Dickkopf2(Dkk2)抑制作用抑制肿瘤形成制造技术

本发明专利技术涉及Dickkopf2(DKK2)的抑制作用增加CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性、减弱肿瘤血管生成，并且从而抑制肿瘤形成的发现。因此，在本文所述的各种实施方式中，本发明专利技术的方法涉及通过给患者施用有效量的DKK2基因消耗剂来治疗癌症的方法，在对象中提供抗肿瘤免疫性和抗肿瘤血管生成的方法，刺激T细胞介导的对细胞群体或组织的免疫应答和抑制对象中的肿瘤血管生成的方法。另外，本发明专利技术包括诊断癌症或发展癌症或转移的倾向的方法，以及确定免疫疗法治疗或癌症疫苗用于治疗癌症的使用的方法。此外，本发明专利技术包括用于治疗癌症的药物组合物以及用于实施上述方法的试剂盒。

Inhibitory effect of Dickkopf2 (Dkk2) on tumor formation

The present invention relates to the inhibition of Dickkopf2 (DKK2) by increasing CD8+ cytotoxic T lymphocyte (CTL) activity, reducing tumor angiogenesis, and thereby inhibiting tumor formation. Therefore, in the implementation of various methods, the method of the present invention relates to a method of treating cancer by DKK2 gene depletion agent administering to the patient an effective amount of the method of anti tumor immunity and anti angiogenesis provided in the object, method of stimulation of the cell group or organization of the immune response of T cells and by inhibiting angiogenesis in an object. In addition, the present invention includes methods of diagnosing cancer or the tendency to develop cancer or metastasis, and methods of determining the use of immunotherapy or cancer vaccines for the treatment of cancer. In addition, the present invention relates to a pharmaceutical composition for treating cancer and a kit for carrying out said method.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§119(e)要求于2014年7月3日提交的美国临时专利申请号62/020,684的优先权，该申请通过引用以其整体并入本文。关于联邦赞助的研究或开发的声明本专利技术是通过政府支持在由国立卫生研究院授予的基金CA132317下进行的。美国政府享有本专利技术的某些权利。专利技术背景癌症是全世界的主要健康问题。每年，世界各地有数千万人被诊断为癌症，并且超过一半的患者最终死于癌症。在美国大约一半的所有男性和所有女性的三分之一将在其一生中的某一时间被诊断为癌症，并且四分之一的死亡是由癌症引起的(Jemal等人，CACancerJ.Clin.，2002，52：23-47；Howlader等人，SEERCancerStatisticsReview，1975-2010，NationalCancerInstitute)。最常识别的人癌症包括由器官和实体组织产生的癌症，例如，结肠癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌和子宫内膜癌。结肠癌影响西半球二十分之一的人群(Henderson，NatureCellBiology，2000，2(9)：p.653-60)。在全球，每年有100万新患者被诊断患有结肠癌，并且其中一半死于该疾病(Liu等人，Cell，2002，108(6)：p.837-47)。在过去几十年中，癌症治疗和诊断方面取得了显著进步。癌症的治疗选择包括手术、化学疗法、放射疗法和免疫疗法。最近的免疫疗法治疗，旨在刺激免疫系统，特别引起了大量的研究。尽管免疫疗法可以是高度有效的，但是仅有小部分患者，而不管肿瘤起源器官，通常对治疗有反应。这一领域的新发现显然需要提高免疫疗法的疗效和特异性。Wnt信号传导控制多种细胞过程，包括细胞命运决定、分化、极性、增殖和迁移。分泌蛋白的Wnt家族结合几类受体，例如低密度脂蛋白受体相关(LRP)蛋白5和6(LRP5/6)，从而导致几种不同的细胞内信号传导级联的活化，包括Wnt/β-联蛋白、Wnt/钙和Wnt/Jnk途径。Wnt与LRP5/6的结合通过阻断多蛋白复合物的功能特异性激活Wnt/β-联蛋白途径，所述多蛋白复合物引发β-联蛋白的降解，导致β-联蛋白在细胞质和细胞核中的积累。核β-联蛋白与Lef/TCF家族转录因子的成员复合并激活基因表达。可能由干细胞功能改变引起的病理状态，例如退行性疾病和癌症，通常与Wnt/β-联蛋白途径活性的变化相关。