抗HER2醣抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及抗HER2醣抗体及其用途。本发明专利技术揭示关于新颖种类的抗HER2单株抗体，其包括在每一Fc上具有相同N‑聚醣的抗HER2 IgG分子的均质群体。本发明专利技术抗体可自抗HER2单株抗体由Fc醣改造产生。重要的是与未经醣改造的相应单株抗体相比，本发明专利技术抗体具有改良的治疗价值与增加的ADCC活性及增加的Fc受体结合亲和力。

Anti HER2 glycoprotein antibodies and uses thereof

The invention relates to an anti HER2 glycoprotein antibody and uses thereof. The invention discloses a novel type of anti HER2 monoclonal antibody, including homogeneous groups with anti HER2 IgG N same molecular chitosan in each Fc. The antibody of the invention can be produced by the transformation of HER2 monoclonal antibody by Fc sugar. It is important that compared with the corresponding monoclonal antibodies without sugar modification, the present invention has improved therapeutic value and increased ADCC activity and increased Fc receptor binding affinity.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请案本专利技术主张以下优先权：美国临时申请案美国申请序号(USSN)62/003,104，申请于2014年5月27日、USSN62/020,199，申请于2014年7月2日及USSN62/110,338，申请于2015年1月30日。其内容各以全文引用方式并入本文中。
技术介绍
Fc醣基化已成为治疗性单株抗体领域中的重要主题。Fc醣基化可显着改质Fc效应物功能(例如Fc受体结合及补体活化)，且由此影响治疗抗体的活体内安全及功效特征。基于基因改造的若干表现系统已报导会产生治疗性单株抗体。这些表现系统包含酵母(例如嗜甲醇酵母菌)、昆虫细胞系及甚至细菌。然而，这些表现系统具有诸多可不利地影响治疗抗体的效应物功能的缺陷。大部分经批准生物药物是在哺乳动物细胞培养系统中产生以递送具有具有期望醣基化模式的蛋白质且由此确保减小的免疫原性及较高活体内功效及稳定性。非哺乳动物表现系统(例如CHO或NS0细胞)具有添加复杂人类型聚醣所需的机制。然而，这些系统中所产生的聚醣可不同于人类中所产生的聚醣。其醣基化机制通常添加不期望碳水化合物污染物，此可改变蛋白质折迭，诱导免疫原性，且减小药物的循环寿命。显而易见，呈N-乙酰基神经胺酸形式的唾液酸不能有效添加于大部分哺乳动物细胞中且6-链接在这些细胞中丢失。唾液酸转移所需的具有各种酶活性的改造细胞尚未成功提供醣型至蛋白质药物的人类样模式。迄今为止，需要将动物细胞或醣蛋白改造成尽可能类似于人类蛋白质的高度唾液酸化产物。另外，哺乳动物细胞培养递送并不皆具有相同性质的醣基化模式的异质混合物。这些醣基化模式可影响诸如治疗性蛋白质的安全性、功效及血清半衰期等性质。曲妥珠单抗(Trastuzumab)在1998年经批准用于治疗患有过度表现HER2的转移性乳癌(Baselga等人(1996)J.Clin.Oncol.14:737-744)，其是结合至Her2/neu受体的细胞外组份的人类化抗HER2IgG抗体。HER2过度表现观察于大约20％的人类乳癌(在下文中称为HER2阳性乳癌)中且涉及与这些肿瘤有关的积极生长及较差临床结果(Slamon等人(1987)Science235:177-182).曲妥珠单抗以各种不同机制发挥作用，但主要作用是结合至癌细胞表面上的人类表皮生长因子受体2(HER-2)的细胞外膜部分，从而防止其细胞内酪胺酸激酶的活化。Herceptin作用于介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的免疫系统上且可固定补体，但认为其不能介导补体依赖性细胞毒性(CDC)。曲妥珠单抗是在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中产生且在Fc结构域中的醣基化模式具有高度异质性。异质混合物中的每一抗HER2IgG分子可能并不皆具有相同性质，且某些结合至治疗蛋白的N-连接寡醣可在患者中触发不期望效应，由此可视为安全问题。以单一药剂(单一疗法)形式给予的抗体曲妥珠单抗的反应率介于约15-26％之间。
技术实现思路
