检测奇异变形杆菌的引物及探针、试剂盒、方法技术

本发明专利技术属于微生物检测技术领域，具体涉及一种检测奇异变形杆菌的引物及探针、试剂盒、方法。本发明专利技术公开一组用于检测奇异变形杆菌的引物及探针包括：针对检测四种目标序列的引物和探针。一种检测奇异变形杆菌的试剂盒，该试剂盒包括上述检测奇异变形杆菌的引物及探针。本发明专利技术提供的引物和探针，能准确检测到奇异变形杆菌，其特异性好，灵敏度高，避免了假阳性的出现，而且试剂盒成本低，使用方便，适用于对奇异变形杆菌的快速筛查。

Primer, probe, kit and method for detecting Proteus mirabilis

The invention belongs to the technical field of microbiological detection, in particular to a primer and a probe, a kit and a method for detecting Proteus mirabilis. The invention discloses a set of primers and probes for detecting Proteus mirabilis, which comprises a primer and a probe for detecting the four target sequences. The utility model relates to a kit for detecting Proteus mirabilis, which comprises a primer and a probe for detecting Proteus mirabilis. Primer and probe provided by the invention can accurately detect Proteus, its good specificity, high sensitivity, to avoid false positives, and kit, low cost, easy to use, suitable for rapid screening for Proteus mirabilis.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物检测
，具体涉及一种检测奇异变形杆菌的引物及探针、试剂盒、方法。
技术介绍
奇异变形杆菌(Proteusmirabilis,PM)属于变形杆菌属(Proteus)，为人和动物肠道中的常居菌，它是一种条件致病菌，在一定条件下可引起肠道内感染。某些血清型菌株具有较强的致病性，可通过饮食导致腹泻，奇异变形杆菌是细菌性腹泻的常见病原菌。PM感染主要见于婴幼儿，近年来其在成人腹泻病人中的检出率有所增加，并成为部分地区致腹泻的主要病原菌，且对常用药物逐步出现了耐药性，因此受到了广泛的关注。PM引起的临床症状多为水样腹泻，无法从症状判读致病菌并指导临床用药。PM鉴定检测的标准方法是传统分离培养技术。而传统PM鉴定方法需要经过一系列复杂的实验步骤，检测周期长，操作繁琐，准确性低，耗时费力，无法满足临床和实际工作的需要。随着分子生物学技术的快速发展，PCR技术已被广泛应用于细菌的检测和分类。然而常规PCR后电泳容易导致污染，易产生假阳性，使检测结果不准确。人们如果因食物或其他原因中毒而引起致腹泻，需要快速准确判断是何种病菌引起，但迄今为止，没有一种能够准确快速鉴定奇异变形杆菌的方法，目前的检测效率有待提高。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种快速准确检测奇异变形杆菌的引物及探针、试剂盒、方法，以解决目前奇异变形杆菌检测方法周期长、效率低、易产生假阳性等问题。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：一组用于检测奇异变形杆菌的引物及探针，包括：针对目标序列一的上游引物SEQIDNO:1和下游引物SEQIDNO:2，以及探针SEQIDNO:3；针对目标序列二的上游引物SEQIDNO:4和下游引物SEQIDNO:5，以及探针SEQIDNO:6；针对目标序列三的上游引物SEQIDNO:7和下游引物SEQIDNO:8，以及探针SEQIDNO:9；针对目标序列四的上游引物SEQIDNO:10和下游引物SEQIDNO:11，以及探针SEQIDNO:12。本专利技术提供的该组引物和探针，能准确检测到奇异变形杆菌，其特异性好，灵敏度高，避免了假阳性的出现。本专利技术还提出一种检测奇异变形杆菌的试剂盒，所述试剂盒包括上述检测奇异变形杆菌的引物及探针。本专利技术提供的试剂盒成本低，使用方便，适用于对奇异变形杆菌的快速准确筛查，在临床上有广泛的应用。本专利技术还提供一种利用上述试剂盒检测奇异变形杆菌的方法，包括如下步骤：获取样本核酸；将所述核酸样本与所述试剂盒配成反应体系，进行荧光定量PCR扩增；根据所述扩增结果确定所述样本是否含有奇异变形杆菌。本专利技术提供的奇异变形杆菌检测方法，可以快速鉴定奇异变形杆菌，其具有灵敏度高，操作简便，特异性好，避免了假阳性的出现等优点，可广泛应用于食品、水源安全等医药卫生领域。附图说明图1是实施例中奇异变形杆菌检测的荧光定量PCR扩增结果图。具体实施方式为了使本专利技术要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术实施例提供一组用于检测奇异变形杆菌的引物及探针，其核苷酸序列如表1所示。表1专利技术人通过对奇异变形杆菌进行全基因测序，并通过生物信息学对比分析，获得奇异变形杆菌中有四段特异的基因序列：目标序列一(序列号SEQIDNO:13)、目标序列二(序列号SEQIDNO:14)、目标序列三(序列号SEQIDNO:15)和目标序列四(序列号SEQIDNO:16)；这四段目标序列具体核苷酸序列如下。>目标序列一：C02011_Scaffold001_1069603_1193788_()_1200_3058ATGGCTGATATTATTTACCTAACATTAAATGGAAATAAACAAGGACTTATATCTGCTGGTTGTTCTTCTTATGATTCAATAGGAAATCGTTATCAAAATAATCATAGTGATGAAATTTTAGTATATTCAACAGATTATGATATTAGTCGTCATCAGAATATATCTCACGCCCCTTTTGTTTTTGAAAAAGCTAATGATAAATCCTCTGCCTTGCTTTTATCTAGTATAACAAATATGAAATTTTGGAATGTGATTTTAAATATTATCGTATCGATAAAAACGGAGGGTTATTACACTATAAAACGATCAAATTGA>目标序列二：C02011_Scaffold001_1069603_1193788_()_88310_92401TCAATCAAAGCCTTCCAATAAATCATTCACACCATTAGATGTATCTGAAACGATATCATCTAATGCTTTCATGGCTAAAGACTTGTATATCACGGGAATTGTTAAGGTATGTCTAAATTGCAATAATATACTTATAATGTCAGGAATTATGTCATTACTGTATCCCTTAACATAGCCTGAATTAGTTGATATCATTACGTTTTCTGGGATTTTTAAAGAATCTAAAGATAACCGATTATAATAGTCTTTTTCTTTAAAGAAATACTCATTATTCTTTAGCCTAAGTATATCAAAAACAGTATTTTTTAACGAAACTGGATAAGTTATATGAGTAATATACTCACGAAACCCTATAAAATTATTTTCAAAAGAACTATGTGAAAAATCACTTTCTTCAAAAACATATACATTATCAAGAATATTTAGATCACCCAAATTAGCATTACTATATGGTGTTAAAAGTAATTTTAAATCAGAAAAAAAACTAATGCTTGCCCATATTTCTTTGTTGCAATCATCTAAAAAGTCAAGATCTTCTAGTTTTTCTAAATGCTCAAAATATTCAGTGAGACATTTACGAAGAATTGATTTTCTAAAAGAAGCATAGTCAATATCAGAACAGAGCTCAATTATATTTTTATATTTAACAGCACTACCACTCTCATATAACTTTAATAAAAGGTCATCTCTTTTATCCTTAACTTCAATACAAATAAATTCTGCACTAAAATACTCCATAAGTGATTTATGAGACCATCGATAAAGAGCGCCTTCCTTAATAAATAAAGGTACTGAATATGTCAAATCGTTAATAAAAGAAATAGGTTTAACATTAACTCCTTTTAGTTTTTCTGTTATATTAGTTAAAATACTTTCAAGTTCTGCCCTACTAAATTCTAGTTTGCCATTATTTTTTAAACACCAAAATGCAAGCCTACGAAGTATGATGCTAAAGTCAGTTATATCCAAACCAGAAGATTTTTCTCGAACATAACCAGTTTCTTTACTAAGGTCATGGGTTTCAAAAAGAGCTTCAAAAACTTGACTATAAAATAAATCTTTTCGCCTTGGT本文档来自技高网...