事实上，Wnt/β-联蛋白途径的过度活化被认为诱导干细胞的过早衰老和年龄相关的干细胞功能丧失(Brack等人，Science，2007，第317卷，第5839期，第807-810页；Liu等人，Science，2007，第317卷，第5839期，第803-806页)。在癌症中，Wnt/β-联蛋白途径的过度活化，其通常与其他细胞生长调节基因的突变结合，可导致异常细胞生长(Reya和Clevers，Nature，2005，434(7035)：843-50)。因此，许多正在进行的研究集中在Wnt/β-联蛋白途径作为癌症中的潜在治疗靶标(Breuhahn等人，Oncogene，2006，25：3787-3800；Greten等人，BrJCancer，2009，100：19-23)。特别地，包括癌症基因组测序项目的几个研究揭示，超过80％的结肠癌具有突变或甚至丧失腺瘤性结肠息肉病(adenomatosispolyposiscoli)(APC)基因，所述基因是Wnt/β-联蛋白途径的主要抑制剂(Kinzler和Vogelstein，Cell.1996，Oct18；87(2)：159-70.Review；Sjoblom等人，Science，2006，Oct13；314(5797)：268-74；Mann等人，ProcNatlAcadSciUSA，1999.96(4)：第1603-8页)。APC和蛋白质如GSK3β和Axin形成标记β-联蛋白降解的复合物。APC中的突变破坏这种复合物，并导致细胞质β-联蛋白水平增加及其核易位。由于β-联蛋白是Wnt信号传导的最重要的衔接子，它促进致癌因子响应于Wnt配体的表达。Wnt信号传导也受许多分泌的多肽拮抗剂调节。这些包括四种分泌的Dickkopf(Dkk)蛋白(Monaghan等人，MechDev，1999.87：45-56；Krupnik等人，Gene，1999.238：301-13)。在这四种Dkk蛋白中，已经证明DKK1、2和4是经典Wnt信号传导的有效拮抗剂(Mao等人，Nature，2001.411：321-5；Semenov等人，CurrBiol，2001.11：951-61；Bafico等人，NatCellBiol，2001.3：683-6；Niehrs，Nature，2006.25：7469-81)，通过以高亲和力直接结合至Wnt共同受体LRP5/6(Mao等人，Nature，2001.411：321-5；Semenov等人，CurrBiol，2001.11：951-61；Bafico等人，NatCellBiol，2001.3：683-6)。虽然DKK1据报道在脊椎动物发育中的头和心形成中起关键作用(Niida等人，Oncogene，2004年11月4日；23(52)：8520-6)，但是Dkk2似乎不在脊椎动物发育中发挥皮层作用。缺乏Dkk2的小鼠具有较低的血糖(Li等人，ProcNatlAcadSciUSA，2012.109：11402-7)、降低的骨骼质量(Li等人，NatGenet，2005.37：945-52)和缺陷性眼表上皮(Gage等人，DevBiol，2008.317：310-24；Mukhopadhyay等人，Development，2006.133：2149-54)。鉴于DKK蛋白是Wnt拮抗剂，常规的认识是DKK的失活将增加Wnt活性并因此加速癌症形成。然而，他们在癌症形成中的作用还没有直接研究。Dkk分子含有两个保守的富含半胱氨酸的结构域(Niehrs，Nature，2006.25：7469-81)。以前，显示DKK1和DKK2的第二个富含Cys的结构域在抑制经典Wnt信号传导中起更重要的作用(Li等人，JBiolChem，JBiolChem，2002.277：5977-81；Brott和Sokol，Mol.Cell.Biol.，2002.22：6100-10)。最近，解构了DKK2的第二个富含Cys结构域的结构，并描绘了DKK与LRP5/6和Kremen的相互作用所需的结构域上的氨基酸残基(Chen等人，JBiolChem，2008.283：23364-70；Wang等人，JBiolChem，2008.283：23371-5)。Dkk与LRP5/6的相互作用是Dkk介导的Wnt抑制的主要机制的基础。尽管Dkk与Kremen(也是跨膜蛋白)的相互作用显示促进Wnt信号传导的Dkk拮抗作用，但是这种相互作用可能具有其他未解构的功能。Ala扫描诱变鉴定了LRP5的第三个YWTD重复结构域上的氨基酸残基对结合DKK1和DKK2是重要的(Zhang等人，Mol.Cell.Biol.，2004.24：4677-84)。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗有需要的对象的癌症的方法，所述方法包括给所述对象施用有效量的在药学上可接受的载体中的Dickkopf2(DKK2)基因消耗剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.03 US 62/020,6841.一种治疗有需要的对象的癌症的方法，所述方法包括给所述对象施用有效量的在药学上可接受的载体中的Dickkopf2(DKK2)基因消耗剂。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述癌症包括肿瘤，所述肿瘤包括表达腺瘤性结肠息肉病(APC)突变的细胞。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述DKK2消耗剂选自DKK2抗体、siRNA、核酶、反义分子、适配体、肽模拟物、小分子及其组合。