因此，本揭示内容的一态样涉及抗HER2醣抗体的组合物，其包括在每一Fc上具有相同N-聚醣的抗HER2IgG分子的均质群体。本专利技术的抗HER2醣抗体可自抗HER2单株抗体由Fc醣改造产生。重要的是，与未醣改造的相应单株抗体相比，抗HER2醣抗体具有改良的治疗价值以及增加的ADCC活性或增加的Fc受体结合亲和力。如本文中所使用，术语「抗HER2醣抗体」(「anti-HER2glycoantibodies，抗GAbs」)是指在Fc上具有相同醣型的抗HER2IgG分子的均质群体。术语「抗HER2醣抗体」(「anti-HER2glycoantibody，抗HER2GAb」)是指抗HER2醣抗体(anti-HER2glycoantibodies)中的个别IgG分子。在优选实施例中，N-聚醣连接至Fc区的Asn-297。在一些实施例中，本文所阐述的抗HER2醣抗体包括具有SEQIDNO:1中所陈述氨基酸序列的重链及具有SEQIDNO:2中所陈述氨基酸序列的轻链。在一优选实施例中，所述醣抗体包括曲妥珠单抗的轻链序列及重链序列。本文揭示诸多自曲妥珠单抗由Fc醣改造构筑的功能活性抗HER2醣抗体。重要的是，与曲妥珠单抗相比，具有最优选化醣型的抗HER2醣抗体展现改良的ADCC活性。此是首次报导展示已成功生成具有改良的ADCC活性的均质Fc-醣基化抗HER2抗体。在一些实施例中，本文所阐述的抗HER2醣抗体的特征在于这些醣抗体与曲妥珠单抗相比展现对FcγRIIIA的增进的结合。在一些实施例中，本文所阐述的N-聚醣具有二分枝结构。在一些实施例中，N-聚醣包括二等分GlcNAc。在一些实施例中，本文所阐述的N-聚醣包括至少一个α2-6末端唾液酸。在某些实施例中，N-聚醣包括一个α2-6末端唾液酸。在一优选实施例中，N-聚醣包括两个α2-6末端唾液酸。在一些实施例中，本文所阐述的N-聚醣包括至少一个α2-3末端唾液酸。在某些实施例中，N-聚醣包括一个α2-3末端唾液酸。在一优选实施例中，N-聚醣包括两个α2-3末端唾液酸。在一些实施例中，本文所阐述的N-聚醣包括至少一种半乳醣。在某些实施例中，N-聚醣包括一种半乳醣。在一优选实施例中，N-聚醣包括两种半乳醣。优选地，本揭示内容的N-聚醣不含核心岩藻醣。在一些实施例中，本文所阐述的N-聚醣具有选自由以下组成的群的序列Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、GlcNAc3Man3GlcNAc2、GlcNAc2Man3GlcNAc2、GlcNAcMan3GlcNAc2及Man3GlcNAc2。在优选实施例中，本文所阐述的N-聚醣具有选自由以下组成的群的序列：Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗HER2醣抗体或抗原结合片段的组合物，其包括在每一抗HER2IgG分子的Fc区上具有相同N‑聚醣的抗HER2IgG分子的均质群体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.27 US 62/003,104;2014.07.02 US 62/020,199;1.一种抗HER2醣抗体或抗原结合片段的组合物，其包括在每一抗HER2IgG分子的Fc区上具有相同N-聚醣的抗HER2IgG分子的均质群体。2.如权利要求1的组合物，其中所述抗HER2IgG分子包括具有SEQIDNO:1中所述氨基酸序列的重链及具有SEQIDNO:2中所述氨基酸序列的轻链。3.如权利要求1的组合物，其中所述抗HER2IgG分子包括曲妥珠单抗(Trastuzumab)(Herceptin)的轻链序列及重链序列。4.如权利要求1的组合物，其中这些抗HER2醣抗体具有优于曲妥珠单抗的改良ADCC。5.如权利要求1的组合物，其中这些抗HER2醣抗体具有优于曲妥珠单抗的改良FcγRIIIA结合性。6.如权利要求1的组合物，其中所述N-聚醣连接至所述Fc区的Asn-297。7.如权利要求1的组合物，其中所述N-聚醣不含岩藻醣。8.如权利要求1的组合物，其中所述N-聚醣包括至少一个α2-6末端唾液酸。9.如权利要求1的组合物，其中所述N-聚醣包括两个α2-6末端唾液酸。10.如权利要求1的组合物，其中所述N-聚醣是选自由以下组成的群：Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、GlcNAc3Man3GlcNAc2、GlcNAc2Man3GlcNAc2、GlcNAcMan3GlcNAc2及Man3GlcNAc2。11.如权利要求10的组合物，其中所述N-聚醣是选自由以下组成的群：Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia2(α2-3/α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia2(α2-6/α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)GalGlcNAc2Man3GlcNAc2、Sia(α2-6)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Sia(α2-3)GalGlcNAc3Man3GlcNAc2、Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2及Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2。12.一种医药调配物，其包括如权利要求1至11中任一项的抗HER2醣抗体或抗原结合片段的组合物及医药上可接受的载剂。13.一种在有需要的患者中治疗表现HER2的肿瘤的方法，所述方法包括向所述患者投与有效量的如权利要求12的医药调配物。14.如权利要求13的方法，其中所述肿瘤是过度表...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁启惠，吴宗益，
申请(专利权)人：中央研究院，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71