The invention discloses a primer combination for identification of influenza A virus and its application. The primer combination provided by the invention comprises 6 kinds of DNA molecules, which are shown in sequence 1 to sequence 6. The primer combination can be applied to identify or assist the identification of whether the virus to be tested is influenza A virus, and can be applied to detect whether the tested sample is infected with influenza a virus. The present invention has successfully established RT LAMP method for detection of influenza a virus. The detection method has the advantages of high accuracy, high sensitivity and strong specificity.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测技术应用领域，具体涉及一种鉴定甲型流感病毒的引物组合及其应用。
技术介绍
流行性感冒(简称流感)是流感病毒引起的急性呼吸道感染，具有传染性强、传播速度快的特点。流感病毒主要通过空气中的飞沫、人与人之间的接触或与被污染物品的接触传播。流感典型的临床症状是高热、全身疼痛、显著乏力和轻度呼吸道症状，一般秋冬季节是其高发期，所引起的并发症和死亡现象非常严重。世界卫生组织估计北半球每年1亿人感染流感，5000万次就诊，30万次住院，每年1万人死于流感，主要是虚弱的老年人。该病是由流感病毒引起，可分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，甲型流感病毒经常发生抗原变异，传染性大，传播迅速，极易发生大范围流行。乙型流感病毒的抗原变异较小，通常只引起流感的局部暴发。丙型流感病毒的抗原稳定，且致病力较弱，主要侵犯幼儿和免疫力低下的人群。甲、乙型流感病毒的临床症状相似，引起的病症较严重，特别是甲型，导致的住院率四倍于乙型，由于易于与其他呼吸道疾病混淆，所以在流行期临床诊断很困难，因此实验室诊断显得非常重要。早期快速诊断流感感染能够及时指导临床治疗，为合理选择抗病毒抗细菌药物提供依据并在防止抗生素滥用方面具有重要意义。目前检测常见流感病毒的方法较多，但都存在不足，如电镜方法复杂昂贵，病毒分离培养耗时极长且假阳性较多，在拿到培养结果后通常已失去临床意义；酶联免疫法检测的是病毒特异性抗体，但一次仅能检测一种病毒。PCR检测法近年来在临床检测中应用颇多，如常规PCR、RT-PCR、实时荧光定量PCR等，在病原微生物的检测以及疾病诊断方面作用重大，但其一般需要能够进行...
【技术保护点】
引物组合，由引物F3‑1、引物B3‑1、引物FIP‑1、引物BIP‑1、引物LF‑1和引物LB‑1组成；所述引物F3‑1为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物B3‑1为如下(a3)或(a4)：(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物FIP‑1为如下(a5)或(a6)：(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物BIP‑1为如下(a7)或(a8)：(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物LF‑1为如下(a9)或(a10)：(a9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(a10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与...
【技术特征摘要】
1.引物组合，由引物F3-1、引物B3-1、引物FIP-1、引物BIP-1、引物LF-1和引物LB-1组成；所述引物F3-1为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物B3-1为如下(a3)或(a4)：(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物FIP-1为如下(a5)或(a6)：(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物BIP-1为如下(a7)或(a8)：(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物LF-1为如下(a9)或(a10)：(a9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(a10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；所述引物LB-1为如下(a11)或(a12)：(a11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(a12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子。2.权利要求1所述的引物组合的应用，为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)：(b1)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为甲型流感病毒；(b2)制备用于鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为甲型流感病毒的试剂盒；(b3)检测待测样本是否感染了甲型流感病毒；(b4)制备用于检测待测样本是否感染了甲型流感病毒的试剂盒。3.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下(c1)或(c2)：(c1)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为甲型流感病毒；(c2)检测待测样本是否感染了甲型流感病毒。4.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。5.一种鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为甲型流感病毒的方法，为方法甲或方法乙：所述方法甲包括如下步骤：提取待测病毒的总RNA；以总RNA为模板，采用权利要求1所述引物组合进行RT-LAMP扩增反应，如果采用所述引物组合可以实现以所述总RNA为模板的阳性扩增、待测病毒为或候选为甲型流感病毒，如果采用所述引物组合不能实现以所述总RNA为模板的阳性扩增、待测病毒为或候选为非甲型流感病毒；所述方法乙包括如下步骤：检测待测病毒的总RNA是否含有权利要求1所述引物组合的靶序列相应的RNA，如果所述总RNA中含有权利要求1所述引物组合的靶序列相应的RNA、待测病毒为或候选为甲型流感病毒，如果所述总RNA中不含有权利要求1所述引物组合的靶序列相应的RNA、待测病毒为或候选为非甲型流感病毒。6.一种检测待测样本是否感染了甲型流感病毒的方法，为方法丙或方法丁：所述方法丙包括如下步骤：提取待测样本的总RNA；以总RNA为模板，采用权利要求1所述引物组合进行RT-LAMP扩增反应，如果采用所述引物组合可以实现以所述总RNA为模板的阳性扩增、待测样本感染或疑似感染了甲型流感病毒，如果采用所述引物组合不能实现以所述总RNA为模板的阳性扩增、待测样本未感染或疑似未感染甲型流感病毒；所述方法丁包括如下步骤：检测待测样本的总RNA是否含有权利要求1所述引物组合的靶序列相应的RNA，如果所述总RNA中含有权利要求1所述引物组合的靶序列相应的RNA、待测样本感染或疑似感染了甲型流感病毒，如果所述总RNA中不含有权利要求1所述引物组合的靶序列相应的RNA、待测样本未感染...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈翔，王磊，王亚南，邢婉丽，赵丽健，程京，
申请(专利权)人：博奥生物集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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