一种从孕妇尿液吸附物中提纯绒促性素中间品的方法技术

本发明专利技术公开了一种从孕妇尿液吸附物中进一步提纯绒促性素中间品的方法。利用一定浓度的盐溶液能够促进蛋白质溶解的特性，在对绒促性素进行纯化抽提过程中，通过调节抽提液中盐的成分及其浓度，使绒促性素溶解于抽提液中，然后在抽提液中加入一定比例的乙醇使绒促性素沉淀析出。技术方案是通过在孕妇尿液脱附物中用一定浓度的盐抽提液，对其分别进行抽提、沉淀、脱水、干燥等步骤来实现从孕妇尿液吸附物中进一步提纯绒促性素。本方法所得绒促性素中间品效价稳定在700iu/mg以上。

Method for purifying intermediate product of chorionic gonadotropin from urine of pregnant women

The invention discloses a method for further purifying the middle of the chorionic gonadotropin from the urine of pregnant women. Salt solution with certain concentration can promote the dissolution properties of protein, in promoting the process of extracting pigment of cashmere was purified by adjusting, the component and concentration of extracts of salt, the hCG dissolving in the extract, and then add a certain proportion in the extract of ethanol to hCG precipitation. The technical scheme is through desorption in the urine of pregnant women with a certain concentration of salt extraction liquid, respectivelyexamined extraction, precipitation, dehydration, drying and other steps to achieve further purification of hCG from urine of pregnant women in adsorption. In this method, the stability of the intermediate product of chorionic gonadotropin was above 700iu/mg.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体地说涉及从孕妇尿液吸附物中进一步提纯绒促性素中间品的方法。
技术介绍
绒促性素（ChorionicGonadotrophin）系自健康孕妇尿中提取、精制而成的一种天然促性腺激素，具有类似黄体生成素的功能。对女性可促进卵泡的成熟及排卵，并维持黄体的功能。对男性，能刺激睾丸间质细胞的发育，增加雄激素分泌，促使睾丸下降和男性第二性征发育。与尿促性素合用，可模拟生理性的促黄体生成素高峰，而触发排卵。临床上绒促性素至今仍是治疗月经失调、无排卵性不孕症、先兆流产和习惯性流产、隐睾症、男性性功能低下等的首选药物。国际上从20年代就开始研究，1927年Zondek和Ascbheim首先发现妊娠妇女尿中存在着促性腺激素，1936年Brown和Venning找到在妊娠第60-80天，尿中绒促性素分泌达到最高峰。1928年Zondek和Ascbheim首先用乙醇沉淀法，从孕妇尿中取得了活性物质，其它研究者则进行应用吸附剂从尿中直接吸附绒促性素的研究，这包括1932年Katzman和Doisy用苯甲酸吸附法，1943年Katzman等人用人造沸石层析吸附法，1954年Loraine和Brown用高岭土吸附法，1959年难波修一等人用离子交换树脂吸附法等，用这些方法所取得的绒促性素再用各种纯化方法进行纯化。目前国际上工业生产的绒促性素的纯度在2500-5000iu/mg，科研的水平则达到10000iu/mg以上。
