一种分析皂苷与蛋白质相互作用的方法技术

本发明专利技术提供了一种分析皂苷与蛋白质相互作用的方法，包括以下步骤：1)将蛋白质、皂苷和磷酸缓冲液混合，得到待测样品；2)采用流变学方法检测所述步骤1)得到的待测样品的粘度或/和剪切应力；3)根据预先得到的蛋白质磷酸缓冲液和皂苷磷酸缓冲液的粘度或/和剪切应力与所述步骤2)得到的待测样品的粘度或/和剪切应力的关系，得出皂苷与蛋白质的相互作用。本申请的皂苷与蛋白质的相互作用方式为氢键和疏水相互作用。

Method for analyzing interaction between saponin and protein

The present invention provides a method for analysis of saponin and protein interactions, which comprises the following steps: 1) protein, saponin and phosphate buffer mixture, get the sample to be tested; 2) using rheology detection method by the step 1) the sample viscosity and / or shear stress; 3 according to the previously obtained protein) phosphate buffer and saponin phosphate buffer viscosity and shear stress and / or the step 2) get the relationship between the sample viscosity or / and shear stress, the interaction of saponin and protein. The application of this method for the interaction of saponins with proteins is hydrogen bonding and hydrophobic interactions.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品加工领域，特别涉及一种分析皂苷与蛋白质相互作用的方法。
技术介绍
皂苷是一类广泛存在于高等陆生植物和海洋生物中、以三萜或甾体化合物为苷元的糖苷，具有多种有益于人体健康的生物活性，是天然产物化学的一个研究热点，在制药、功能食品的研发等领域具有广阔的应用前景。皂苷类化合物以其在水溶液中震荡后能够产生稳定持久的泡沫而得名，苷元部分为弱极性或非极性，亲脂性较强；而同糖结合的一端具有较强的亲水性，因此皂苷的化学性质决定了其在水溶液体系中能够起到一定的乳化性、起泡性以及稳定泡沫的作用。皂苷与蛋白质的相互作用发生以后可以形成二者的复合物或复合体系，其起泡性和乳化性区别于溶液单独添加皂苷或蛋白的情况，从而通过调整二者之间的浓度或质量比例，对产品的功能特性进行改良，视情况对泡沫稳定性和乳化稳定性进行优化。然而目前将皂苷添加于饮料、啤酒、乳制品等液态食品中后，对食品固有形态变化的影响缺乏系统研究与快速分析，尤其皂苷与各种富蛋白食品中常见蛋白质在水溶液中的相互作用缺乏有效的分析评价手段，严重制约了高品质、高稳定性的皂苷类功能食品的研发。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，而提供一种分析皂苷与蛋白质相互作用的方法，能够明确皂苷与蛋白质的作用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：一种分析皂苷与蛋白质相互作用的方法，包括以下步骤：1)将蛋白质、皂苷和磷酸缓冲液混合，得到待测样品；2)采用流变学方法检测所述步骤1)得到的待测样品的粘度或/和剪切应力；3)根据预先得到的蛋白质磷酸缓冲液和皂苷磷酸缓冲液的粘度或/和剪切应力与所述步骤2)得到的待测样品的粘度或/和剪切应力的关系，得出皂苷与蛋白质的相互作用。优选的，所述步骤2)中的检测采用流变仪，所述流变仪的测量平行板夹具的直径为10～100mm，所述流变仪的样品台与探头之间的间隙为0.5～2mm。优选的，所述检测为：在20℃测定剪切速率从2.0/s增加到200/s的条件下所述待测样品的剪切应力和粘度的随剪切速率的变化。优选的，所述剪切速率梯度变化，所述梯度为50/s。优选的，所述检测还包括：在剪切速率为150/s或200/s条件下，测定5～40℃范围内所述待测样品的粘度随温度的变化。优选的，所述温度梯度变化，所述梯度为5℃。优选的，所述待测样品中蛋白质的质量与待测样品的体积比为(0.5～2)g:100ml，所述待测样品中皂苷的质量与待测样品的体积比为(0～0.8)g:100ml。优选的，所述蛋白质为大豆分离蛋白或蛋清蛋白，所述皂苷为大豆皂苷。本专利技术提供了一种分析皂苷与蛋白质相互作用的方法，包括以下步骤：1)将蛋白质、皂苷和磷酸缓冲液混合，得到待测样品；2)采用流变学方法检测所述步骤1)得到的待测样品的粘度或/和剪切应力；3)根据预先得到的蛋白质磷酸缓冲液和皂苷磷酸缓冲液的粘度或/和剪切应力与所述步骤2)得到的待测样品的粘度或/和剪切应力的关系，得出皂苷与蛋白质的相互作用。在剪切速率为0～5/s时，添加质量浓度0.1％和0.2％的大豆皂苷对蛋白质黏度的影响较大，呈现出先大后小的趋势，随着剪切速率的增大，黏度变化趋于平缓。在大豆皂苷的质量浓度为0、0.05％、0.4％、0.8％时，对蛋白质黏度的影响较小，变化趋势相似。