罗伊氏乳杆菌的低温驯化及其制备低温发酵乳的方法技术

本发明专利技术公开了一种罗伊氏乳杆菌的低温驯化及其制备低温发酵乳的方法，低温驯化方法为按从高至低的温度梯度进行逐级驯化，使罗伊氏乳杆菌在20～25℃正常生长；用其制备的低温发酵乳，为发酵基料和低温驯化的罗伊氏乳杆菌混合发酵制备，包括配料、均质杀菌、接种和低温发酵、搅拌冷却、罐装和冷藏后熟，即得到低温发酵乳成品。本发明专利技术的优点是低温驯化的罗伊氏乳杆菌抗逆性增强，生物酶活性提高，用其制备低温发酵乳，活菌数量增加缓慢，延长对数期和稳定期，提高次级代谢产物的积累，增加不饱和脂肪酸含量，提高营养价值，改善质地和风味；降低了生产的热能成本；保留了发酵乳成品的肠道益生功能和其他营养成分的营养功能。

Low temperature acclimation of Lactobacillus casei and method for preparing low temperature fermented milk

The invention discloses a Lactobacillus reuteri cold acclimation and preparation method of low temperature fermented milk, cold acclimation method step by step according to the temperature gradient from high to low the domestication of Lactobacillus reuteri in 20 ~ 25 degrees normal growth; low temperature fermented milk prepared by fermentation, as base material low temperature acclimation and mixed fermentation of Lactobacillus reuteri preparation, including ingredients, homogeneous sterilization, inoculation and fermentation in low temperature, stirring and cooling, canned and refrigerated after ripening, obtain low-temperature fermentation of dairy products. The invention has the advantages of Lactobacillus reuteri resistance low temperature acclimation enhancement, improve the biological activity of fermented milk prepared at low temperature by using the same, the number of live bacteria increased slowly, prolong the logarithmic phase and stable phase, enhance secondary metabolite accumulation, increase the content of unsaturated fatty acids, high nutritional value, improve the texture and flavor reduce heat; cost of production; the nutritional function of fermented milk products prebiotic function and other nutrients retention.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物培养和发酵
，特别是一种罗伊氏乳杆菌的低温驯化方法及用经过低温驯化的该罗伊氏乳杆菌制备低温发酵乳的方法。
技术介绍
罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)是普遍存在于人体肠道的有益乳酸菌，是新生儿和健康成年人肠道微生物菌群的主要成员，具有调整肠道菌群平衡，抑制腹泻，拮抗有害菌定植的功效。罗伊氏乳杆菌能产生一种被称为“罗伊氏菌素(Reuterin)”非蛋白质类广谱抗菌物质，能广泛抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、酵母、真菌和病原虫等的生长。我国卫生部于2003年批准了罗伊氏乳杆菌可作为人类保健品的微生物菌种。发酵乳是益生乳酸菌最常见且经济的载体，发展罗伊氏乳杆菌等益生菌发酵乳可有效解决耐药菌株的问题，改善人体机能，提高免疫力从而促进人体健康。现有市场上发酵乳产品包括凝固型和搅拌型，不论何种发酵乳，其生产中最重要的影响因素均为发酵菌种。发酵菌种不仅影响发酵乳的品质，也决定了发酵温度、发酵周期等工艺参数。目前，发酵乳的生产工艺中发酵温度通常为40～42℃，在此温度下发酵速度快，但在贮藏过程中会出现后酸化、乳清析出及风味改变等质量问题，也提高了生产的热能成本；同时在发酵乳的生产过程中，普遍采用了二次杀菌技术，在杀灭杂菌的同时也杀灭了内含的活性乳酸菌，从而失去了乳酸菌所特有的调节肠道菌群等益生功能，部分营养素(如蛋白质)的生物功能因频繁的热处理出现一定程度地丧失，降低了发酵乳的营养功效。
技术实现思路
