一种具有协同抗肿瘤作用的组合物制造技术

本发明专利技术公开了一种具有协同抗肿瘤作用的组合物，其组成成分为：隐丹参酮和莪术醇。本发明专利技术的发明专利技术人在研究中发现，隐丹参酮和莪术醇联合使用产生特殊的抗肿瘤分子机制：莪术醇可消除隐丹参酮因抑制mTOR而产生的激活AKT的作用，从而发挥协同作用，表现明显的抗肿瘤作用，且无明显不良反应。本发明专利技术的抗肿瘤组合物对乳腺癌和前列腺癌有明显治疗作用。

Composition with synergistic anti-tumor effect

The invention discloses a composition with synergistic anti-tumor effect. The inventor in the study found that the combined use of cryptotanshinone and Curcumol generate tumor specific molecular mechanisms: Curcumol can eliminate cryptotanshinone by inhibition of mTOR caused by AKT activation, and the synergistic effect of obvious anti-tumor effect, and no obvious adverse reaction. The anti-tumor composition of the invention has obvious therapeutic effect on breast cancer and prostate cancer.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物领域，具体涉及一种具有抗肿瘤作用的组合物。
技术介绍
癌症已成为严重威胁人类生命的常见病和多发病，且发病率成逐年递增的趋势。我国癌症死亡占各类疾病死因的第2位，在城市已占据首位。癌症不仅给患者造成生理上的巨大伤害，同时在心理上、精神上也给患者带来严重创伤，并且造成了家庭和社会的沉重负担。目前，临床上使用的抗肿瘤药物大多对肿瘤细胞抑制的选择性不强，全身用药毒性较大，在抑制癌细胞生长的同时，正常细胞生长也被抑制。因此，研究开发高效低毒新颖的抗肿瘤药物仍是一项极为紧迫而重要的全球性课题。近年来，大量的临床和实验研究证明，许多中药复方和来源于中药的许多成分在肿瘤防治和康复方面有良好的作用，已逐渐成为人们关注和研究的重点。隐丹参酮是中药丹参中的一种有效成分。现代药理研究表明隐丹参酮具有抗炎、抑菌、诱导肝药酶等作用，以及显著地改善心脑血管疾病活性。然而，近来对于隐丹参酮的研究集中在其抗肿瘤作用上。许多研究证实隐丹参酮体外表现明显的抑制癌细胞增殖的作用，这与其诱导肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤细胞分化有关。在我们对隐丹参酮抗肿瘤机制的深入研究中发现，隐丹参酮可以通过抑制mTOR(mammaliantargetofrapamycin，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)信号转导通路，从而抑制细胞周期蛋白CyclinD和Rb，诱导细胞周期停滞于G0期，最终导致细胞死亡(CancerPreventionResearch.2010，3(8)：1015-1025)。mTOR是一个处于调节细胞代谢、生长、增殖等整个过程中心环节的重要激酶。干扰或抑制mTOR会引起细胞尤其是癌细胞的生长停滞继而死亡，因而也被公认为是癌症治疗当中的一个重要靶标。当前mTOR抑制剂Rapamycin(雷帕霉素)及类似物已经形成并在临床抗肿瘤中有所应用，但是单一的Rapamycin类似物在临床试验中对大多数肿瘤的治疗并未获得期望的效果。随着研究的深入，发现mTOR信号通路存在反馈激活机制：即抑制mTOR能反馈性激活多个与促进细胞生长增殖相关的蛋白信号通路，包括PI3K/AKT、MAPK/ERK、Mnk/eIF4E。并且认为是这些反馈激活机制削弱了mTOR抑制剂的效能，这也是其临床效应未达预期的原因。因而研究者提出应同时使用mTOR抑制剂和其他蛋白信号通路抑制剂，则可以有效的防止这一反馈机制的发生，从而发挥更好的抗肿瘤作用(中国肿瘤临床，2011，38(24)：1597-1599)。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种具有协同抗肿瘤作用的组合物，该组合成分明确，疗效稳定。一种具有协同增强抗肿瘤作用的组合物，按下列重量份原料药配比制成的：隐丹参酮4份，莪术醇6份。优选地，是由以下重量比配比制成的：隐丹参酮5份，莪术醇5份。优选地，是由以下重量比配比制成的：隐丹参酮6份，莪术醇4份。优选地，是由以下重量比配比制成的：隐丹参酮7份，莪术醇3份上述活性成分可以按现有技术提取或制备，也可以直接从市场上购买。