小柱，弃去淋洗液；将步骤(2)中待净化的样品溶液加到小柱中过柱，分别用4mL体积比为5：95的甲醇-二氯甲烷润洗残留有样品溶液的蒸馏瓶两次，并将两次润洗液过柱，控制流速不超过1mL/min；用干净的蒸馏瓶收集所有流出的样品溶液和洗脱液，于35℃旋转蒸发至蒸干；加入1mL体积比为20：80的甲醇-水溶液，涡旋，溶解残渣；将混合溶液转移至1mL离心管中，于4℃以13000rpm离心10min，取上清液过0.22μm滤膜至样品瓶中，供测定。进一步的，配制所述基质匹配标准溶液的具体步骤为：称取杀线威、杀线威肟标准品各0.01g，分别用甲醇溶解定容至不同的10mL容量瓶，得到杀线威、杀线威肟的浓度均为1.0mg/mL的单标储备溶液；取各单标储备溶液至同一容量瓶中，用甲醇进行稀释，配制为杀线威、杀线威肟的浓度均为10μg/mL的中间标准混合溶液；用甲醇对中间标准混合溶液进行稀释，再以体积比为20：80的甲醇-水溶液为溶剂配制成5ng本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时测定动物源食品中杀线威和杀线威肟的方法，其特征在于，取待测样品制备供试品溶液，并配制基质匹配标准溶液，利用液相色谱‑质谱/质谱仪测定杀线威和杀线威肟；其中液相色谱条件为:色谱柱:C18柱，长50mm，内径2.1mm，填充料粒径1.7um，柱温:25～35℃，进样量:2～4μL，流速：0.25～0.35mL/min，流动相梯度洗脱方式见表1：表1 流动相梯度洗脱方式时间(min)甲酸水溶液(％)甲醇(％)0.0190101.0040604.0025754.3090105.009010表1中的甲酸水溶液体积浓度为0.1％。

【技术特征摘要】
1.一种同时测定动物源食品中杀线威和杀线威肟的方法，其特征在于，取待测样品制备供试品溶液，并配制基质匹配标准溶液，利用液相色谱-质谱/质谱仪测定杀线威和杀线威肟；其中液相色谱条件为:色谱柱:C18柱，长50mm，内径2.1mm，填充料粒径1.7um，柱温:25～35℃，进样量:2～4μL，流速：0.25～0.35mL/min，流动相梯度洗脱方式见表1：表1流动相梯度洗脱方式时间(min)甲酸水溶液(％)甲醇(％)0.0190101.0040604.0025754.3090105.009010表1中的甲酸水溶液体积浓度为0.1％。2.根据权利要求1所述的一种同时测定动物源食品中杀线威和杀线威肟的方法，其特征在于，所述质谱条件为:电离方式：电喷雾电离，正离子扫描，检测方式：多反应监测，电喷雾电压:4950～5050V，离子源温度:500～600℃，碰撞气：medium，气帘气压力：25psi，雾化器：55psi，辅助加热器：55psi。3.根据权利要求2所述的一种同时测定动物源食品中杀线威和杀线威肟的方法，其特征在于，所述多反应监测的条件见表2:表2多反应监测的条件表2中带*的离子为定量离子。4.根据权利要求1所述的一种同时测定动物源食品中杀线威和杀线威肟的方法，其特征在于，配制所述供试品溶液的步骤为：(1)制样：取待检测的样品，切成小块，捣碎混匀，制成匀浆；(2)提取：称取步骤(1)的样品至离心管中，加入乙腈、无水硫酸钠进行匀浆，再用乙腈洗涤刀头，获得匀浆后混合物和洗涤液；将匀浆后混合物进行第一次离心，收集第一次上清液至蒸馏瓶，并于剩下的残留物中加入洗涤刀头的洗涤液，涡旋提取，并进行第二次离心，收集第二次上清液，合并两次上清液至蒸馏瓶，旋转蒸发至近干；加甲醇-二氯甲烷溶液至蒸馏瓶中，涡旋溶解残留物，待净化；(3)净化：用甲醇-二氯甲烷溶液淋洗活化乙二胺-N-丙基小柱，弃去淋洗液；将步骤(2)中待净化的样品溶液加到小柱中过柱，用甲醇-二氯甲烷溶液润洗残留有样品溶液的蒸馏瓶并将润洗液过柱，用干净的蒸馏瓶收集所有流出的样品溶液和洗脱液，旋转蒸发至蒸干；加入甲醇-水溶液，涡旋溶解残渣；将混合溶液转移至离心管中，离心后过滤至样品瓶中，供测定。5.根据权利要求1所述的一种同时测定动物源食品中杀线威和杀线威肟的方法，其特征在于，配制所述基质匹配标准溶液的步骤为：称取杀线威、杀线威肟标准品，分别用甲醇溶解定容至不同的容量瓶，得到单标储备溶液；取各单标储备溶液至同一容量瓶中，用甲醇进行稀释，得到中间标准混合溶液；用甲醇对中间标准混合溶液进行稀释，以甲醇-水溶液为溶剂配制成系列浓度的标准工作液；称取不含有杀线威与杀线威肟的样品，进行制样、提取与净化，旋转蒸发至蒸干，分别加入各浓度的标准工作液，涡旋溶解残渣；将各混合溶液转移至不同的离心管中，离心后过滤至样品瓶中，得到系列浓度的基质匹配标准溶液。6.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：阳辛凤，罗金辉，徐志，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院分析测试中心，
类型：发明
国别省市：海南;46