经热处理的菌苗，及由这些经热处理的菌苗制备的乳剂疫苗制造技术

公开了经热处理的菌苗、生产经热处理的菌苗的方法以及从这些经热处理的菌苗制备的猪乳剂疫苗。

Heat treated vaccine and emulsion vaccine prepared from the heat treated vaccine

A heat treated vaccine, a method for producing a heat treated vaccine and a porcine emulsion vaccine prepared from these heat treated vaccines are disclosed.

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2008年12月4日、申请号为200880121714.0的同名申请的分案申请。专利
本专利技术通常涉及疫苗领域，且涉及稳定乳剂疫苗的方法。具体而言，本专利技术涉及经热处理的菌苗，生产经热处理的菌苗的方法及由这些经热处理的菌苗制备的猪乳剂疫苗。专利技术背景疫苗接种越来越多地用于控制动物中的传染性疾病。佐剂常常用在疫苗里，因为其能增加对抗原的体液和/或细胞免疫应答。疫苗经常配制为乳剂，因为乳剂能起到佐剂的作用且具有将抗原作为储库(depot)保留于注射位点的属性。乳化剂通常用于乳剂疫苗中。除了使用乳化剂之外，乳剂疫苗的稳定性还能通过使用机械方式减少乳剂微滴大小而达到。美国专利号5,084,269涉及佐剂制剂，其含有与矿物油组合的卵磷脂，其在宿主动物内产生较少刺激，同时诱导增加的系统性免疫。根据美国专利5,084,269的组合物以商标名(辉瑞公司的商标)商用。通常地，细菌抗原在加热时不稳定，甚至短时暴露于升高的温度能减少抗原的活性。例如目前的炭疽疫苗在37℃下48小时会丧失所有生物学活性(S.Sing,N.Ahuja,V.Chauhan,E.Rajasekaran,W.S.Mohsin,R.Bhat,和R.Bhatnagar；Bioche.Biophys.Res.Commun.2002Sep.6；295(5):1058-62)。专利技术概述本专利技术涉及经热处理的菌苗，生产经热处理的菌苗的方法及由这些经热处理的菌苗制备的猪乳剂疫苗。该方法包括加热菌苗至大约35-大约80℃的温度以形成经热处理的菌素。专利技术详述定义可接受抗原性活性-术语“可接受抗原性活性”指的是受到攻击之后或由通过使用同源的活生物体的编码效力测试(codifiedpotencytest)在疫苗接种的动物中诱导保护性免疫应答的能力。菌苗-术语“菌苗”指的是可用作疫苗组分的灭活的细菌悬液。乳化剂-术语“乳化剂”指的是用于制造更稳定的乳剂的物质。乳剂-术语“乳剂”指的是两种不相混液体的组合物，其中一种液体的小滴悬于另一种液体的连续相中。经热处理的菌苗-术语“经热处理的菌苗”指的是经过经经热处理的菌苗，其具有的脂酶活性是热处理之前脂酶活性的50％或更低，且具有可接受抗原性活性。反相乳剂-术语“反相乳剂”指的是油包水乳剂。脂酶-术语“脂酶”指的是能引起乳化剂在乳剂疫苗中分解的酶、酯酶、脂酶和磷脂酶。正常乳剂-术语“正常乳剂”指的是水包油乳剂。水包油乳剂-术语“水包油乳剂”指的是其中小油滴悬于连续水相中的乳剂。室温-术语“室温”指的是从18-25℃的温度。油包水乳剂-术语“油包水乳剂”指的是其中小水滴悬于连续油相中的乳剂。专利技术详述本专利技术涉及具有减少的脂酶活性的菌苗、由这些菌苗制备的猪乳剂疫苗、及减少菌苗的脂酶活性的方法。除了抗原性组分，一些菌苗具有脂酶活性。当具有脂酶活性的菌苗并入乳剂中时，脂酶可分解用于制造乳剂的乳化剂。包含具有高脂酶活性的菌苗的乳剂疫苗常常是不稳定的乳剂，包含具有低水平脂酶的菌苗的乳剂疫苗常常是稳定的。在灭活后产生具有脂酶活性的菌苗的细菌的实例包括猪红斑丹毒丝菌(Erysipelothrixrhusiopathieae)，单核细胞增多性李斯特杆菌(Listeriamonocytogenes)，大肠埃希氏菌(Escherichiacoli),猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae)，及钩端螺旋体(Leptospira)种属,如已知的病原体犬钩端螺旋体(Leptospiracanicola)、感冒伤寒型钩端螺旋体(Leptospiragrippotyposa)、哈德焦钩端螺旋体(Leptospirahardjo)、出血黄疸钩端螺旋体(Leptospiraicterohaemorrhagiae)、布拉迪斯拉发钩端螺旋体(Leptospirabratislava)和波摩那钩端螺旋体(Leptospirapomona)。这些细菌能引起猪的疾病，并且需要针对这些疾病进行疫苗接种。钩端螺旋体菌苗更可能具有高脂酶活性，而猪红斑丹毒丝菌可能具有较低的、更易控制的脂酶活性。脂酶，其能分解用于制造乳剂的乳化剂，并因此引起乳剂的不稳定及分解，可能包括一种或多种乳剂分解酶如酯酶、脂酶和磷脂酶。总体上这些酶，酯酶、脂酶和磷脂酶被称为脂酶。菌苗的脂酶活性可使用叫做O-匹伐酸伞形酮(O-pivaloyloxymethylumbelliferone)(C-POM)的合成底物进行测量。由脂酶引起的水解速率是对脂酶活性的测量。该反应中由脂酶引起的水解反应速率通过脂酶活性的产物的荧光强度的增加而进行监视。反应速率取决于所选择的确切水解测试条件，这样应当用相同测试条件产生的数据比较由水解速率测量所得的脂酶活性水平。在几篇文章中公开了文献方法,包括KuriokaS.和MatsudaM.(1976)Ana.Biochem.75:281-289,DeSilvaN.S.和QuinnP.A.(1987)J.Clin.Microbiol.25:729-731,及GrauA.和OrtizA.(1998)Chem.Phys.ofLipids.91:109-118)。在乳剂疫苗中，乳剂的分解引起组分的相分离。这是不需要的，因为当有相分离时，从容器中取出的各自的剂量可能不会含有相同水平的疫苗组分。此外，乳剂的丧失能导致乳化剂佐剂活性的丧失且导致疫苗抗原性效应的减少。减毒活病毒常常与菌苗一并包括在疫苗中。这些疫苗是有用的，因为单个疫苗能用于制造使用一种疫苗针对不同疾病的免疫性。如果脂酶活性存在于菌苗中，其会引起乳化剂从乳剂中的释放。该游离乳化剂能破坏并使活的疫苗病毒失活，这样导致病毒传染性的丧失。用于疫苗的菌苗可通过培养目的细菌，以及之后灭活细菌以产生含有多种细菌组分(包括细胞壁组分)的菌苗而形成。细菌可通过多种方法灭活，包括将其暴露于化合物如硫柳汞、福尔马林、甲醛、二乙胺、二乙烯亚胺(binaryethylenamine，BEI)、β丙内酯(BPL)和戊二醛。这些化合物的组合可以使用。此外，有可能用灭菌辐射以灭活细菌。现在已经发现具有这种脂酶活性的菌苗的脂酶活性可通过热处理而被减少。具体地，菌苗的脂酶活性可通过将菌苗加热至大约35-大约80℃的温度以形成经经热处理的菌苗而被减少，所述经经热处理的菌苗具有可接受抗原性活性。热处理进行一段足够的时间，以使经经热处理的菌苗的脂酶活性是热处理之前菌苗中所发现的50％或更低。对于优良的乳剂疫苗稳定性，脂酶活性不必减少到零。我们已经发现具有优良保质期的疫苗可由具有热处理前脂酶活性水平的50％或更低的脂酶活性水平的经热处理的菌苗制备。当测试底物的水解速率被用作对菌苗脂酶活性的测量时，比较测试底物在热处理之前的水解速率与热处理之后的水解速率。进行热处理以将水解速率减少到新鲜菌苗观察到的水解速率的50％或更低。如果相同方法被用于测量热处理之前的活性及热处理之后的活性，则测量脂酶活性水平的确切方法不是关键的。例如，如果测试底物的水解速率使用一种底物进行测量时，不同底物可以产生不同的速率。然而，如果相同底物用于起始活性确定及处理后的活性确定，相对速率仍会显示热处理的效应。有用于波摩那钩端螺旋体菌苗(9CFR§113.101)、出血本文档来自技高网...