技术实现思路
本专利技术提供了一种从孕妇尿液吸附物中进一步提取绒促性素中间品的方法，利用绒促性素是一种糖蛋白，一定浓度的盐溶液能够促进蛋白质溶解的性质，抽提与反抽提过程中，调节抽提液中盐的成分及其浓度，PH值，使绒促性素溶解于抽提液中，然后在抽提液与反抽提液中加入一定浓度的乙醇，使绒促性素沉淀析出。在专利技术的技术方案中，还具有以下技术特征：所述抽提法包括如下步骤：1.将孕妇尿液吸附物加入到沉淀罐中，按吸附物重量1:5~7（w/v）比例加入90%以上的冷乙醇搅拌直至沉淀罐底部无固体吸附物为止，乙醇温度不高于0℃，测量乙醇度数应在79-81%，然后继续在80-120rpm条件下搅拌洗脱40-60分钟，此时溶液中有絮状沉淀物生成，停止搅拌后，静置沉淀8-10小时，沉淀过程中温度不高于10℃，虹吸离心：静置时间结束后，用软管自然虹吸上层乙醇，下层沉淀物放料后转至低温间，温度不得超过10℃，沉淀物用冷冻离心机离心，离心转速不低于3500rpm，离心时间不低于5分钟/车，温度不超过10℃，弃去上层离心乙醇，收集下层离心固体得绒促性素脱附物。2.抽提液配制方法：配制含乙酸钠0.1mol/L、氯化钙0.015mol/L、氯化钠0.5mol/L的纯化水溶液，方法为取乙酸钠13.6g，氯化钙1.66g，氯化钠29.2g，加入纯化水溶解并稀释至1L。然后向该溶液中滴加冰乙酸，调节pH值至5.0~5.2，再按计算量加95%乙醇，使乙醇浓度为50%，搅拌混合均匀后，预冷至8-12℃备用。2.1抽提离心：将HCG脱附物加入到搅拌罐中，按脱附物重量1：5（w/v）比例加入8~12℃的抽提液溶解，在80-120rpm条件下搅拌提取3小时。提取液用冷冻离心机离心，离心时间15分钟/车，离心转速3500rpm，收集离心上清液。离心沉淀物再按脱附物重量1：2（w/v）比例加入8-12℃的抽提液溶解，在80-120rpm条件下搅拌提取1小时，提取液用冷冻离心机离心，离心时间30分钟/车，离心转速3500rpm，收集离心上清液，弃去固体分离物。2.2乙醇沉淀：合并二次离心上清液，边搅边加入90%以上乙醇沉淀，乙醇温度不超过-10℃，使乙醇浓度达到79-81%。加完乙醇后继续搅拌30分钟，然后停止搅拌，在8~12℃条件下静置沉淀15~18小时。2.3静置时间结束后，用软管自然虹吸上层乙醇，下层沉淀物用冷冻离心机离心，离心转速不低于3500rpm，离心时间不低于15分钟/车，温度不超过12℃。弃去上层离心母液，收集下层固体物。3.反抽提液配制：配制0.1mol/L乙酸钠溶液，方法为取13.6g乙酸钠，加纯化水溶解并稀释至1L。向上述溶液中滴加冰乙酸，调节pH至4.8~5.0，再按计算量加入95%乙醇，使乙醇浓度为50%，搅拌混合均匀后，预冷至8-12℃备用。3.1抽提离心：将HCG提取物加入到搅拌罐中，按脱附物重量1：5（w/v）比例加入8-12℃反抽提液，在转速80-120rpm条件下搅拌提取3~4小时，用冷冻离心机离心，离心时间15分钟/车，离心转速3500rpm。收集上清液，离心沉淀物再按提取物重量1：2加抽提液，搅拌提取1小时，用冷冻离心机离心，离心时间30分钟/车，离心转速3500rpm，收集上清液，弃去固体分离物。3.2乙醇沉淀：合并二次离心上清液，边搅边加入90%以上乙醇，乙醇温度不超过-10℃，使乙醇浓度达到79-81%。加完乙醇后继续搅拌30分钟，然后停止搅拌，在8~12℃条件下静置沉淀15~18小时。3.3静置时间结束后，用软管自然虹吸上层乙醇，下层沉淀物用冷冻离心机离心，离心转速不低于3500rpm，离心时间不低于15分钟/车，温度不超过12℃。弃去上层离心母液，收集下层固体物，按固体物重量1:5（w/v）比例加入无水乙醇脱水2次，再按上述步骤离心，收集固体物真空干燥。