专利技术目的：针对上述问题，本专利技术的目的是提供了一种罗伊氏乳杆菌的低温驯化方法，经过低温驯化的该罗伊氏乳杆菌在20～25℃下正常生长；同时本专利技术的另一目的是提供了一种应用上述经过低温驯化的罗伊氏乳杆菌制备低温发酵乳的方法，改善和保留发酵乳产品的品质和营养功效，降低热能成本。技术方案：一种罗伊氏乳杆菌的低温驯化方法，所述罗伊氏乳杆菌的菌种型号为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)RC-14，保藏编号为ATCC55845；经过低温驯化的所述罗伊氏乳杆菌RC-14在20～25℃下正常生长；所述罗伊氏乳杆菌RC-14的低温驯化方法具体为：步骤一、标准培养液的配制和消毒：标准培养液的各组分及含量比例为：1g脱脂奶粉∶1.5～2.0g葡萄糖∶100ml超纯水，按配方称取三种组分，所述脱脂奶粉和葡萄糖加入超纯水中充分溶解，形成混合液；所述混合液过滤后去除不溶性杂质，然后预加热至60～65℃并充分搅拌，巴氏消毒后冷却至30℃备用，即为标准培养液；步骤二、菌种驯化：将所述罗伊氏乳杆菌RC-14接种至所述标准培养液中，按从高至低的温度梯度进行逐级驯化培养；每一温度梯度下的所述罗伊氏乳杆菌RC-14均对应相应的培养时间，培养时间共计36h，得到驯化菌种母液；步骤三、扩大培养和分装冻存：将所述驯化菌种母液与标准培养液按体积比1∶10000混合，并在20～25℃下扩大培养24h，制备成罗伊氏乳杆菌RC-14接种母液；所述罗伊氏乳杆菌RC-14接种母液进行无菌分装，-80℃冻存。进一步的，所述步骤二中，罗伊氏乳杆菌RC-14接种至标准培养液中的接种量为1×105CFU/ml。进一步的，所述步骤二中，从高至低的温度梯度依次为：40℃→37℃→34℃→30℃→28℃→25℃→22℃→20℃，对应每一温度梯度，罗伊氏乳杆菌RC-14的培养时间梯度依次为：1h→1h→2h→2h→4h→6h→8h→12h，共计36h；培养终止时所述驯化菌种母液中罗伊氏乳杆菌RC-14的活菌量为1×108～1×109CFU/ml。同时本专利技术还提供一种应用所述经过低温驯化的罗伊氏乳杆菌RC-14接种母液制备低温发酵乳的方法，为发酵基料和所述罗伊氏乳杆菌RC-14接种母液混合发酵制备；以质量比计，所述发酵基料的各组分为：所述方法的具体操作步骤为：操作一、配料：按照所述发酵基料的组分配方，称取所述原料乳、葡萄糖、甜味剂和增稠剂，在所述原料乳中加入所述葡萄糖、甜味剂和增稠剂后，将所述原料乳预加热至60～65℃，并真空循环搅拌25～35min，各组分均匀混合呈均一相后停止搅拌，得到料液；操作二、均质杀菌：将所述料液进行均质和超高温瞬时杀菌后，冷却至30～35℃，得到均质杀菌冷却料液；均质使所述料液的液滴微细化，提高所述料液的粘度，并增强所述增稠剂的增稠、稳定效果；操作三、发酵菌种的接种和低温发酵：在所述均质杀菌冷却料液中加入所述罗伊氏乳杆菌RC-14接种母液，并搅拌10～15min使所述罗伊氏乳杆菌RC-14接种母液均匀分散，接种后的所述均质杀菌冷却料液在20～25℃下保温发酵96h，至滴定酸度达到70～76°T时，终止发酵，得到低温发酵乳；操作四、搅拌冷却：将所述低温发酵乳通过搅拌冷却至2～6℃，得到冷却发酵乳，然后将所述冷却发酵乳打入存储缸中准备灌装；操作五、产品灌装及冷藏后熟：将已打入存储缸中的所述冷却发酵乳在无菌、负压的卫生条件下灌装至无菌包装容器中，并迅速放置于2～6℃冷藏、后熟12h～24h，得到罗伊氏乳杆菌低温发酵乳成品。进一步的，所述原料乳为依据GB19301的要求验收、标准化的全脂生牛乳，以质量百分比计，所述全脂生牛乳中脂肪为3.1％，蛋白质为2.9％。进一步的，所述甜味剂为支链淀粉；所述增稠剂为食品级果胶或食品级明胶，用于增加低温发酵乳的稠度。进一步的，所述均质的均质温度为60～65℃，均质压力为18～20Mpa；所述超高温瞬时杀菌的杀菌温度为135～150℃，杀菌时间为4～6s。超高温瞬时杀菌技术的杀菌温度高但杀菌时间很短，在有效杀灭杂菌的同时，保留了大部分的罗伊氏乳杆菌RC-14和其它营养成分进一步的，所述操作三中，以体积百分比计，罗伊氏乳杆菌RC-14接种母液在均质杀菌冷却料液中的加入量为0.5％。有益效果：与现有技术相比，本专利技术的优点是：第一，罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)RC-14，保藏编号为ATCC55845，经过低温驯化在20～25℃下正常生长，使用其制备低温发酵乳时，在20～25℃下低温发酵使其活菌数量增加缓慢，有利于延长菌株的对数生长期和稳定期，提高胞外多种次级代谢产物的积累，提高了低温发酵乳产品的营养价值，改善了发酵乳的质地和风味，贮藏期无乳清析出，后酸化较弱；第二，与现有的发酵乳在40～42℃下发酵相比，本专利技术的低温发酵乳在20～25℃下发酵，降低了生产的热能成本；第三，与现有发酵乳的二次杀菌技术相比，本专利技术中采用超高温瞬时杀菌技术，135～150℃下杀菌4～6s，高温杀菌时间短，避免了多次杀菌对活性乳酸菌的杀灭效应，保留了发酵乳成品的肠道益生功能和其他营养成分的营养功能；第四，罗伊氏乳杆菌RC-14自身代谢产生的“罗伊氏菌素”，有效抑制有害菌的生长，延长了用罗伊氏乳杆菌RC-14制备的低温发酵乳的货架期，提高了产品市场竞争力。附图说明图1是本专利技术罗伊氏乳杆菌RC-14的革兰氏染色菌体形态图；图2是本专利技术低温发酵乳制备的工艺流程图；图3是本专利技术经过低温驯化的罗伊氏乳杆菌RC-14在20～25℃条件下的生长曲线图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐明本专利技术，应理解这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围，在阅读了本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种罗伊氏乳杆菌的低温驯化方法，其特征在于：所述罗伊氏乳杆菌的菌种型号为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)RC‑14，保藏编号为ATCC 55845；经过低温驯化的所述罗伊氏乳杆菌RC‑14在20～25℃下正常生长；所述罗伊氏乳杆菌RC‑14的低温驯化方法具体为：步骤一、标准培养液的配制和消毒：标准培养液的各组分及含量比例为：1g脱脂奶粉∶1.5～2.0g葡萄糖∶100ml超纯水，按配方称取三种组分，所述脱脂奶粉和葡萄糖加入超纯水中充分溶解，形成混合液；所述混合液过滤后去除不溶性杂质，然后预加热至60～65℃并充分搅拌，巴氏消毒后冷却至30℃备用，即为标准培养液；步骤二、菌种驯化：将所述罗伊氏乳杆菌RC‑14接种至所述标准培养液中，按从高至低的温度梯度进行逐级驯化培养；每一温度梯度下的所述罗伊氏乳杆菌RC‑14均对应相应的培养时间，培养时间共计36h，得到驯化菌种母液；步骤三、扩大培养和分装冻存：将所述驯化菌种母液与标准培养液按体积比1∶10000混合，并在20～25℃下扩大培养24h，制备成罗伊氏乳杆菌RC‑14接种母液；所述罗伊氏乳杆菌RC‑14接种母液进行无菌分装，‑80℃冻存。...

