EV71病毒IgA抗体检测试纸条及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种EV71病毒IgA抗体检测试纸条，包括样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和背板，所述的硝酸纤维素膜设有EV71病毒VP1蛋白抗原多肽片段检测线和人IgA抗体对照线，所述的标记垫设有抗人IgA抗体‑胶体金标记物。本发明专利技术的EV71病毒IgA抗体检测试纸条用于唾液EV71病毒检测，通过检测唾液样品中的IgA抗体，能够实现EV71病毒的快速筛查，并能提高检测结果的可靠性，减少假阴性的情况。该检测方法操作简单，结果快速，检测样品的采集无侵入性，避免了传统的采血和采集咽拭子、肛拭子、脑脊液带来的不适和交叉感染。

EV71 virus IgA antibody test paper strip and its application

The invention relates to a kind of EV71 virus IgA antibody detection strip, including sample pad, marking pad, nitrocellulose membrane, absorbent paper and board, the nitrocellulose membrane is provided with EV71 virus VP1 antigen polypeptide fragment of human IgA antibody test line and control line, marking pad is provided with anti human IgA antibody colloid gold label. Detection of EV71 virus IgA antibody test paper strip for the detection of salivary EV71 virus of the invention, the detection of IgA antibody in saliva samples, can realize the rapid screening of EV71 virus, and can improve the reliability of test results, reduce false negative cases. The method is simple in operation, quick in result, non-invasive in detection of sample collection, and avoids the discomfort and cross infection caused by traditional blood collection and throat swab, anal swab and cerebrospinal fluid.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种病毒检测试纸条及其应用，具体地涉及一种EV71病毒IgA抗体检测试纸条及其应用。
技术介绍
肠道病毒71型(简称EV71病毒)属小RNA病毒科肠道病毒属，无包膜的单股正链RNA病毒，是引起手足口病(hand-foot-mouthdisease，HFMD)的主要病原体之一。EV71病毒可经空气飞沫等途径传播，具高致病性，常导致如无菌性脑膜炎、脑炎、脊髓灰质炎样麻痹及神经源性肺水肿等严重的中枢神经系统并发症，并引起死亡，目前没有有效的治疗药物，主要通过早期诊断及对症治疗的方式。EV71病毒主要感染6岁以下，特别是2-5岁的儿童，该年龄段儿童大多就读幼儿园，因此幼儿园是重点的EV71病毒预防单位，在手足口病流行季节，有必要对幼儿园进行筛查监控，减少EV71病毒在幼儿园的传播。传统的筛查手足口病主要是通过查看口腔疱疹和温度测试的方法排查手足口病，但是临床发现部分手足口患者早期没有明显的手、足、口腔疱疹症状或者发热现象，因此出现了后来的EV71病毒的早期诊断方法。