一种抗真菌活性物质、其制备方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种抗真菌活性物质、其制备方法及应用。所述制备方法包括以下步骤：将德氏乳杆菌、海洋放线菌白色霉菌抗真菌变种和黑曲霉混合后培养，在35‑39℃下培养5‑10天，得到菌体培养液；将菌体培养液加热至110‑130℃，保持1‑3小时后离心，取上清液，即为所述抗真菌活性物质。利用所述制备方法得到的抗真菌活性物质能够有效的抑制真菌生长，特别是黄曲霉和/或烟曲霉的生长。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种抗真菌活性物质、其制备方法及应用。
技术介绍
病原性真菌在畜、禽中可引起的疾病并在世界范围内分布，其中有10多种能引起致死性感染。真菌病属于传染病范畴。还有一部分疾病是由非病原性真菌产生的毒素所引起的真菌中毒病，如一些中毒性真菌在饲料或饲草中营腐生或寄生生活，所产生的毒性代谢产物或毒素被动物摄食后可引起急性或慢性中毒，随无传染性但也给畜牧业带来较大损失。在致病性真菌中，比较常见的有曲霉菌属中的黄曲霉(Asperillusflavus)。它能在畜禽中引起急性和慢性真菌毒素中毒，称为黄曲霉中毒。另一种烟曲霉(A.fumiatus)则能在各种畜禽中引起一系列的真菌病，称为曲霉病，包括幼鸡的霉菌性肺炎和牛的、乳腺炎和瘤胃炎等。由组织胞浆菌属中的皮疽组织胞浆菌(Histoplasmafarciminosum)引起的、流行性淋巴管炎，是很早就流行于很多国家的一种慢性传染病，主要经过损伤的皮肤或粘膜而感染，以皮下淋巴管发生化脓性、形成结节和为特征。病变多发生于四肢、颈、胸侧等处，组织胞浆菌即存在于脓汁中。在临诊上很易与鼻疽(皮疽)相混淆。其他真菌的病包括：霉菌性流产，由胎盘受真菌感染而致，常见于，马及也有发生；霉菌性乳腺炎，通常因乳房内注射受真菌污染的抗生素制剂而引起，多见于和；霉菌性瘤胃炎，发生于长期饲喂抗生素的犊牛，因瘤胃内的正常细菌菌丛受抑制，利于真菌繁殖而致病；霉菌性角膜炎由角膜受损伤后真菌侵入而引起，受感染的角膜发生混浊和溃疡。目前常用的抗真菌药物主要有两性霉素和合成类抗真菌药物，比如克霉唑，氟康唑等等。这些药物通常安全性低，易残留，需要开发具有较高安全性的抗真菌药物。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的上述问题，本专利技术提供了一种抗真菌活性物质、其制备方法及应用。利用所述制备方法得到的抗真菌活性物质能够有效的抑制真菌生长，特别是黄曲霉和/或烟曲霉的生长。本专利技术所采用的技术方案为：一种抗真菌活性物质的制备方法，包括以下步骤：A、将德氏乳杆菌、海洋放线菌白色霉菌抗真菌变种和黑曲霉混合后培养，在35-39℃下培养5-10天，得到菌体培养液；B、将菌体培养液加热至110-130℃，保持1-3小时后离心，取上清液，即为所述抗真菌活性物质。所述抗真菌活性物质在常温下密封即可保持长久的抗菌活性，便于保存和使用。其中，德氏乳杆菌的学名为Lactobacillusdelbrueckii；海洋放线菌白色霉菌抗真菌变种又称海洋放线菌白色链霉菌抗真菌变种，学名为S.albusvar.fungatus；黑曲霉的学名为Aspergillusniger。作为优选的菌种配比，步骤A中，所述德氏乳杆菌、海洋放线菌白色霉菌抗真菌变种和黑曲霉混合时的浓度比为3:1:1。为进一步优化菌种的培养，以得到更为优质的抗真菌活性物质，本申请的专利技术人对现有的培养基做了进一步优化，具体来说，步骤A中，培养时采用的培养基包括以下浓度的组分：陈皮0.05-0.15％、桂枝0.03-0.07％、豆饼粉2-4％、淀粉2-4％和磷酸二氢钾0.2-0.3％，余量为水。根据本申请的一个实施例，步骤A中，培养时采用的培养基包括以下浓度的组分：陈皮0.1％、桂枝0.05％、豆饼粉3％、淀粉3％和磷酸二氢钾0.25％，余量为水。为进一步对培养基的优化，所述培养基还包括以下组分：硫酸钾、硫酸镁和硫酸铁，其中硫酸钾的浓度小于等于0.15％，硫酸镁的浓度小于等于0.25％，硫酸铁的浓度小于等于0.005％。添加硫酸钾、硫酸镁和硫酸铁主要是考虑到增强所培养菌种的蛋白酶活性，从而增加抗菌物质的产生。步骤B中，离心的转速为2000-4000rpm。本专利技术还公开了一种抗真菌活性物质，所述抗真菌活性物质由上述制备方法制备而成。根据本专利技术的实施例4，本专利技术还公开了所述抗真菌活性物质在抑制真菌生长中的应用。特别的，所述真菌为黄曲霉和/或烟曲霉。本专利技术提供了一种抗真菌活性物质、其制备方法及应用。利用所述制备方法得到的抗真菌活性物质能够有效的抑制真菌生长，特别是黄曲霉和/或烟曲霉的生长。