用于治疗卵巢癌的药物组合物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于治疗卵巢癌的药物组合物，VEGF/Notch3双靶点抑制剂为与编码血管表皮生长因子(VEGF)以及Notch3的信使RNA(mRNA)互补的嵌合体(chimera)分子，所述chimera分子由靶向结合VEGF mRNA的核酸适配体分子序列(VEGF aptamer)和靶向抑制Notch3mRNA的小干扰RNA(siRNA)或者短发夹RNA(shRNA)序列分子连接而成。本发明专利技术的药物组合物能够靶向性结合VEGF受体表达的肿瘤细胞，通过特异敲除肿瘤细胞内Notch3基因的表达抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡坏死，并逆转肿瘤细胞对化疗药物耐药性问题，提高化疗药剂抗肿瘤效果。

Medicinal composition for treating ovarian cancer and its preparing method

The invention discloses a pharmaceutical composition for the treatment of ovarian cancer, VEGF/Notch3 dual target inhibitors and encoding vascular endothelial growth factor (VEGF) and Notch3 messenger RNA (mRNA) complementary chimera (chimera) molecules, the binding of chimera VEGF mRNA nucleic acid aptamer sequence by targeting (VEGF aptamer) and small interfering RNA targeting inhibition of Notch3mRNA (siRNA) or short hairpin RNA (shRNA) sequence and molecular connectivity. The drug composition of the invention can be targeted with VEGF receptor expression in tumor cells by specific knockdown of Notch3 gene expression in tumor cells inhibit tumor cell proliferation, induce cell apoptosis and necrosis, reversal of tumor cell resistance to chemotherapy, chemotherapy agents improve the antitumor effect.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于肿瘤药物
，特别涉及用于治疗卵巢癌的包括VEGF/Notch3抑制剂和化学疗法药剂的药物组合物。
技术介绍
卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位，对妇女生命造成严重威胁。由于卵巢恶性肿瘤尤其是上皮癌很早扩散，手术时多数病例已不能清除病灶，而且放疗的效果及应用也很有限，因此全身性化疗是一项重要的辅助治疗方法。尽管近期新的治疗形式取得发展，克服对卵巢癌化疗药物耐药性问题依然很紧迫。Notch受体包含在增殖、分化和凋亡中。由于在人类癌症中Notch信号通路的异常失控的增加的迹象，Notch受体为用于选择性杀死恶性细胞的潜在标靶。四个已知的Notch受体(Notch1-4)是单次跨膜受体，在发育的所有时期介导信号从细胞表面至细胞核以调节增殖、分化和凋亡。Notch受体主要由Delta和Serrate/jagged家族跨膜配体激活，跨膜配体在相邻细胞表面表达。配体介导的Notch的活化诱导Notch细胞内区域(NICD)的蛋白水解断6裂和核转运，NICD结合至转录因子CBF1/RBP-Jk反式激活靶基因，包括HES1。Notch受体已经报导在多种不同的人类肿瘤中失控表达。如在人类的乳房癌、胰腺癌以及霍奇金淋巴瘤中观察到增加的Notch1蛋白的表达。已经在恶性黑色素瘤、胰腺癌和乳房癌中发现Notch3和Notch4的过量表达。通过敲除Notch3基因表达能够提高OVCAR3肿瘤细胞对化疗药物敏感性。在肿瘤领域，基因治疗代表新、有前途的策略，该策略依赖于将基因材料转移至细胞中以发挥抵抗疾病的治疗效果。小干扰RNA(siRNA)是利用所有细胞的自然性质，通过促进目标mRNA的降解或翻译的消除来指导特定基因沉默的新兴技术。目前已有多项siRNA药物分子用于临床实验研究中。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种用于治疗卵巢癌的药物组合物，包括VEGF/Notch3双靶向chimera抑制剂和化学疗法药剂，能够解决卵巢癌耐药性问题。一种用于治疗卵巢癌的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括VEGF/Notch3双靶点抑制剂、铂类药物和药物学可接受的载体，其中所述VEGF/Notch3双靶点抑制剂为与编码VEGF以及Notch3的mRNA互补的chimera分子，所述chimera分子由靶向结合VEGFmRNA的核酸适配体分子序列(VEGFaptamer)和靶向抑制Notch3mRNA的siRNA或者shRNA序列分子连接而成。所述chimera分子负载于药物学可接受的转染载体中。通过靶向Notch3的siRNA分子抑制肿瘤增殖方面已有相关研究报道。但是单一靶点抑制难以实现对肿瘤有效治疗，而基于VEGF和Notch3双靶点的抑制作用目前尚未被报道，本专利技术揭示了通过构建靶向VEGF和Notch3的chimera序列，能够靶向识别VEGF过表达的肿瘤细胞，经纳米粒子等转染载体转染肿瘤细胞后，能够通过抑制Notch3基因表达表达诱导细胞凋亡和坏死，同时提高耐药性肿瘤细胞对化疗药物铂类药物的敏感性。