本发明专利技术涉及一种用于抗凝血酶III活性测定的凝血酶发色底物液、一种用于抗凝血酶III活性测定的凝血酶水溶液、一种用于确定样本中抗凝血酶III活性的方法、一种用于抗凝血酶III活性测定的试剂盒、山梨醇在制备凝血酶发色底物液中的用途以及蔗糖在发色底物法测定抗凝血酶III活性中的用途。用于抗凝血酶III活性测定的凝血酶发色底物液，含有：凝血酶发色底物；山梨醇；以及水。该凝血酶发色底物液能有效地用于测定抗凝血酶III活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生化检测领域，具体的，本专利技术涉及用于抗凝血酶III活性测定的凝血酶发色底物液、凝血酶水溶液、方法以及试剂盒，更具体的，本专利技术涉及一种用于抗凝血酶III活性测定的凝血酶发色底物液、一种用于抗凝血酶III活性测定的凝血酶水溶液、一种用于确定样本中抗凝血酶III活性的方法、一种用于抗凝血酶III活性测定的试剂盒、山梨醇在制备凝血酶发色底物液中的用途以及蔗糖在发色底物法测定抗凝血酶III活性中的用途。
技术介绍
抗凝血酶III(antithrombinIII，AT-III)是血浆生理性抑制物中最主要的抗凝物。AT-III抗凝系统是人体内抗凝血系统的重要组成部分，是体内主要的凝血酶抑制物，对其他丝氨酸蛋白酶也有抑制作用。目前检测AT-III的试剂盒主要采用两类检测方法：免疫比浊法和发色底物法。发色底物法的检测原理是采用过量的凝血酶与待测样本中的AT-III作用，形成无活性的复合物，发色底物与剩余的反应物反应能够生成产色基团，并且显色的深浅与AT-III活性成相关性，由此可以检测AT-III的活性。此方法灵敏度高，能准确反应AT-III在人体内的正常情况，并且检测方便、适用于各类自动化检测设备。然而，目前的发色底物法检测抗凝血酶III活性的手段仍有待改进。
技术实现思路
本申请是基于专利技术人对以下事实和问题的发现和认识作出的：首先，由于凝血酶和发色底物在水溶液中通常不稳定，不能长时间保存，所以通常凝血酶和发色底物是以冻干粉的形式提供的。对于冻干粉，在使用前需要进行复溶，因此，操作麻烦、瓶间差异大，且试剂复溶后质量稳定性差。专利技术人通过深入研究意外发现，通过在水溶液中采用特定的添加剂，能够有效地提高凝血酶和发色底物在水溶液中的稳定性。第二，通常待测样本例如血液、血浆中含有肝素辅助因子II(HCII)，然而，肝素辅助因子II在肝素的催化作用下会与凝血酶发生反应，造成假阳性结果，从而干扰抗凝血酶III活性的测定，造成测定结果不能真实反映生物样品中的抗凝血酶III活性，造成了假阳性率升高。另外，专利技术人在进行研究过程中发现，通常提高凝血酶稳定性和降低肝素辅助因子(HCII)对抗凝血酶III活性测定的干扰作用是难以同时实现的。专利技术人通过深入研究意外发现，蔗糖能够降低HCII对凝血酶活性的干扰，并且蔗糖能够单独作用或者与其他添加剂共同作用有效地提高凝血酶在水溶液中的稳定性。本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。有鉴于此，本专利技术提出了能够有效地用于发色底物法测定抗凝血酶III活性的凝血酶发色底物液(在本文中有时也称为“试剂R2”或者“R2试剂”)和凝血酶水溶液(在本文中有时也称为“试剂R1”或者“R1试剂”)。根据本专利技术的实施例，这些试剂均为液体试剂，可以直接使用、储存有效期长达一年，能够有效解决试剂的稳定性和瓶间差异问题，或者能够有效地降低HCII对抗凝血酶III活性检测的干扰作用。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种用于抗凝血酶III活性测定的凝血酶发色底物液。根据本专利技术的实施例，该凝血酶发色底物液含有：凝血酶发色底物；山梨醇；以及水。根据本专利技术的实施例，该凝血酶发色底物液中含有山梨醇，能够使得凝血酶发色底物稳定地溶解在水溶液中，从而避免了冻干粉剂所带来的缺陷，并且由于不需要冻干过程，因此生产工艺得到简化，生产设备简单，降低了生产成本。