EV71病毒的早期诊断方法较多，主要涉及组织细胞培养技术、血清学、分子生物学三个领域技术，比较常用的有细胞分离培养、RT-PCR核酸分子检测和血清IgM抗体ELISA检测三种方法，但这些方法均存在一定的缺陷：细胞分离培养是EV71病毒感染确定的金标准方法，但是由于检测时间长(超过5天)、实验条件要求高、操作人员技术要求高等缺点限制了其临床诊断应用。RT-PCR核酸分子检测是EV71病毒早期检测方法中灵敏度最高的方法，通过检测患者咽喉部拭子和肛门拭子的EV71病毒判断感染情况，需要专业的技术人员和昂贵的荧光PCR扩增仪，基层医疗部门比较难开展该诊断方法。另外，在采集患者咽喉部细胞时，较容易引起患者不适造成反呕或者呕吐发生，给医务人员工作增加困难，同时也容易增加采样室病毒污染的风险。最后，EV71病毒感染患者后病毒在患者体内流转过程比较复杂，根据病情的发展病毒有时会在咽喉部细胞中可以检测咽拭子得到结果，有时会在肠道中可以通过检测肛拭子得到结果，有时候会同时在咽喉处和肠道中，但有时候病毒均不在咽喉处和肠道中，因此RT-PCR结果经常会有假阴性的结果。血清学IgM抗体ELISA检测主要通过检测血清中EV71病毒IgM抗体了解患者近期感染病毒的情况，对临床诊治有一定的帮助，但是很多EV71病毒患者是小于6岁的儿童，较多幼童的血管较细，而且对抽血有恐惧感，因此给临床医护人员操作带来一定的难度。另外有相当部分的儿童二次感染EV71病毒，该群体在感染EV71病毒时产生较低浓度的EV71病毒IgM抗体，因此检测血清IgM抗体比较容易得到假阴性的结果。胶体金免疫分析(Colloidalgoldimmunoassay，CGIA)产生于20世纪80年代，是继荧光标记、放射同位素标记和酶标记三大标记技术之后发展起来的固相标记免疫检测技术，现已应用到电镜、光镜、凝集试验、免疫印迹、斑点渗滤及免疫层析等方面，其中的胶体金免疫层析技术以其简单快速、特异灵敏、无需辅助试剂和仪器、肉眼观察结果、结果可长期保存等特点，成为当今最快速灵敏方便的免疫学检测技术之一，特别适用于医院、基层单位、野外作业以及时间紧迫的检查和大面积普查。
技术实现思路
为了克服现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种EV71病毒IgA抗体检测试纸条及其应用，能够实现EV71病毒的快速筛查。本专利技术提供了一种EV71病毒IgA抗体检测试纸条，包括样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和背板，所述的硝酸纤维素膜设有EV71病毒VP1蛋白抗原多肽片段检测线和人IgA抗体对照线，所述的标记垫设有抗人IgA抗体-胶体金标记物。进一步地，所述EV71病毒VP1蛋白抗原多肽片段的氨基酸序列如序列表SeqIDNO.1所示。进一步地，所述抗人IgA抗体选自羊抗人IgA多克隆抗体、鼠抗人IgA单克隆抗体、兔抗人IgA单克隆抗体或兔抗人IgA多克隆抗体。进一步地，所述吸水纸、硝酸纤维素膜、标记垫、样品垫依次粘附在所述背板上。本专利技术还提供了另外一种EV71病毒IgA抗体检测试纸条，包括样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、背板，所述的硝酸纤维素膜设有抗人IgA抗体检测线和EV71病毒VP1蛋白抗体对照线，所述的标记垫设有EV71病毒VP1蛋白抗原多肽片段-胶体金标记物。进一步地，所述EV71病毒VP1蛋白抗原多肽片段的氨基酸序列如序列表SeqIDNO.1所示。进一步地，所述的抗人IgA抗体选自羊抗人IgA多克隆抗体、鼠抗人IgA单克隆抗体、兔抗人IgA单克隆抗体或兔抗人IgA多克隆抗体；所述的EV71病毒VP1蛋白抗体选自鼠抗EV71病毒VP1蛋白单克隆抗体、人抗EV71病毒VP1蛋白多克隆抗体、兔抗EV71病毒VP1蛋白单克隆抗体、兔抗EV71病毒VP1蛋白多克隆抗体或羊抗EV71病毒VP1蛋白多克隆抗体。进一步地，所述吸水纸、硝酸纤维素膜、标记垫、样品垫依次粘附在所述背板上。本专利技术的EV71病毒IgA抗体检测试纸条可用于唾液中的EV71病毒检测，检测步骤为：取唾液样品，加入样品稀释液中，然后放入所述的EV71病毒IgA抗体检测试纸条进行检测。