本专利技术鉴定了人类卵巢癌细胞株和乳腺癌细胞株中Notch3基因表达情况。通过反转录PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹法(WesternBlot)结果分析，在人卵巢癌细胞SKOV3和人乳腺癌细胞株MCF-7中过度表达。本专利技术通过脂质体(lipofectamine)以及阳离子聚合物修饰四氧化三铁纳米粒子(Fe3O4NPs)负载VEGF-Notch3Chimera(与编码VEGF以及Notch3的mRNA互补的chimera分子)，转染顺铂(DDP)耐药性细胞SKOV3－DDP细胞，研究了对肿瘤细胞凋亡和坏死的影响，以及肿瘤细胞的体外抑制率。用6μg/mlDDP预先处理SKOV3细胞，连续培养1周后，获取DDP耐药性SKOV3细胞，通过Lipofectamine和Fe3O4NPs分别负载VEGF-Notch3chimera，转染细胞后，结果表明，能够显著提高DDP对耐药性细胞SKOV3细胞的肿瘤抑制率，如图3所示。流式细胞分析检测表明，Fe3O4NPs－Chimera纳米复合体能够诱导肿瘤细胞凋亡和坏死比例达到24.3％。如图4所示。SKOV3细胞对Fe3O4NPs－Chimera分子细胞摄取率最高，可达到76％，如图5所示。本专利技术所构建的VEGF-Notch3chimera能够特异性识别VEGF高表达的SKOV3细胞，而对293T细胞没有结合作用。Fe3O4NPs－Chimera分子能够显著提高对SKOV3细胞内摄取作用，如图6所示。转染细胞后，Notch3基因与蛋白表达被有效敲除。Fe3O4NPs－Chimera对Notch3基因抑制率达到98％，Lipofectamine转染chimera对Notch3抑制率达到89％，单纯Chimera分子对Notch3抑制率则达到60％，如图7所示。因此，本专利技术用于治疗卵巢癌的包括Notch3/VEGF抑制剂、抗肿瘤化学疗法药剂和药物学合适载体的药物组合物，适于向需要的患者进行医学治疗。本专利技术的第二个的目的是提供一种用于治疗卵巢癌的用于共施用VEGF/Notch3双靶点抑制剂、铂类药物和药物学可接受的载体的药剂盒，其特征在于，所述药剂盒包括：含有VEGF/Notch3双靶点抑制剂和药物学可接受的载体的第一个小瓶，含有铂类药物和药物学可接受的载体的第二个小瓶，其中所述VEGF/Notch3双靶点抑制剂为与编码VEGF以及Notch3的mRNA互补的chimera分子。本专利技术的第三个目的是提供治疗卵巢癌的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括步骤：a、制备VEGF/Notch3双靶点抑制剂，所述VEGF/Notch3双靶点抑制剂为与编码VEGF以及Notch3的mRNA互补的chimera分子；b、将a中VEGF/Notch3双靶点抑制剂与铂类药物和药物学可接受的载体混合。本专利技术的VEGF/Notch3chimera分子能够靶向性结合VEGF受体表达的肿瘤细胞，通过特异敲除肿瘤细胞内Notch3基因的表达抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡坏死，并逆转肿瘤细胞对化疗药物耐药性问题，提高化疗药剂抗肿瘤效果。附图说明图1：VEGF-Notch3chimera结构示意图。图2：纳米粒子载体负载chimera转染SKOV3细胞跨膜转运过程示意图。图3：四氧化三铁纳米粒子负载chimera复合体转染SKOV3细胞后，与不同剂量顺铂组合为药物试剂，对耐药性SKOV3细胞增殖的影响。A：不同剂量DDP对SKOV3细胞和DDP耐药SKOV3细胞细胞抑制率。B：不同给药组对DDP耐药SKOV3细胞的体外抑制率。其中，a：PBS；b：lipo(脂质体)+VEGFaptamer；c：lipo+阴性对照chimera；d：lipo+Notch3siRNA；e：lipo+chimera；f：NP；g：NP+aptamer；h：NP+chi-scramble(非特异性chimera分子)i：NP+Notch3siRNA，j：NP+chimera；k：chimera。图4：不同转染材料负载chimera转染SKOV3细胞，对其细胞凋亡和坏本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于治疗卵巢癌的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括VEGF/Notch3双靶点抑制剂、铂类药物和药物学可接受的载体，其中所述VEGF/Notch3双靶点抑制剂为与编码VEGF以及Notch3的mRNA互补的chimera分子，所述chimera分子由靶向结合VEGF mRNA的核酸适配体分子序列(VEGF aptamer)和靶向抑制Notch3mRNA的siRNA或者shRNA序列分子连接而成。

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗卵巢癌的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括VEGF/Notch3双靶点抑制剂、铂类药物和药物学可接受的载体，其中所述VEGF/Notch3双靶点抑制剂为与编码VEGF以及Notch3的mRNA互补的chimera分子，所述chimera分子由靶向结合VEGFmRNA的核酸适配体分子序列(VEGFaptamer)和靶向抑制Notch3mRNA的siRNA或者shRNA序列分子连接而成。2.根据权利要求1所述的用于治疗卵巢癌的药物组合物，其特征在于，所述chimera分子负载于药物学可接受的转染载体中。3.一种用于治疗卵巢癌的用于共施用VEGF/Notch3双靶点抑制剂、铂类药物和药物学可接受的载体的药剂盒，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：亓立峰，
申请(专利权)人：同济大学，无锡纳奥生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31