一种提高太子参多糖免疫活性的硒化修饰方法技术

本发明专利技术提供一种提高太子参多糖免疫活性的硒化修饰方法，取太子参多糖与Na2SeO3在特定条件反应，反应结束后冷却至室温，用无水碳酸钠调节pH值5～6，离心，过滤，溶液装入1000 D透析袋流水透析；每6小时取一次透析液样品，用抗坏血酸法检测是否含亚硒酸钠，至无亚硒酸钠残留或不显示红色时停止透析；溶液经Sephadex G‑100柱层析获得硒化太子参多糖。本发明专利技术用硝酸进行反应会造成多糖链的断裂，形成寡糖，造成硒多糖的产率不高。本发明专利技术通过使用冰醋酸不易使糖链断裂，提高了硒化多糖的产率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于兽医学领域，具体涉及一种提高太子参多糖免疫活性的硒化修饰方法。
技术介绍
太子参为《中国药典》收载的常用中药，具有益气健脾、生津润肺等功效，临床用于脾虚体倦、食欲不振、病后虚弱等症状。药理试验表明，太子参多糖具有增强机体免疫功能的作用，太子参多糖为中性葡聚糖。硒是生命活动的必须元素，在人类防癌抗癌、延缓衰老、提高机体免疫力、预防和治疗心血管疾病和克山病等方面都发挥着重要作用。硒的存在形式有无机硒和有机硒两种，相对而言有机硒毒性低、副作用小，能够更好的发回硒的生理活性。目前硒化多糖的方法包括了硝酸-亚硒酸钠法，此方法存在三个问题：1.用透析袋透析时会有一些多糖流出，导致硒化多糖的提取率不高。2.使用氯化钡作为催化剂虽然可以提高硒化多糖的制备速度，但同时会造成氯化钡的残留，使硒化多糖不纯。3.检验硒化修饰的成功与否一般使用氢化物发生-原子荧光光谱法、红外光谱法，但对其硒化前后的分子量不清楚。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种提高太子参多糖免疫活性的硒化修饰方法。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种提高太子参多糖免疫活性的硒化修饰方法，所述的方法包括如下：（1）取太子参多糖500mg，置于50mL水中，在磁力搅拌下溶解后，分别置三颈瓶中，缓慢滴加2mL的冰醋酸和铁酸镁0.6g；添加Na2SeO3200-400mg，在50-90℃下反应6-10h；（2）反应结束后冷却至室温，用无水碳酸钠调节pH值5～6，离心，过滤，溶液装入1000D透析袋流水透析；每6小时取一次透析液样品，用抗坏血酸法检测是否含亚硒酸钠，至无亚硒酸钠残留或不显示红色时停止透析；（3）溶液经SephadexG-100柱层析，设定流速为12mL·h-1，收集洗脱液；洗脱液经减压浓缩，冷冻干燥；得到硒化太子参多糖；用氢化物发生-原子荧光光谱法、红外光谱仪、液质测定硒化太子参多糖的硒含量、分子量等。测定硒化太子参多糖的免疫增强活性：包括硒化太子参多糖促进巨噬细胞对中性红的吞噬能力，NO产生量以及IL-6、TNF-α分泌。表本专利技术的优点在于：与现有技术相比，1.用硝酸进行反应会造成多糖链的断裂，形成寡糖，造成硒多糖的产率不高。本专利技术通过使用冰醋酸不易使糖链断裂，提高了硒化多糖的产率。2.使用氯化钡作为催化剂虽然可以提高硒化多糖的制备速度，但同时会造成氯化钡的残留，使硒化多糖不纯。本专利技术通过添加铁酸镁，一方面铁酸镁是一种固体催化剂，不易溶于水，保证了硒化多糖的纯度；另一方面铁酸镁更有利于形成五元环亚硒酸酯。3.反应后硒多糖不可避免的有一些寡糖的存在，所以通过SephadexG-100柱层析，更进一步纯化了硒多糖。附图说明图1硒化太子参多糖和太子参多糖对小鼠巨噬细胞TNF-α和IL-6分泌量，柱子中a-e不同字母表示差异显著(P<0.05)。具体实施方式实施例1一种提高太子参多糖免疫活性的硒化修饰方法，所述的方法包括如下：（1）取太子参多糖500mg9份，置于50mL水中，在磁力搅拌下溶解后，分别置三颈瓶中，缓慢滴加2mL的冰醋酸和铁酸镁0.6g；添加Na2SeO3200-400mg，在50-90℃下反应6-10h；（2）反应结束后冷却至室温，用无水碳酸钠调节pH值6，离心，过滤，溶液装入1000D透析袋流水透析；每6小时取一次透析液样品，用抗坏血酸法检测是否含亚硒酸钠，至无亚硒酸钠残留或不显示红色时停止透析；（3）溶液经SephadexG-100柱层析，设定流速为12mL·h-1，收集洗脱液；洗脱液经减压浓缩，冷冻干燥；分别得到9种硒化太子参多糖，依次标记为sRPP1-sRPP9；用氢化物发生-原子荧光光谱法、红外光谱仪、液质测定硒化太子参多糖的硒含量、分子量等。