附图说明图1为1-3实施例条件下所获的抗真菌活性物质在不同稀释条件下对黄曲霉菌的生长抑制效率；图2为1-3实施例条件下所获的抗真菌活性物质在不同稀释条件下对烟曲霉的生长抑制效率。具体实施方式下面结合实施例，更具体地说明本专利技术的内容。应当理解，本专利技术的实施并不局限于下面的实施例，对本专利技术所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本专利技术保护范围。在本专利技术中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。实施例1一种抗真菌活性物质的制备方法，包括以下步骤：A、将德氏乳杆菌、海洋放线菌白色霉菌抗真菌变种和黑曲霉混合后培养，所述德氏乳杆菌、海洋放线菌白色霉菌抗真菌变种和黑曲霉混合时的浓度比为3:1:1；在35℃下培养10天，得到菌体培养液；培养基包括以下浓度的组分：陈皮0.05％、桂枝0.07％、豆饼粉2％、淀粉4％和磷酸二氢钾0.2％；余量为水。B、将菌体培养液加热至110℃，保持3小时后离心，离心的转速为2000rpm，离心后取上清液，即为所述抗真菌活性物质。实施例2一种抗真菌活性物质的制备方法，包括以下步骤：A、将德氏乳杆菌、海洋放线菌白色霉菌抗真菌变种和黑曲霉混合后培养，所述德氏乳杆菌、海洋放线菌白色霉菌抗真菌变种和黑曲霉混合时的浓度比为3:1:1；在39℃下培养5天，得到菌体培养液；培养基包括以下浓度的组分：陈皮0.15％、桂枝0.03％、豆饼粉4％、淀粉2％、磷酸二氢钾0.3％、硫酸钾0.1％、硫酸镁0.25％和硫酸铁0.003％；余量为水。B、将菌体培养液加热至130℃，保持1小时后离心，离心的转速为4000rpm，离心后取上清液，即为所述抗真菌活性物质。实施例3一种抗真菌活性物质的制备方法，包括以下步骤：A、将德氏乳杆菌、海洋放线菌白色霉菌抗真菌变种和黑曲霉混合后培养，所述德氏乳杆菌、海洋放线菌白色霉菌抗真菌变种和黑曲霉混合时的浓度比为3:1:1；在37℃下培养7天，得到菌体培养液；培养基包括以下浓度的组分：陈皮0.1％、桂枝0.05％、豆饼粉3％、淀粉3％、磷酸二氢钾0.25％、硫酸钾0.15％、硫酸镁0.2％和硫酸铁0.005％；余量为水。B、将菌体培养液加热至120℃，保持2小时后离心，离心的转速为3000rpm，离心后取上清液，即为所述抗真菌活性物质。实施例4本实施例为所述抗真菌活性物质的抗菌试验，取上述实施例1-3所获得抗菌活性物质按原液(不稀释)、用对应的培养基稀释10倍、100倍和1000倍分为四组，并分别置于消毒过的150毫升培养瓶中。使用不添加培养产物的培养基用作对照。37℃条件下，加入0.1ml2×104ml-1黄曲霉菌或烟曲霉孢子加入培养瓶中，混匀。培养液随后倒入培养皿中，在25℃条件下培养72小时。使用比浊仪测定真菌生长情况并计算抑制效率。图1为1-3实施例条件下所获的抗真菌活性物质在不同稀释条件下对黄曲霉菌的生长抑制效率。图2为1-3实施例条件下所获的抗真菌活性物质在不同稀释条件下对烟曲霉的生长抑制效率。从图中能够看出，在未经稀释或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗真菌活性物质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A、将德氏乳杆菌、海洋放线菌白色霉菌抗真菌变种和黑曲霉混合后培养，在35‑39℃下培养5‑10天，得到菌体培养液；B、将菌体培养液加热至110‑130℃，保持1‑3小时后离心，取上清液，即为所述抗真菌活性物质。

【技术特征摘要】
1.一种抗真菌活性物质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A、将德氏乳杆菌、海洋放线菌白色霉菌抗真菌变种和黑曲霉混合后培养，在35-39℃下培养5-10天，得到菌体培养液；B、将菌体培养液加热至110-130℃，保持1-3小时后离心，取上清液，即为所述抗真菌活性物质。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤A中，所述德氏乳杆菌、海洋放线菌白色霉菌抗真菌变种和黑曲霉混合时的浓度比为3:1:1。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤A中，培养时采用的培养基包括以下浓度的组分：陈皮0.05-0.15％、桂枝0.03-0.07％、豆饼粉2-4％、淀粉2-4％和磷酸二氢钾0.2-0.3％，余量为水。4.根据权利要求3所述的制备方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘芮，
申请(专利权)人：河北路克希德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13