本发明专利技术将公开一种从红豆杉中提取分离紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的方法，它包括：提取－脱脂－萃取－分别对有机相和水相进行粗分离－反相色谱精分离－结晶。本发明专利技术依次采用８０－９５％、６０－７５％和２０－５５％的乙醇对红豆杉原料进行梯度提取，将不同极性的紫杉烷类化合物充分的提取出来，使紫杉烷类化合物的总提取率从传统工艺的７０％提高到了９０％以上；实现了从一批红豆杉原料中同时提取出８种不同的紫杉烷类化合物单体，且各单体纯度都可达到９８％以上；充分利用传统工艺中废弃的萃取步骤生成的水相物质，将红豆杉中紫杉烷类化合物的利用率提高了１０－２０倍，有效的解决了红豆杉原料资源匮乏的工业生产瓶颈问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及从天然植物中提取分离紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的 方法，具体涉及从红豆杉中提取分离紫杉醇及其它紫杉垸类化合物的方 法。(二)
技术介绍
-紫杉醇(paclitaxd,商品名Taxol)是从红豆杉属植物中分离得到的一种 具有独特抗癌作用的二萜类化合物。它在临床上广泛应用于卵巢癌、乳腺 癌、小细胞和非小细胞肺癌、食道癌、头颈癌、抗化疗白血病等多种癌症 的化疗，具有确切的疗效。作为唯一促进微管聚合的抗癌新药，紫杉醇产 品Taxol和Taxotere已成为主要的抗癌药物之一。制备紫杉醇的方法包括 l)自紫杉或其它可再生的紫杉属植物中提取Taxol; 2)自其它天然紫杉垸 (IO-去乙酰基巴卡亭III)化合物半合成Taxol或Taxotere; 3)从头全合成。 目前为止，仅仅提取和半合成方法实现了产业化，因紫杉醇结构复杂，已 报道的全合成方法路线长、收率低、成本极高，很难达到产业化的要求。 在上述方法中，常采用从紫杉属植物中提取的方法制备紫杉醇，其步骤一般为浸出(或超声或微波提取)-脱脂——萃取得到粗提物——2-3次工业色谱分离——结晶——溴化——正相色谱分离——重结晶得产品； 并在此基础上发展了许多改进工艺，包括固相萃取和专用反相柱的使用以 及省去溴化过程等，如申请号为01110208. X,名称为〈〈一种联合制备高纯 度紫杉醇、三尖杉宁碱、10—脱乙酰基巴卡亭111的方法》的中国专利技术专利，公开了一种从紫杉植物的树叶、树皮或树枝的醇提取物中联合生产高纯紫 杉醇、IO —脱乙酰基巴卡亭III和三尖杉宁碱的方法，它是用乙酸丁酯溶解醇提取物后，用碳酸氢钠溶液反萃取去除杂质，将有机相减压蒸发除去 溶剂，然后用乙腈溶解残渣，冷冻结晶得到10—脱乙酰基巴卡亭III;以 结晶后的母液为原料，用以高分子填料为固定相的反相色谱法分离和纯化 三尖杉宁碱和紫杉醇；在反相色谱法运作中，采用冷冻结晶法分离洗脱液 中的有效成分，再结合以硅胶为固定相的正相色谱法深度纯化紫杉醇产 品，其纯度可达99.6%以上。(三)
技术实现思路
本专利技术将提供一种从红豆杉中提取分离紫杉醇及其它紫杉垸类化合 物的方法，其中，所述其它紫杉垸类化合物为三尖杉宁碱、io-去乙酰基 紫杉醇、巴卡亭m、 10-去乙酰基巴卡亭ni、 7-木糖基-紫杉醇、7-表-紫杉醇和7-木糖基-10-去乙酰基紫杉醇。本专利技术从红豆杉中提取分离紫杉醇及其它紫杉垸类化合物的方法，它 包括提取——脱脂——萃取——分别对有机相和水相进行粗分离——反 相色谱精分离——结晶；其中，所述提过程取为依次用体积浓度80-95%、 60-75%和20-55%的乙醇对红豆杉原料进行提取；可采用红豆杉的树皮或枝叶为原料，将其在 阴暗处自然晾干后粉碎至40-100目再进行提取；所述乙醇的用量一般为 红豆杉原料重量的5-8倍v/w;提取的时间最好为5-8小时；合并三次提 取所得的提取液，回收乙醇后，浓縮至红豆杉原料重量的5-10倍，得到 提取液；所述脱脂过程为向浓缩后的提取液中加入等体积的非极性溶剂脱酯 三次，收集水层，浓縮后得到脱酯提取液；所述非极性溶剂可选自6号溶 剂汽油、120号溶剂汽油、石油醚、正己烷中的任意一种；所述萃取过程为将脱酯提取液用与其等体积的低碳链酯萃取三次，分 别合并三次萃取所得的有机相和水相；其中，所述低碳链酯可选自乙酸乙 酯、乙酸正丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯或乙酸异戊酯中的任意一种；所述对有机相进行粗分离是将萃取所得的有机相减压浓縮，得到浸膏 A;将浸膏A先上氧化铝层析柱，氧化铝层析柱所填充的氧化铝可为浸膏A 