测定硒化太子参多糖的免疫增强活性：包括硒化太子参多糖促进巨噬细胞对中性红的吞噬能力，NO产生量以及IL-6、TNF-α分泌。使用该方法后，提高了硒多糖的得率。用传统方法制得的硒多糖得率一般在15%-30%，使用该方法后硒多糖得率在35%-67%。实施例2小鼠自由采食和饮水，温度控制在22±1℃，采用12h循环光照。小鼠随机分为11组，分为健康对照组，给药组，以及环磷酰胺(CY)模型组，每组20只，所有动物适应性饲养7d。健康对照组和环磷酰胺(CY)模型组皮下注射生理盐水，持续14d。给药组sRPP2，sRPP3，RPP各分为三个浓度的3组（1mg/mL，2mg/mL，3mg/mL），共9组，皮下注射给药0.2mL，连续给药14d。第15天开始，除了健康对照组，9个给药组和环磷酰胺(CY)模型组腹腔注射环磷酰胺，80mg/kg·d，1天1次，连续注射3天。于最后一次注射CY后24h，摘眼球取血，分离血清，按照ELISA试剂盒的说明书进行严格操作，测定血清中TNF-α，IL-6含量的测定。TNF-α、IL-6含量测定结果各组的TNF-α、IL-6的OD值见图1。健康对照组的TNF-α和IL-6的OD值均显著大于CY模型组(P<0.05)；RPP三个剂量组的TNF-α均显著大于CY模型组(P<0.05)，在0.2mg和0.4mg剂量组时的IL-6显著大于CY模型组(P<0.05)。sPRR2和sPRR3三个剂量组的TNF-α和IL-6均显著大于CY模型组(P<0.05)。sPRR2在0.2mg和0.6mg剂量组时，sPRR3在三个剂量组时，TNF-α显著大于RPP组(P<0.05)；sPRR3在三个剂量组时，TNF-α显著大于sRPP2组(P<0.05)。sPRR2和sPRR3在0.2mg和0.4mg剂量组时，IL-6显著大于RPP组(P<0.05)；sPRR2和sPRR3各剂量组中IL-6的含量差异不显著（P>0.05）。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例，凡依本专利技术申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本专利技术的涵盖范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高太子参多糖免疫活性的硒化修饰方法，其特征在于：所述的方法包括如下：（1）取太子参多糖500 mg，置于50 mL水中，在磁力搅拌下溶解后，分别置三颈瓶中，缓慢滴加2 mL的冰醋酸和铁酸镁0.6 g；添加Na2SeO3200‑400mg，在50‑90℃下反应6‑10h；（2）反应结束后冷却至室温，用无水碳酸钠调节pH值5～6，离心，过滤，溶液装入1000 D透析袋流水透析；每6小时取一次透析液样品，用抗坏血酸法检测是否含亚硒酸钠，至无亚硒酸钠残留或不显示红色时停止透析；（3）溶液经Sephadex G‑100柱层析，设定流速为12 mL·h‑1，收集洗脱液；洗脱液经减压浓缩，冷冻干燥；得到硒化太子参多糖。

【技术特征摘要】
1.一种提高太子参多糖免疫活性的硒化修饰方法，其特征在于：所述的方法包括如下：（1）取太子参多糖500mg，置于50mL水中，在磁力搅拌下溶解后，分别置三颈瓶中，缓慢滴加2mL的冰醋酸和铁酸镁0.6g；添加Na2SeO3200-400mg，在50-90℃下反应6-10h；（2）反应结束后冷却至室温，用无...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦韬，黄一帆，李健，马玉芳，黄小红，俞道进，任喆，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35