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述DKK2消耗剂具有中和活性。5.根据权利要求3所述的方法，其中所述DKK2抗体包括选自以下的抗体：多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、合成抗体、重链抗体、人抗体、抗体的生物活性片段、抗体模拟物及其任何组合。6.根据权利要求3所述的方法，其中所述DKK2抗体靶向包含选自SEQIDNO：1、5和7的氨基酸序列中的至少一种的DDK2中和表位。7.根据权利要求3所述的方法，其中所述DKK2抗体是包含选自以下的氨基酸序列中的至少一种的合成抗体：YAL008-5-1A10(SEQIDNO8和9)、YAL008-7-1A10(SEQIDNO：12和13)以及YAL008-1-5F8(SEQIDNO10和11)。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述癌症选自结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肠癌、胰腺癌和食管癌。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述癌症是转移性的。10.根据权利要求1所述的方法，还包括给所述对象施用另外的药剂，其选自化学治疗剂、抗细胞增殖剂、免疫治疗剂及其任何组合。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述另外的药剂是程序性细胞死亡1(PD-1)抗体。12.根据权利要求10所述的方法，其中将所述DKK2消耗剂和所述另外的药剂共同施用至所述对象。13.根据权利要求10所述的方法，其中所述DKK2消耗剂和所述另外的药剂是共同配制的并且被共同施用至所述对象。14.根据权利要求1所述的方法，其中给药途径选自吸入、口服、直肠、阴道、胃肠外、外部、经皮、肺部、鼻内、含服、眼部、鞘内及其任何组合。15.一种治疗或减轻有需要的对象的血管生成的方法，所述方法包括给所述对象施用有效量的在药学上可接受的载体中的Dickkopf2(DKK2)基因消耗剂。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述血管生成是与癌症相关的肿瘤血管生成。17.根据权利要求15所述的方法，其中所述血管生成是与缺血性和炎性疾病相关的病理性血管生成。18.根据权利要求15所述的方法，其中所述血管生成与心血管疾病相关。19.根据权利要求16所述的方法，其中所述癌症包括肿瘤，所述肿瘤包括表达腺瘤性结肠息肉病(APC)突变的细胞。20.根据权利要求15所述的方法，其中所述DKK2消耗剂选自DKK2抗体、siRNA、核酶、反义分子、适配体、肽模拟物、小分子及其组合。21.根据权利要求15所述的方法，其中所述DKK2消耗剂具有中和活性。22.根据权利要求20所述的方法，其中所述DKK2抗体包括选自以下的抗体：多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、合成抗体、重链抗体、人抗体、抗体的生物活性片段、抗体模拟物及其任何组合。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述DKK2抗体靶向包含选自SEQIDNO：1、5和7的氨基酸序列中的至少一种的DDK2中和表位。24.根据权利要求22所述的方法，其中所述DKK2抗体是包含选自以下的氨基酸序列中的至少一种的合成抗体：YAL008-5-1A10(SEQIDNO8和9)、YAL008-1-5F8(SEQIDNO：10和11)以及YAL008-7-1A10(SEQIDNO12和13)。25.根据权利要求16所述的方法，其中所述癌症选自结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肠癌、胰腺癌和食管癌。26.根据权利要求16所述的方法，其中所述癌症是转移性的。27.根据权利要求15所述的方法，还包括给所述对象施用另外的药剂，其选自化学治疗剂、抗细胞增殖剂、免疫治疗剂及其任何组合。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述另外的药剂是程序性细胞死亡1(PD-1)抗体。29.根据权利要求27所述的方法，其中将所述DKK2消耗剂和所述另外的药剂共同施用至所述对象。30.一种用于治疗对象的癌症的药物组合物，所述药物组合物包含DKK2消耗剂和药学上可接受的载体。31.根据权利要求30所述的药物组合物，其中所述癌症包括肿瘤，所述肿瘤包括表达腺瘤性结肠息肉病(APC)突变的细胞。32.根据权利要求30所述的药物组合物，其中所述DKK2消耗剂具有中和活性。33.根据权利要求30所述的药物组合物，其中所述DKK2消耗剂选自DKK2抗体、siRNA、核酶、反义分子、适配体、肽模拟物、小分子及其组合。34.根据权利要求30所述的药物组合物，其中所述DKK2抗体包括选自以下的抗体：多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、合成抗体、重链抗体、人抗体、抗体的生物活性片段、抗体模拟物及其任何组合。35.根据权利要求34所述的药物组合物，其中所述DKK2抗体靶向包含选自SEQIDNO：1、5和7的氨基酸序列中的至少一种的DDK2中和表位。36.根据权利要求34所述的药物组合物，其中所述DKK2抗体是包含选...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·吴，L·孙，
申请(专利权)人：耶鲁大学，
类型：发明
国别省市：美国;US