3.4真空干燥：将沉淀物与离心罐一起置用五氧化二磷做干燥剂的真空干燥箱内真空（-0.1Mpa）干燥20小时以上，温度不超过15℃，干燥后即得绒促性素中间品。具体实施方式实施例11.将15吨孕妇尿液吸附物422.3kg加入到沉淀罐中，按吸附物重量1:6(w/v)例加入90%以上的冷乙醇2536L，搅拌直至沉淀罐底部无固体吸附物为止，乙醇温度不高于0℃，测量乙醇度数80%，然后继续在100rpm件下搅拌洗脱60钟，此时溶液中有絮状沉淀物生成，停止搅拌后，静置沉淀10时，沉淀过程中温度不高于10℃，虹吸离心：静置时间结束后，用软管自然虹吸上层乙醇，下层沉淀物放料后转至低温间，温度5℃，沉淀物用冷冻离心机离心，离心转速不低于3500rpm，离心时间不低于5分钟/车，温度不超过10℃，弃去上层离心乙醇，收集下层离心固体得绒促性素脱附物。2.抽提液配制方法：配制含乙酸钠0.1mol/L、氯化钙0.015mol/L、氯化钠0.5mol/L的纯化水溶液，方法为取乙酸钠13.6g，氯化钙1.66g，氯化钠29.2g，加入纯化水溶解并稀释至1L。然后向该溶液中滴加冰乙酸，调节pH值至5.1再按计算量加95%乙醇，使乙醇浓度为50%，搅拌混合均匀后，预冷至11℃备用。2.1抽提离心：将HCG脱附物加入到搅拌罐中，按脱附物重量1：5（w/v）比例加入8~12℃的抽提液2110L溶解，在100rpmrpm条件下搅拌提取3小时。提取液用冷冻离心机离心，离心时间15分钟/车，离心转速3500rpm，收集离心上清液。离心沉淀物再按脱附物重量1：2（w/v）比例加入8-12℃的抽提液845L溶解，在100rpm条件下搅拌提取1小时，提取液用冷冻离心机离心，离心时间30分钟/车，离心转速3500rpm，收集离心上清液，弃去固本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从孕妇尿液吸附物中提纯绒促性素中间品的方法，其特征在于：（1）在吸附物中加入90%以上冷乙醇至无固体吸附物为止，经离心得脱附物；（2）将脱附物中加入抽提液与反抽提液，控制好抽提液与反抽提液中盐的成分以及浓度、PH值，使绒促性素溶解在抽提液中；（3）然后在抽提液中加入一定比例的乙醇使绒促性素沉淀析出； 从而使绒促性素中间品效价稳定在700 iu/mg以上。

【技术特征摘要】
1.一种从孕妇尿液吸附物中提纯绒促性素中间品的方法，其特征在于：（1）在吸附物中加入90%以上冷乙醇至无固体吸附物为止，经离心得脱附物；（2）将脱附物中加入抽提液与反抽提液，控制好抽提液与反抽提液中盐的成分以及浓度、PH值，使绒促性素溶解在抽提液中；（3）然后在抽提液中加入一定比例的乙醇使绒促性素沉淀析出；从而使绒促性素中间品效价稳定在700iu/mg以上。2.根据权利要求1步骤（1）中所述，将吸附物加入到沉淀罐中，按吸附物重量1:5~7（重量体积比）比例加入90%以上的冷乙醇，搅拌直至沉淀罐底部无固体吸附物为止，乙醇温度不高于0℃，测量乙醇度数应在79-81%，继续在80-120rpm条件下搅拌洗脱40-60分钟，此时溶液中有絮状沉淀物生成，停止搅拌后，静置沉淀8-10小时，沉淀过程中温度不高于10℃，静置时间结束后，用软管自然虹吸上层乙醇，下层沉淀物温度不得超过10℃，沉淀物用冷冻离心机离心，离心转速不低于3500rpm，离心时间不低于5分钟/车，温度不超过10℃，弃去上层离心乙醇，收集下层离心固体得绒促性素脱附物。3.根据权利要求1步骤（2）中所述，将绒促性素脱附物按1：5（重量体积比）比例慢慢加到抽提液，在溶液温度8-12℃条件下搅拌3小时，静置过夜，次日虹吸上清液，离心渣按干粉1：2（重量体积比）比例加抽提液，在溶液温度8-12℃条件下搅拌1小时，离心取上清液，合并二次...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘乃山，尚明彩，
申请(专利权)人：青岛康原药业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37