上述活性成分按照配方量简单混合即可制备得到治疗肿瘤的化合物组合。上述药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。协同抗肿瘤作用新机制：抑制mTOR能反馈性激活多个与促进细胞生长增殖相关的蛋白信号通路，包括PI3K/AKT、MAPK/ERK、Mnk/eIF4E，这是该类化合物抗肿瘤作用受限的主要原因。而隐丹参酮可抑制mTOR通路，并且对MAPK/ERK和Mnk/eIF4E也有抑制作用，但同时激活PI3K/AKT。因此，本专利技术组合物中隐丹参酮联用抑制AKT的莪术醇，则在抑制mTOR的同时，防止反馈机制激活，产生协同抗肿瘤作用。附图说明图1说明：隐丹参酮单独和联用莪术醇对MCF-7细胞AKT表达的影响。具体实施方式根据下述实施例，可以更好地理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本专利技术。实施例1：一种具有抗肿瘤作用的组合物，它由如下重量份数的组分混合均匀制得：隐丹参酮6份莪术醇4份实施例2：本专利技术组合物的抗肿瘤作用1.实验方法1.1.材料与试剂隐丹参酮、莪术醇(西安和霖生物工程有限公司)；小牛血清(兰州民海生物工程有限公司，AKT、p-AKT(SantaCruz，CA，USA)；β-tubulin；MTT(sigma)；1640培养基(Gibico)1.2.细胞系、细胞培养与动物MCF-7细胞由江苏省中药药效与安全性重点实验室提供。人脐静脉上皮细胞(HUVEC)从胎盘中进行原代分离。清洁级Balbc裸鼠，上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK(沪)2012-0002；饲养环境：温度22±2℃和相对湿度(55±10％，光照12-hr光照(8：00-20：00)和12-hr避光循环，自由饮水及饮食。1.3.MTT取指数生长期的细胞制成单个细胞悬液，以每孔104个细胞接种于96孔板中，每孔体积100μl。将平板置37℃CO2(5％)温箱24小时。受试化合物5个浓度加入96孔板，并37℃，含5％CO2及100％湿度的温箱中孵育48h。小心吸去上清，PBS轻轻洗涤，弃上清。每孔加入180μl新鲜RPMI1640培养液，MTT用PBS配成5mg/ml溶液，每孔加20μl，37℃温育4小时。吸出上清液，每孔加入150μlDMSO，摇匀，酶标仪在570nm处测定光密度。根据数据计算不同化合物对MCF-7和DU145细胞的IC50值。1.4.WesternBlot细胞蛋白质样品获得：2×105B16BL6细胞接种到六孔板中，24h后加入多浓度受试样品，作用48h后吸弃培养液，加入上样缓冲液(50mMTris，pH7.2；150mMNaCl；1％sodiumdeoxycholate；0.1％SDS；1％Triton-X100；10mMNaF；1mMNa3VO4；proteaseinhibitor)，收集细胞裂解液，超声15秒2次，100℃加热变性蛋白。电泳：制备电泳凝胶(12％)，进行SDS-PAGE。转膜：(湿法转移)膜处理：预先裁好与胶条同样大小的滤纸和PVDF膜，浸入转膜缓冲液中10min。转膜：转膜装置从下至上依次按阳极碳板、2层滤纸、PVDF膜、凝胶、2层滤纸、阴极碳板的顺序放好，滤纸、凝胶、PVDF膜精确对齐，每一步去除气泡，上压填充物，加满转膜液。接通电源，恒压24V，转移3h。转膜结束后，断开电源将膜取出。免疫反应：洗膜，5％脱脂奶粉包被液包被1h，洗膜。加入一抗，4℃放置12h以上。再洗膜，加入相应二抗，4℃放置12h以上，洗膜。膜加入ECL显色液，暗盒中胶片感光，洗片机显影定影。1.5.小鼠实体肿瘤生长模型以0.25％胰酶消化贴壁生长良好的MCF-7乳腺癌细胞，加培养液800rpm离心弃上清，再以无血清培养基混悬肿瘤细胞，调整细胞数。然后于每只小鼠右侧腹股沟皮下处接种肿瘤细胞悬液0.2ml(约106个)，接种次日开始灌胃给药，连续28天，每日观察测量小鼠腹股沟皮下处肿瘤生长情况。给药结束后处死小鼠，剥取分离瘤组织，以电子天平称重，记录瘤重。2.实验结果2.1.本专利技术组合物对MCF-7细胞增殖及AKT表达的影响从表1结果看出，隐丹参酮单用对MCF-7本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有协同抗肿瘤作用的组合物，其特征在于含有化合物成分：隐丹参酮(cryptotanshinone)和莪术醇(curcumol)。

【技术特征摘要】
1.一种具有协同抗肿瘤作用的组合物，其特征在于含有化合物成分：隐丹参酮(cryptotanshinone)和莪术醇(curcumol)...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈文星，张科卫，陆茵，王爱云，
申请(专利权)人：南京中医药大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32