【技术特征摘要】
1.一种罗伊氏乳杆菌的低温驯化方法，其特征在于：所述罗伊氏乳杆菌的菌种型号为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)RC-14，保藏编号为ATCC55845；经过低温驯化的所述罗伊氏乳杆菌RC-14在20～25℃下正常生长；所述罗伊氏乳杆菌RC-14的低温驯化方法具体为：步骤一、标准培养液的配制和消毒：标准培养液的各组分及含量比例为：1g脱脂奶粉∶1.5～2.0g葡萄糖∶100ml超纯水，按配方称取三种组分，所述脱脂奶粉和葡萄糖加入超纯水中充分溶解，形成混合液；所述混合液过滤后去除不溶性杂质，然后预加热至60～65℃并充分搅拌，巴氏消毒后冷却至30℃备用，即为标准培养液；步骤二、菌种驯化：将所述罗伊氏乳杆菌RC-14接种至所述标准培养液中，按从高至低的温度梯度进行逐级驯化培养；每一温度梯度下的所述罗伊氏乳杆菌RC-14均对应相应的培养时间，培养时间共计36h，得到驯化菌种母液；步骤三、扩大培养和分装冻存：将所述驯化菌种母液与标准培养液按体积比1∶10000混合，并在20～25℃下扩大培养24h，制备成罗伊氏乳杆菌RC-14接种母液；所述罗伊氏乳杆菌RC-14接种母液进行无菌分装，-80℃冻存。2.根据权利要求1所述的一种罗伊氏乳杆菌的低温驯化方法，其特征在于：所述步骤二中，罗伊氏乳杆菌RC-14接种至标准培养液中的接种量为1×105CFU/ml。3.根据权利要求2所述的一种罗伊氏乳杆菌的低温驯化方法，其特征在于：所述步骤二中，从高至低的温度梯度依次为：40℃→37℃→34℃→30℃→28℃→25℃→22℃→20℃，对应每一温度梯度，罗伊氏乳杆菌RC-14的培养时间梯度依次为：1h→1h→2h→2h→4h→6h→8h→12h，共计36h；培养终止时所述驯化菌种母液中罗伊氏乳杆菌RC-14的活菌量为1×108～1×109CFU/ml。4.一种应用如权利要求1所述经过低温驯化的罗伊氏乳杆菌RC-14接种母液制备低温发酵乳的方法，其特征在于：为发...

【专利技术属性】
技术研发人员：李珮铷，杨开平，边高瑞，王信超，叶鸿，
申请(专利权)人：镇江市天益生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32