抗PD‑1抗体制造技术

本发明专利技术涉及结合PD‑1的抗体及其抗原结合片段，并且涉及使用此类抗体和抗原结合片段的方法。例如，本发明专利技术提供人源化抗PD‑1抗体及其使用方法。

Anti PD 1 antibody

The present invention relates to antibodies and antigen binding fragment with PD 1, and relates to the use of such antibodies and antigen binding fragment method. For example, the present invention provides a humanized anti PD antibodies and methods of use 1.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求2014年7月22日提交的国际申请号PCT/CN2014/082721的优先权，所述申请出于所有目的以引用的方式整体并入本文。专利
本专利技术涉及结合PD-1的抗体及其抗原结合片段，并且涉及使用所述抗体和抗原结合片段的方法。电子呈送的文本文件的描述由此电子呈送的文本文件的内容以引用的方式整体并入本文：序列表的计算机可读格式副本(文件名：CRBI_006_01WO_SeqList_ST25)；记录日期：2015年7月14日；文件大小147KB)。背景程序性死亡受体1(PD-1)主要在淋巴细胞上表达并且具有两种配体PD-L1和PD-L2。PD-1是由基因Pdcd1编码的55kDa蛋白质并且显示下调由其配体的接合驱动的抗原受体信号传导(Freeman等人(2000)JExpMed192:1027-34；Latchman,等人(2001)NatImmunol2:261-8；Carter等人(2002)EurJImmunol32:634-43)。PD-1属于免疫球蛋白超家族，所述超家族包括成员如CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。PD-1是含有用于配体结合的Ig可变型(V型)结构域和用于结合信号传导分子的细胞质尾的I型跨膜糖蛋白。PD-1包含两个基于细胞质酪氨酸的信号传导基序、基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)以及基于免疫受体酪氨酸的转换基序(ITSM)。在T细胞刺激之后，PD-1将酪氨酸磷酸酶SHP-2募集至其细胞质尾内的ITSM基序，从而导致参与CD3T细胞信号传导级联的效应分子如CD3ζ、PKCθ和ZAP70的脱磷酸化。相比之下，PD-1的配体(PD-L1和PD-L2)含有不具有已知功能的两个短细胞质区。所述配体具有含IgV和IgC样结构域的细胞外区并且组成型地表达于各种细胞类型中或可在各种细胞类型中诱导，所述细胞类型包括非造血组织以及各种肿瘤类型。PD-L1不仅在B细胞、T细胞、骨髓细胞和树突细胞(DC)上表达，而且在外周细胞像微血管内皮细胞和非淋巴器官像心脏、肺等上表达。相比之下，PD-L2仅在巨噬细胞和DC上发现。PD-1配体的表达模式表明PD-1在维持外周耐受性中的作用并且可用于调控外周中的自身反应性T细胞和B细胞应答。迄今，大量研究已经表明PD-1与其配体的相互作用导致体外和体内淋巴细胞增殖的抑制。PD-1/PDL1相互作用的破坏已显示增加T细胞增殖且促进细胞因子产生。因此，PD-1/PD-L1途径在控制免疫应答方面具有重要作用。PD-1/PD-L1信号传导的功能障碍似乎与诸如癌症和病毒感染的疾病的起始和发展相关。对敲除动物的分析已产生以下了解：PD-1主要在诱导和调控外周耐受性中起作用。因此，PD-1途径的治疗性阻断将有助于克服免疫耐受性且有助于癌症或感染的治疗以及加强疫苗接种(预防性的或治疗性的)期间的免疫性。本领域中对用于阻断PD-1途径的改进的方法存在需要。
技术实现思路
一方面，本专利技术提供结合程序性死亡受体1(PD-1)的抗体及其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗体及其抗原结合片段结合人PD-1。在一些实施方案中，所述抗体及其抗原结合片段结合PD-1并且阻断PD-L1和/或PD-L2与PD-1的结合。在其他实施方案中，所述抗PD-1抗体及其片段结合PD-1并且破坏PD-1/PD-L1或PD1/PD-L2途径。在一个实施方案中，所述抗体或其片段是鼠抗体、嵌合抗体、人抗体或人源化抗体。在一个实施方案中，所述抗PD-1抗体或其片段是单克隆抗体、scFv、Fab片段、Fab’片段、F(ab)’片段、双特异性抗体、免疫缀合物或其组合。在一个实施方案中，本专利技术提供一种分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：SEQIDNO:19-21、24-26、29-31、34-36、40-42、45-47、50-52、55-57、60-62、65-67、70-72、75-77、80-82、85-87、90-92、95-97、100-102、105-107、110-112以及115-117。在一个实施方案中，所述抗体或其片段包含轻链CDR1序列，所述轻链CDR1序列与选自由SEQIDNO:24、34、45、55、65、75、85、95、105和115组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少81％同源性、至少82％同源性、至少83％同源性、至少84％同源性、至少85％同源性、至少86％同源性、至少87％同源性、至少88％同源性、至少89％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。在一个实施方案中，所述抗体或其片段包含轻链CDR2序列，所述轻链CDR2序列与选自由SEQIDNO:25、35、46、56、66、76、86、96、106和116组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少81％同源性、至少82％同源性、至少83％同源性、至少84％同源性、至少85％同源性、至少86％同源性、至少87％同源性、至少88％同源性、至少89％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。在一个实施方案中，所述抗体或其片段包含轻链CDR3序列，所述轻链CDR3序列与选自由SEQIDNO:26、36、47、57、67、77、87、97、107和117组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少81％同源性、至少82％同源性、至少83％同源性、至少84％同源性、至少85％同源性、至少86％同源性、至少87％同源性、至少88％同源性、至少89％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。在一个实施方案中，所述抗体或其片段包含重链CDR1序列，所述重链CDR1序列与选自由SEQIDNO:19、29、40、50、60、70、80、90、100和110组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少81％同源性、至少82％同源性、至少83％同源性、至少84％同源性、至少85％同源性、至少86％同源性、至少87％同源性、至少88％同源性、至少89％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。在一个实施方案中，所述抗体或其片段包含重链CDR2序列，所述重链CDR2序列与选自由SEQIDNO:20、30、41、51、61、71、81、91、101和111组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少81％同源性、至少82％同源性、至少83％同源性、至少84％同源性、至少85％同源性、至少86％同源性、至少87％同源性、至少88％同源性、至少89％同源性、至少90％同本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合PD‑1的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含轻链CDR1序列，所述轻链CDR1序列与选自由SEQ ID NO:24、34、45、55、65、75、85、95、105和115组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性；轻链CDR2序列，所述轻链CDR2序列与选自由SEQ ID NO:25、35、46、56、66、76、86、96、106和116组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性；轻链CDR3序列，所述轻链CDR3序列与选自由SEQ ID NO:26、36、47、57、67、77、87、97、107和117组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性；重链CDR1序列，所述重链CDR1序列与选自由SEQ ID NO:19、29、40、50、60、70、80、90、100和110组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性；重链CDR2序列，所述重链CDR2序列与选自由SEQ ID NO:20、30、41、51、61、71、81、91、101和111组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性；以及重链CDR3序列，所述重链CDR3序列与选自由SEQ ID NO:21、31、42、52、62、72、82、92、102和112组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.22 CN PCT/CN2014/0827211.