【技术保护点】
一组用于检测奇异变形杆菌的引物及探针，包括：针对目标序列一的上游引物SEQ ID NO:1和下游引物SEQ ID NO:2，以及探针SEQ ID NO:3；针对目标序列二的上游引物SEQ ID NO:4和下游引物SEQ ID NO:5，以及探针SEQ ID NO:6；针对目标序列三的上游引物SEQ ID NO:7和下游引物SEQ ID NO:8，以及探针SEQ ID NO:9；针对目标序列四的上游引物SEQ ID NO:10和下游引物SEQ ID NO:11，以及探针SEQ ID NO:12。

【技术特征摘要】
1.一组用于检测奇异变形杆菌的引物及探针，包括：针对目标序列一的上游引物SEQIDNO:1和下游引物SEQIDNO:2，以及探针SEQIDNO:3；针对目标序列二的上游引物SEQIDNO:4和下游引物SEQIDNO:5，以及探针SEQIDNO:6；针对目标序列三的上游引物SEQIDNO:7和下游引物SEQIDNO:8，以及探针SEQIDNO:9；针对目标序列四的上游引物SEQIDNO:10和下游引物SEQIDNO:11，以及探针SEQIDNO:12。2.如权利要求1所述的检测奇异变形杆菌的引物及探针，其特征在于，所述探针5’端连接有荧光基团，所述探针3’端连接有淬灭基团；所述荧光基团选自FAM、HEX、ROX和Cy5，所述淬灭基团为DABCYL或BHQ。3.一种用于检测奇异变形杆菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1或2所述检测奇异变形杆菌的引物及探针。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：缓冲液、MgCl2、dNTP、DNA聚合酶。5.如权利要求4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：石晓路，扈庆华，袁建辉，姜伊祥，林一曼，邱亚群，李迎慧，江敏，陈琼城，白芳，
申请(专利权)人：深圳市疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：广东;44