【技术保护点】
包括油、一种或多种乳化剂和经热处理菌苗的乳剂疫苗，所述经热处理菌苗包括灭活细菌的悬液，其中所述灭活细菌为布拉迪斯拉发钩端螺旋体种属和1‑13种选自如下的引起猪疾病的灭活病毒或减毒活病毒：猪腺病毒、猪环状病毒、猪疱疹病毒、假狂犬病病毒、传统猪瘟热病毒、猪流行性腹泻病毒、猪血凝性脑脊髓炎病毒、猪细小病毒、猪呼吸性冠状病毒、猪生殖和呼吸道病毒、猪流感、传染性肠胃炎病毒及水疱性口炎病毒，其中经热处理的菌苗的脂酶活性是热处理之前菌苗的脂酶活性的50％或更低，并且其中所述乳剂疫苗稳定多至18个月。

【技术特征摘要】
2007.12.21 US 61/015,7181.包括油、一种或多种乳化剂和经热处理菌苗的乳剂疫苗，所述经热处理菌苗包括灭活细菌的悬液，其中所述灭活细菌为布拉迪斯拉发钩端螺旋体种属和1-13种选自如下的引起猪疾病的灭活病毒或减毒活病毒：猪腺病毒、猪环状病毒、猪疱疹病毒、假狂犬病病毒、传统猪瘟热病毒、猪流行性腹泻病毒、猪血凝性脑脊髓炎病毒、猪细小病毒、猪呼吸性冠状病毒、猪生殖和呼吸道病毒、猪流感、传染性肠胃炎病毒及水疱性口炎病毒，其中经热处理的菌苗的脂酶活性是热处理之前菌苗的...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·D·古德伊尔，M·J·休特，R·L·克莱布斯，N·L·欧伊恩，
申请(专利权)人：硕腾服务有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US