一种结合PD-1的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含轻链CDR1序列，所述轻链CDR1序列与选自由SEQIDNO:24、34、45、55、65、75、85、95、105和115组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性；轻链CDR2序列，所述轻链CDR2序列与选自由SEQIDNO:25、35、46、56、66、76、86、96、106和116组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性；轻链CDR3序列，所述轻链CDR3序列与选自由SEQIDNO:26、36、47、57、67、77、87、97、107和117组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性；重链CDR1序列，所述重链CDR1序列与选自由SEQIDNO:19、29、40、50、60、70、80、90、100和110组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性；重链CDR2序列，所述重链CDR2序列与选自由SEQIDNO:20、30、41、51、61、71、81、91、101和111组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性；以及重链CDR3序列，所述重链CDR3序列与选自由SEQIDNO:21、31、42、52、62、72、82、92、102和112组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性。2.如权利要求1所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含轻链CDR1，所述轻链CDR1由选自由SEQIDNO:24、34、45、55、65、75、85、95、105和115组成的组的氨基酸序列组成；轻链CDR2，所述轻链CDR2由选自由SEQIDNO:25、35、46、66、76、86、96、106和116组成的组的氨基酸序列组成；轻链CDR3，所述轻链CDR3由选自由SEQIDNO:26、36、47、57、67、77、87、97、107和117组成的组的氨基酸序列组成；重链CDR1，所述重链CDR1由选自由SEQIDNO:19、29、40、50、60、70、80、90、100和110组成的组的氨基酸序列组成；重链CDR2，所述重链CDR2由选自由SEQIDNO:20、30、41、51、61、71、81、91、101和111组成的组的氨基酸序列组成；以及重链CDR3，所述重链CDR3由选自由SEQIDNO:21、31、42、52、62、72、82、92、102和112组成的组的氨基酸序列组成。3.如权利要求1所述的抗体或片段，其中所述抗体或其片段包含轻链CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:24、25和26的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及重链CDR1、CDR2和CDR3，所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:19、20和21的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列。4.如权利要求1所述的抗体或片段，其中所述抗体或其片段包含轻链CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:34、35和36的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及重链CDR1、CDR2和CDR3，所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:29、30和31的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列。5.如权利要求1所述的抗体或片段，其中所述抗体或其片段包含轻链CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:45、46和47的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及重链CDR1、CDR2和CDR3，所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:40、41和42的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列。6.如权利要求1所述的抗体或片段，其中所述抗体或其片段包含轻链CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:55、56和57的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及重链CDR1、CDR2和CDR3，所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:50、51和52的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列。7.如权利要求1所述的抗体或片段，其中所述抗体或其片段包含轻链CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:65、66和67的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及重链CDR1、CDR2和CDR3，所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:60、61和62的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列。8.如权利要求1所述的抗体或片段，其中所述抗体或其片段包含轻链CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:75、76和77的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及重链CDR1、CDR2和CDR3，所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:70、71和72的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列。9.如权利要求1所述的抗体或片段，其中所述抗体或其片段包含轻链CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:85、86和87的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及重链CDR1、CDR2和CDR3，所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:80、81和82的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列。10.如权利要求1所述的抗体或片段，其中所述抗体或其片段包含轻链CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:95、96和97的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及重链CDR1、CDR2和CDR3，所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:90、91和92的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列。11.如权利要求1所述的抗体或片段，其中所述抗体或其片段包含轻链CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQIDNO:105、106和107的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及重链CDR1、CDR2和CDR3，所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包含与根据SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：查济平，孙自勇，邱均专，
申请(专利权)人：中美冠科生物技术太仓有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32