进一步地，所述的样品稀释液为含有0.5％牛血清白蛋白、0.2％酪蛋白、1％胰蛋白胨和0.02％叠氮钠的PBS缓冲液。EV71病毒衣壳由VP1、VP2、VP3和VP4四种蛋白质组成，其中VP1蛋白位于病毒粒子表面，其由297个氨基酸组成，是EV71病毒主要的中和性抗原表位，能刺激机体产生高滴度的保护性中和抗体。当EV71病毒通过口腔侵入人体，开始会在人咽喉处细胞中定植和繁殖，这时人体免疫系统率先启动粘膜免疫对病毒进行免疫攻击，粘膜免疫通过唾液产生病毒特异性的IgA抗体抵抗病毒侵染。本专利技术的EV71病毒IgA抗体检测试纸条，通过检测唾液样品中的IgA抗体，能够实现EV71病毒的快速筛查，并能提高检测结果的可靠性，减少假阴性的情况。该检测方法操作简单，结果快速，检测样品的采集无侵入性，避免了传统的采血和采集咽拭子、肛拭子、脑脊液带来的不适和交叉感染。附图说明图1为本专利技术的EV71病毒IgA抗体检测试纸条的结构示意图。图2唾液采集棒释放唾液样品的方法示意图。图3为本专利技术的EV71病毒IgA抗体检测试纸条的检测方法示意图。图4为本专利技术的检测试纸条检测EV71病毒IgA抗体的阳性结果示意图。图5为本专利技术的检测试纸条检测EV71病毒IgA抗体的阴性结果示意图。图6为本专利技术的检测试纸条检测EV71病毒IgA抗体的无效结果示意图。具体实施方式为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本专利技术。【实施例1】EV71病毒IgA抗体检测试纸条制备(捕获法)1、原料来源：羊抗人IgA抗体购自Sigma公司，人IgA抗体购自广州市诺思生物科技有限公司。EV71病毒融合蛋白抗原多肽片段的序列如SeqIDNO.1所示，总共58个氨基酸，委托上海吉尔生化公司负责合成，纯度大于98％，冻干保存。胶体金溶液(40nm)购自上海杰一生物技术有限公司。2、样品垫及标记垫的预处理样品垫和标记垫均为聚酯膜材料，使用前需用预处理液进行浸泡处理。预处理液为由0.01～0.02mol/L的磷酸盐缓冲液(pH7.0～7.5)、3g/本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种EV71病毒IgA抗体检测试纸条，其特征在于，包括样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和背板，所述的硝酸纤维素膜设有EV71病毒VP1蛋白抗原多肽片段检测线和人IgA抗体对照线，所述的标记垫设有抗人IgA抗体‑胶体金标记物。

【技术特征摘要】
1.一种EV71病毒IgA抗体检测试纸条，其特征在于，包括样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和背板，所述的硝酸纤维素膜设有EV71病毒VP1蛋白抗原多肽片段检测线和人IgA抗体对照线，所述的标记垫设有抗人IgA抗体-胶体金标记物。2.根据权利要求1所述的EV71病毒IgA抗体检测试纸条，其特征在于，所述EV71病毒VP1蛋白抗原多肽片段的氨基酸序列如序列表SeqIDNO.1所示。3.根据权利要求1所述的EV71病毒IgA抗体检测试纸条，其特征在于，所述抗人IgA抗体选自羊抗人IgA多克隆抗体、鼠抗人IgA单克隆抗体、兔抗人IgA单克隆抗体或兔抗人IgA多克隆抗体。4.根据权利要求1所述的EV71病毒IgA抗体检测试纸条，其特征在于，所述吸水纸、硝酸纤维素膜、标记垫、样品垫依次粘附在所述背板上。5.一种EV71病毒IgA抗体检测试纸条，其特征在于，包括样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和背板，所述的硝酸纤维素膜设有抗人IgA抗体检测线和EV71病毒VP1蛋白抗体对照线，所述的标记垫设有EV71病毒VP1蛋白抗原多肽片段-胶体金标记物。6.根据权利要求5所述的EV71病毒Ig...

【专利技术属性】
技术研发人员：游爱萍，李有生，刘轶锴，向怀勇，
申请(专利权)人：广州瑞辉生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44