本发明专利技术公开了抗乙肝病毒的鹊肾树提取物及其提取工艺，提取物是基本结构式为Ｃ↓［３］－Ｃ↓［６］－Ｃ↓［６］－Ｃ↓［３］的鹊肾树木脂素类化合物。提取工艺为：粉碎鹊肾树→乙醇或甲醇或水提取→提取液浓缩→浓缩液分别用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取→萃取物分别进行硅胶柱层析→用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、甲醇中的一种或一种以上梯度洗脱→鹊肾树木脂素类化合物。体外实验表明，对乙肝病毒ＨｅｐＧ２．２．１５细胞系ＨＢｓＡｇ表达的抑制作用药物剂量在１００μｇ／ｍｌ时抑制率达７６．５％以上；对ＨｂｅＡｇ表达的抑制作用药物剂量在１００μｇ／ｍｌ时抑制率达８１．６％以上。本发明专利技术不仅找到了抗乙肝病毒的一种新的中药药源，而且药物的提取工艺简单成熟，对开发高效低毒的抗乙肝病毒的新药有非常积极的意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药及提取方法，具体说是抗乙肝病毒的鹊肾树提取物及其提 取工艺。
技术介绍
乙肝是一种严重危害人类健康的传染病，引起该病的病原体是乙肝病毒。 目前国内外治疗乙肝的药物主要用干扰素，核苷类药物，但这类药价格昂贵， 治疗效果也只有30%左右，而且停止用药后，容易产生反复。我国是乙型肝炎高发区，现患病率为277人/万人，年发病率95人/万人，全国约有1.3亿人是乙 肝病毒携带者，防治该病的任务繁重而又迫切。目前，越来越多的科技工作者把 研究方向转向了来源丰富，价廉易得、毒副作用小的天然药物。鹊肾树为桑科鹊肾树属植物，属于乔木或灌木，主要分布在广东、广西、 云南、海南等省。鹊肾树具有多种药用疗效，其根提取液可以治疗发烧、痢疾、 牙龈炎、口腔溃疡等，但鹊肾树提取物能有效抗乙肝病毒，及这种物质的提取 工艺至今尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是要提供一种能有效抗乙肝病毒的鹊肾树提取物及其提取工艺。本专利技术的技术方案是本专利技术以鹊肾树的枝叶、心材、根、皮为原料经粉碎、提取、硅胶柱层析、 洗脱得到鹊肾树提取物。本专利技术的提取工艺包括如下步骤1. 粉碎风干的鹊肾树枝叶、心材、根、皮；2. 用乙醇或甲醇或水提取，得提取液；3. 提取液浓縮得红色浓缩液，分别用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取、浓縮，得到各溶剂萃取物；4. 将上述各溶剂萃取物分别进行硅胶柱层析；5. 用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、甲醇中的一种或一种以上按不同比 例梯度洗脱，得到鹊肾树木脂素类化物。上述鹊肾树提取物经红外光谱，紫外光谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱、 质谱的解析，并与文献对照，鉴定提取物的基本结构式为Gr~Cfi-C6-C:i，证实是包 括乙芳基丁烷类、乙芳基丁烯类、芳基四氢萘类、芳基萘和芳基二氢萘类、四 氢呋喃类、四氢呋类喃并四氢呋喃类、联苯环辛烯类、苯并呋喃类、二环辛垸 类等木脂素类衍生物。本专利技术利用2. 2. 15细胞培养系统对鹊肾树提取物进行抗乙肝病毒实验，结 果表明在体外实验中，具有较强的抗乙肝病毒作用，其有效部位经化学方法 鉴定，证明，主要有效成分为木脂素类化合物。鹊肾树提取物抑制乙肝病毒H印G2的2. 2. 15细胞系50%活性时的药物浓度 为IC5U (15ug/ml)，复筛药物浓度100ug/ml时，抑制率81. 6%，实验证明木 脂素类化合物抗乙肝病毒作用强大，为高活性成分，正中开发抗乙用药物的耙 点，对于开发高效低毒的天然抗乙肝冠状病毒的口服药、注射剂等药物具有重 大意义；另外，鹊肾树为一味经典常用的中药，药性清楚，资源丰富，从鹊肾 树中分离提取抗乙肝病毒有效成份的分离工艺成熟、简易；鹊肾树抗乙肝病素 有效成分的化学结构与作用机理明确，以此开发抗乙肝病毒的新药前途非常光 明。具体实施例方式实施例1:(l)提取取自然风干的鹊肾树枝叶、心材、根、皮2公斤，粉碎后用75% 的乙醇回流提取，(3X30升)，合并提取液，过滤后回收溶剂，得红色浓縮液 1000毫升，置于5000ml的分液漏斗中，分别用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁 醇萃取，回收溶剂后，分别得到石油醚萃取物0.8克，乙醚萃取物3.2克，乙酸乙酯萃取物33克，正丁醇萃取物38克，水溶物87克。