The invention discloses a method for disinfection and inoculation of fern spores, purification column tool with sterilization method and DNA tissue culture technology, sterilization and inoculation method is designed to trace the fern spore, it is suitable for the in vitro preservation process. This technique overcomes the sterilization is easy to appear in the disinfection process of fern spore is not sufficient, and the mixture of disinfectant residues, can effectively reduce the contamination rate, improve the inoculation efficiency. The invention has the advantages of high efficiency, low cost, convenient operation, high efficiency and high efficiency, and can be used for sterilizing and inoculating the spores of the fern.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物组织培养
,具体涉及一种适于离体保存过程中蕨类孢子灭菌方法及接种,
技术介绍
我国的蕨类资源十分丰富,约有2600种,占全世界的1/5,其中很多是中国特有。蕨类植物不仅在生物进化和植物系统发育的研究中起着重要作用,也与人类生活联系密切,许多蕨类植物在药用、观赏等众多方面具有重要价值。可见,关于蕨类的商品化生产和栽培育种的开发具有广阔前景。蕨类植物组织培养过程中,以孢子作为外植体进行组织培养具有不损害母株、繁殖系数大等优点,是蕨类植物生产上使用最广泛的繁殖途径。蕨类孢子非常微小,呈粉尘状,在进行无菌播种时,常用的方法有滤纸包裹或置于离心管等器皿中,再用次氯酸钠或氯化汞消毒,无菌水多次冲洗后接种。由于蕨类孢子过于微小,在多个物种同时接种时,包裹法容易将孢子漏出造成混种,而多层的滤纸包裹又可能导致灭菌不充分;而离心灭菌法的操作过程中,其废液去除困难,容易将孢子吸走,或因消毒液残留而潜在延长灭菌时间,进而导致孢子失活。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术存在的缺陷,借助当前普遍可得的DNA纯化柱(包含吸附柱和收集管)提供一种操作简便,效率高,适于离体保存过程中的蕨类孢子灭菌及接种方法。为实现本专利技术的目的,本专利技术提供了如下的技术方案:收集孢子,把蕨类孢子叶装入硫酸纸袋中,标记代号后置于通风干燥处,待孢子自由脱落;把DNA纯化柱(规格:吸附柱1ml,收集管2ml)、1ml枪头、纯净水在121℃高温灭菌20-30min备用;用对折过的硫酸纸收集脱落在纸袋中的孢子,简单的去除碎叶、环带、鳞毛等杂质后沿着折痕倒入已灭菌的吸附柱中,盖好 ...
【技术保护点】
一种蕨类孢子的消毒及接种方法,其特征在于该方法先收集蕨类孢子,把蕨类孢子叶装入硫酸纸袋中,标记代号后置于通风干燥处,待孢子自由脱落;把DNA纯化柱,规格:吸附柱1ml、收集管2ml、1ml枪头、纯净水在121℃高温灭菌20‑30min备用;用对折过的硫酸纸收集脱落在纸袋中的孢子,简单的去除杂质碎叶、环带、鳞毛后沿着折痕倒入已灭菌的吸附柱中,盖好盖子,放入收集管中,并做好标记,放置于离心管架上;在无菌条件下,加入600μl 75%乙醇,倒立纯化柱1‑2次,之后200‑1200rpm离心20s;从加乙醇开始,直到完成离心,整个操作过程控制在25‑35s内;倒弃收集管中废液,在无菌条件下加入600μl无菌水,反复吸打溶液使孢子悬浊,充分漂洗孢子,然后200‑1200rpm离心20s,重复1‑2次,洗脱乙醇;倒弃收集管中废液,在无菌条件下加入600μl 0.1‑0.2%氯化汞灭菌2‑4min或2%次氯酸钠消毒6‑8min,反复吸打溶液使孢子悬浊充分灭菌,然后200‑1200rpm离心20s;倒弃收集管中废液,在无菌条件下加入600μl无菌水,反复吸打使孢子悬浊,充分漂洗孢子,然后200‑120 ...
【技术特征摘要】
1.一种蕨类孢子的消毒及接种方法,其特征在于该方法先收集蕨类孢子,把蕨类孢子叶装入硫酸纸袋中,标记代号后置于通风干燥处,待孢子自由脱落;把DNA纯化柱,规格:吸附柱1ml、收集管2ml、1ml枪头、纯净水在121℃高温灭菌20-30min备用;用对折过的硫酸纸收集脱落在纸袋中的孢子,简单的去除杂质碎叶、环带、鳞毛后沿着折痕倒入已灭菌的吸附柱中,盖好盖子,放入收集管中,并做好标记,放置于离心管架上;在无菌条件下,加入600μl75%乙醇,倒立纯化柱1-2次,之后200-1200rpm离心20s;从加乙醇开始,直到完成离心,整个操作过程控制在25-35s内;倒弃收集管中废液,在无菌条件下加入600μl无菌水,反复吸打溶液使孢子悬浊,充分漂洗孢子,然后200-1200rpm离心20s,重复1-2次,洗脱乙醇;倒弃收集管中废液,在无菌条件下加入600μl0.1-0.2%氯化汞灭菌2-4min或2%次氯酸钠消毒6-8min,反复吸打溶液使孢子悬浊充分灭菌,然后200-1200rpm离心20s;倒弃收集管中废液,在无菌条件下加入600μl无菌水,反复吸打使孢子悬浊,充分漂洗孢子,然后200-1200rpm离心20s,此操作重复3-4次,使消毒液彻底洗脱;再向离心之后的吸附柱中添加600μl无菌水,反复吸打使之呈孢子悬浊液,吸取100μl孢子悬浊液接种到培养基上,实现接种。2.一种蕨类孢子的消毒及接种方法,其特征在于该方法包括下述步骤:步骤1:收集孢子,把蕨类孢子叶片装入硫酸纸袋中,标记代号后置于通风干燥处,等孢子自由脱落;步骤2:把DNA纯化柱,规格:吸附柱1ml,收集管2ml、1ml枪头、纯净水在121℃高温灭菌20-30min备用;步骤3:在对折过的硫酸纸片上铺一层擦镜纸,把自由脱落在硫酸纸袋中的孢子倒在擦镜纸上,轻微抖...
【专利技术属性】
技术研发人员:何俊,李村富,孟静,杨俊波,李德铢,
申请(专利权)人:中国科学院昆明植物研究所,
类型:发明
国别省市:云南;53
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