蛋白质剪切应力随剪切速率的增大呈上升趋势，且添加不同量的大豆皂苷对蛋白质剪切应力的影响逐渐减小。蛋白质的黏度随温度的升高逐渐降低。由此可以得出，皂苷与蛋白质的相互作用方式为氢键和疏水相互作用。附图说明图1为大豆皂苷Ab对大豆分离蛋白黏度的影响；图2为大豆皂苷Ab对大豆分离蛋白剪切应力的影响；图3为pH值对大豆皂苷Ab-大豆分离蛋白复合体系黏度的影响；图4为NaCl对大豆皂苷Ab-大豆分离蛋白复合体系黏度的影响；图5为蔗糖对大豆皂苷Ab-大豆分离蛋白复合体系黏度的影响；图6为大豆皂苷Bb对蛋清蛋白黏度的影响；图7为大豆皂苷Bb对蛋清蛋白剪切应力的影响；图8为pH值对大豆皂苷Bb-蛋清蛋白复合体系黏度的影响；图9为NaCl浓度对大豆皂苷Bb-蛋清蛋白复合体系黏度的影响；图10为蔗糖对大豆皂苷Bb-蛋清蛋白复合体系黏度的影响。具体实施方式本专利技术提供了一种分析皂苷与蛋白质相互作用的方法，包括以下步骤：1)将蛋白质、皂苷和磷酸缓冲液混合，得到待测样品；2)采用流变学方法检测所述步骤1)得到的待测样品的粘度或/和剪切应力；3)根据预先得到的蛋白质磷酸缓冲液和皂苷磷酸缓冲液的粘度或/和剪切应力与所述步骤2)得到的待测样品的粘度或/和剪切应力的关系，得出皂苷与蛋白质的相互作用。在本专利技术中，将蛋白质、皂苷和磷酸缓冲液混合，得到待测样品。本专利技术优选将蛋白质加入到磷酸缓冲溶液中，快速搅打使蛋白质均匀分散，再经磁力搅拌器搅拌，在磁力搅拌器搅拌过程中加入皂苷，得到待测样品。在本专利技术中，所述磷酸缓冲液配制的方法为：取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1mL，用水稀释值100mL。所述磷酸缓冲液的pH值为7.0。在本专利技术中，所述磁力搅拌器搅拌的条件为：所述搅拌的速度优选为500～1000rpm，更优选为600～900rpm，最优选为700～800rpm；所述搅拌的时间优选为1～6min，更优选为2～5min，最优选为3～4min。在本专利技术中，在磁力搅拌和皂苷加入完毕后优选继续搅拌2～10min，更优选为4～8min，最优选为5～7min。在本专利技术中，所述待测样品中蛋白质的质量与待测样品的体积比优选为(0.5～2)g:100ml，更优选为(0.8～1.5)g:100ml；所述待测样品中皂苷的质量与待测样品的体积比优选为(0～0.8)g:100ml，更优选为(0.1～0.6)g:100ml。在本专利技术中，所述蛋白质为大豆分离蛋白或蛋清蛋白，所述皂苷为大豆皂苷。本专利技术对所述大豆分离蛋白、蛋清蛋白和大豆皂苷的来源没有特殊限定，采用市售商品即可。在本专利技术中，所述检测采用的仪器优选为流变仪，所述流变仪的测量平行板夹具的直径优选为10～100mm，更优选为30～70mm，更优选为40～60mm；所述流变仪的样品台与探头之间的间隙优选为0.5～2mm，更优选为0.8～1.5mm。在本专利技术中，所述检测优选为：在20℃测定剪切速率从2.0/s增加到200/s的条件下所述待测样品的剪切应力和粘度的随剪切速率的变化。所述剪切速率梯度变化，所述梯度为50/s，在本专利技术实施例中，所述剪切速率具体为0.2/s、50/s、100/s、150/s和200/s。在本专利技术中，所述检测优选还包括：在剪切速率为150/s或200/s条件下，测定5～40℃范围内所述待测样品的粘度随温度的变化，所述温度梯度变化，所述梯度为5℃，在本专利技术实施例中，所述温度具体为5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃和40℃。下面结合实施例对本专利技术提供的一种分析皂苷与蛋白质相互作用的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。实施例1待测样品制备：将大豆分离蛋白加入磷酸缓冲溶液中后，快速搅打使大豆分离蛋白均匀分散，再匀速搅拌3min，形成大豆分离蛋白溶液，使大豆分离蛋白质量与大豆分离蛋白溶液的体积比为1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分析皂苷与蛋白质相互作用的方法，包括以下步骤：1)将蛋白质、皂苷和磷酸缓冲液混合，得到待测样品；2)采用流变学方法检测所述步骤1)得到的待测样品的粘度或/和剪切应力；3)根据预先得到的蛋白质磷酸缓冲液和皂苷磷酸缓冲液的粘度或/和剪切应力与所述步骤2)得到的待测样品的粘度或/和剪切应力的关系，得出皂苷与蛋白质的相互作用。

【技术特征摘要】
1.一种分析皂苷与蛋白质相互作用的方法，包括以下步骤：1)将蛋白质、皂苷和磷酸缓冲液混合，得到待测样品；2)采用流变学方法检测所述步骤1)得到的待测样品的粘度或/和剪切应力；3)根据预先得到的蛋白质磷酸缓冲液和皂苷磷酸缓冲液的粘度或/和剪切应力与所述步骤2)得到的待测样品的粘度或/和剪切应力的关系，得出皂苷与蛋白质的相互作用。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的检测采用流变仪，所述流变仪的测量平行板夹具的直径为10～100mm，所述流变仪的样品台与探头之间的间隙为0.5～2mm。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述检测为：在20℃测定剪切速率从2.0/s增加到200/s的条件下所述待测样品的...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱力杰，刘秀英，王勃，马涛，杨立娜，刘贺，何余堂，
申请(专利权)人：渤海大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21