的20-50倍(w/w);可用低碳链酯和溶剂汽油的混合液作为洗脱剂进行洗 脱，其中，低碳链酯和溶剂汽油的体积比最好为h 9-9: 1，所得洗脱液 减压浓縮得到浸膏B;将浸膏B用丙酮溶解，得到拌有浸膏B的丙酮溶液， 其中，丙酮的用量以能溶解浸膏B为适量；将拌有浸膏B的丙酮溶液与去 活性硅胶均匀混合(丙酮的体积去活性硅胶重量=2: 1)，再将其加载到 上样量的30-100倍(w/w)的正相硅胶柱上，用低碳链酯和溶剂汽油的混合 液作为洗脱剂进行洗脱，其中，低碳链酯和溶剂汽油的体积比最好为1: 9-9: 1;分段收集紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的洗脱液，进行减压浓縮、 干燥后得到富集紫杉醇和其它紫杉烷类化合物的浓縮物A;上述过程中，所述低碳链酯与萃取过程中的选取范围相同;溶剂汽油可为6号溶剂汽油， 或90号溶剂油，或120号溶剂汽油等，对于洗脱的方式最好采用梯度洗 脱.,所述对水相的粗分离是将萃取所得的水相减压浓縮，得到浸膏C;将浸膏C用相当于其50倍重量的、体积浓度为1-5%的乙醇稀释后上弱极性 或非极性大孔吸附树脂，所述弱极性或非极性大孔吸附树脂可选自ADS-5、 ADS-8、 X-5、 AB-8、 NKA、 NKA-9、 NKA-II、 D101大孔树脂中的任意一种; 上好柱后可用体积浓度为10-95%的乙醇洗脱，所得洗脱液减压浓縮得到中 间体D;再将中间体D用丙酮溶解，其中，丙酮的用量以能溶解中间体D为适量；将拌有中间体的丙酮溶液与去活性硅胶均匀混合(丙酮的体积 去活性硅胶重量=2: 1)，再将其加载到上样量的30-100倍(w/w)的正相硅胶柱上，可用低碳链酯和溶剂汽油的混合液作为洗脱剂进行洗脱，其中， 低碳链酯和溶剂汽油的体积比最好为1: 9-9: 1;分段收集紫杉醇及其它 紫杉烷类化合物的洗脱液，进行减压浓縮、干燥后得到富集紫杉醇和其它 紫杉烷类化合物的浓縮物B;上述过程中，所述低碳链酯与萃取过程中的 选取范围相同；溶剂汽油可为6号溶剂汽油，或90号溶剂油，或120号 溶剂汽油，对于洗脱的方式最好采用梯度洗脱；所述反相色谱精分离过程是先将浓縮物A和浓縮物B合并，得到混合 物，将其真空干燥后，再用乙醇-水溶液溶解，其用量以能溶解混合物为 适量，两者之间的比例最好为l: 1(w/v)，其中，乙醇与水的体积比一般 为2-3: 1;再将溶解后的混合物上反相硅胶柱层析，所述反相硅胶柱可为 C18等；用乙腈-水溶液为洗脱剂进行洗脱，分段收集紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的洗脱液，进行减压浓縮、干燥，分别得到紫杉醇、三尖杉宁碱、io-去乙酰基紫杉醇、巴卡亭ni、 io-去乙酰基巴卡亭m、 7-木糖基-紫杉醇、7-表-紫杉醇和7-木糖基-10-去乙酰基紫杉醇的粉末物；其中，乙腈 与水的体积比最好为1: 9-8: 2,所述洗脱方式最好采用梯度洗脱，所述 反相硅胶柱填充的硅胶可为上样量的20-50倍；所述结晶过程是将精分离得到的紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的粉 末物，分别用丙酮-正己垸溶液结晶，过滤、真空干燥后，即可分别得到紫杉醇、三尖杉宁碱、io-去乙酰基紫杉醇、巴卡亭m、 io-去乙酰基巴卡亭III、 7-木糖基-紫杉醇、7-表-紫杉醇和7-木糖基-10-去乙酰基紫杉醇的单 体；上述过程中，所述丙酮-正己烷溶液的用量为各粉末物重量的1-5倍 (V/V)，其中，丙酮与正己烷的体积比一般为1-2: 1。本专利技术的优点1、 在提取过程中采用了用乙醇对红豆杉进行梯度提取，将不同极性的 紫杉烷类化合物充分的提取出来，使紫杉烷类化合物的总提取率从传统工艺的70%提高到了90%以上；2、本文档来自技高网...
【技术保护点】
从红豆杉中提取分离紫杉醇及其它紫杉烷类化合物的方法，其特征在于它包括：提取－脱酯－萃取－分别对有机相和水相进行粗分离－反相色谱精分离－结晶； 其中，所述提过程取为依次用体积浓度８０－９５％、６０－７５％和２０－５５％的乙醇对红豆杉原料进行提取，合并三次提取液，回收乙醇得到浓缩后的提取液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙莉莉，韦海洪，梁晶，唐江明，李振志，
申请(专利权)人：桂林市振达生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：45[中国|广西]
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