(2)分离取乙醚萃取物3. 2克进行硅胶柱层析(300-400目，200g)，用 Me0H:CHCL3((h 100—5:95)梯度洗脱，得五个组分，重量分别是0. 3g、0. 6g、0. 5g、 0.2g和1.2g，再将每个组分分别经制备薄层层析，洗脱，分离得到3个纯化合 物木兰木脂素A (magnolignan A)、厚朴醛D (magnaldehyde D)、鹊肾树木 脂素A (strebluslignan A)。取乙酸乙酯萃取物33g进行硅胶柱层析(100-200目，1000g)用 MeOH:CHCL:,.(0:100—40:60)梯度洗脱，得五个组分，重量分别是3. 5g、 4. 0g、 8. 0g、 6. 0g和12g，再分别制备薄层层析分离得到2个纯化合物鹊肾树木脂 素B (strebluslignan B)、落叶松树月旨醇[(+)-isolariciresinolj。取正丁醇萃取物38g进行硅胶柱层析(100-200目，200g)，用乙醇乙酯 Me0H(0:100—40:60)梯度洗脱，得五个组分，重量分别是1. 5g、 5. 6g、 6. 2g、 4. 3g和13. 5g，再制备薄层层析分离得到4个纯化合物木兰木脂素A-4'-0-卩-D 葡萄糖苷 (magnolignan A 4'-0-卩-D-glycoskie) 、 (+)-lyoniresinol-2a-0-(3-L腳arabinopyranoside、 5 —甲基一9—(3—木糖基一异落叶丰公 树月旨醇 、 9一卩一 木糖基一异落叶 松树月旨醇。.实施例2:鹊肾树正丁醇萃取物对H印G2. 2. 15、细胞系HBsAg和HbeAg表达的影响 将H印G2.2. 15细胞2X105/ml接种96孔细胞培养板中，每孔飾l，以 800ug/ml、 400ug/ml、 200 ug/ral 、 100ug/ral的药物浓度加入细胞培养板中， 每个浓度设3孔，设10y。DMSO组，3孔作用为阴性对照，分别于第3天，第6天 取培养基上清液-2(TC冻存，集中用ELISA法测定HBsAg 、HbeAg，测定波长450咖 处的吸光度，按下式计算药物对细胞的抑制率。10%DMS0阴性对照孔0D值药物孔0D值抑制率=-- X100%10%DMS0阴性对照孔0D值阴性血清0D值药物对HbsAg、 HbeAg分泌的抑制率结果见表l、表2:表l鹊肾树提取物对H印G2.2. 15细胞系HbsAg表达的抑制作用(X土D， n二3)<table>complex table see original document page 6</column></row><table>从以上实验可知，鹊肾树提取物在小剂量(100ug/ml)，中剂量(400 ug/ml) 和大剂量(800 ug/ml)的抑制率在给药第3天分别为76.5%、 89.3%、 97.4%， 第6天的抑制率分别为70. 5%、 96. 0%、 100%，对HBsAg平均抑制率分别为85.0% 和85.1%, IC5o分别为64.68士56.12吗.mL"和63.98 ± 51.02iig.mL-1，结果表明 该提取物具有很高的抗HbsAg表达的能力。当分别取小剂量(100 ug/ml)，中 剂量(400 ug/ml)和大剂量(800 ug/ml)进行抗HbeAg表达实验，抑制率于 给药第3天分别是3.8%、 31.4%、 48.8%,效果不明显；但持续给药至第5天，其 抑制率分别可以达到81.6%、 97.0%、 98. 1%，平均抑制率为91.3%， IC50为54.43土36.58吗.mL"，证明该提取物具有很强的抑制HbeAg表达的作用，从实验 结果表明鹊肾树提取物具有很强的抗乙肝病毒的疗效。可以开发成片剂、胶囊、 口服液、注射剂等剂型。权利要求1.一种抗乙肝病毒的鹊肾树提取物，其特征是它由鹊肾树本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗乙肝病毒的鹊肾树提取物，其特征是：它由鹊肾树经粉碎、提取、浓缩、萃取、硅胶柱层析、洗脱得到的具有Ｃ↓［３］－Ｃ↓［６］－Ｃ↓［６］－Ｃ↓［３］基本化学结构的丙烯基酚及其衍生物和烯丙基酚及其衍生物的木脂素类化合物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李俊，金柏峰，张艳军，苏小建，何星存，黄艳，黄锡山，廖日权，龙波，
申请(专利权)人：广西师范大学，
类型：发明
国别省市：45[中国|广西]
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