另外，由于凝血酶发色底物是以水溶液的形式提供的，因此，在应用于抗凝血酶III活性测定时，该凝血酶发色底物液属于即开即用型试剂，不需要复溶操作，操作简单，避免了因为复溶操作所用水的质量或者体积差异造成的结果偏差。根据本专利技术的实施例，专利技术人发现，该凝血酶发色底物液的稳定性高，瓶间一致性好，在37摄氏度下能够稳定保存15天以上，在2～8摄氏度密封储存条件下能够稳定地保存12个月以上。在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种用于抗凝血酶III活性测定的凝血酶水溶液。根据本专利技术的实施例，该凝血酶水溶液含有：凝血酶；蔗糖；肝素或其盐；以及pH缓冲剂，其中，所述凝血酶水溶液的pH为7.0～9.0。根据本专利技术的实施例，专利技术人意外地发现，通过在凝血酶水溶液中添加蔗糖，能够有效地降低肝素辅助因子(HCII)对抗凝血酶III活性测定的干扰，从而提高抗凝血酶III活性测定的准确度，降低了抗凝血酶III活性测定的假阳性率。在本专利技术的又一方面，本专利技术提出了一种用于确定样本中抗凝血酶III活性的方法。根据本专利技术的实施例，该方法包括：(1)在存在肝素和蔗糖的条件下，将所述样品与过量的凝血酶混合，以便获得测试混合物；(2)利用凝血酶发色底物，确定所述测试混合物中残留凝血酶的量；以及(3)基于所述残余凝血酶的量，确定所述样本中抗凝血酶III的活性。由于在测试混合物中存在肝素和蔗糖，因此，在利用肝素促进凝血酶与抗凝血酶III反应的同时，采用蔗糖能够能够有效地降低肝素辅助因子(HCII)对抗凝血酶III活性测定的干扰，从而提高抗凝血酶III活性测定的准确度，降低了抗凝血酶III活性测定的假阳性率。在本专利技术的另一个方面，本专利技术提出了一种用于抗凝血酶III活性测定的试剂盒。根据本专利技术的实施例，该试剂盒包括选自下列的至少之一：前面所描述的凝血酶水溶液；和前面所描述的凝血酶发色底物液。由此，利用该试剂盒，能够有效地提高抗凝血酶III活性测定的效率，有效地降低肝素辅助因子(HCII)对抗凝血酶III活性测定的干扰，从而提高抗凝血酶III活性测定的准确度，降低了抗凝血酶III活性测定的假阳性率。另外，本领域技术人员能够理解的是，针对凝血酶水溶液和凝血酶发色底物液所描述的特征和优点同样适用该试剂盒，在此不再赘述。在本专利技术的又一个方面，本专利技术提出了山梨醇在制备凝血酶发色底物液中的用途，所述凝血酶发色底物液用于抗凝血酶III测定。根据本专利技术的实施例，山梨醇可以用于制备凝血酶发色底物液，由于该凝血酶发色底物液中含有山梨醇，能够使得凝血酶发色底物稳定地溶解在水溶液中，从而避免了冻干粉剂所带来的缺陷，并且由于不需要冻干过程，因此生产工艺得到简化，生产设备简单，降低了生产成本。另外，由于凝血酶发色底物是以水溶液的形式提供的，因此，在应用于抗凝血酶III活性测定时，该凝血酶发色底物液属于即开即用型试剂，不需要复溶操作，操作简单，避免了因为复溶操作所用水的质量或者体积差异造成的结果偏差。根据本专利技术的实施例，专利技术人发现，该凝血酶发色底物液的稳定性高，瓶间一致性好，在37摄氏度下能够稳定保存15天以上，在2～8摄氏度密封储存条件下能够稳定地保存12个月以上。在本专利技术的另一个方面本专利技术提出了蔗糖在发色底物法测定抗凝血酶III活性中的用途。根据本专利技术的实施例，专利技术人意外地发现，通过在抗凝血酶III活性测定中采用蔗糖，能够有效地降低肝素辅助因子(HCII)对抗凝血酶III活性测定的干扰，从而提高抗凝血酶III活性测定的准确度，降低了抗凝血酶III活性测定的假阳性率。由此，蔗糖在发色底物法测定抗凝血酶III活性中有效地发挥了抗干扰剂的功能。附图说明图1显示了根据本专利技术一个实施例的线性测试结果。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术进行详细描述，需要说明的是，这些实施例是示例性的，旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。在本专利技术的第一方面，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于抗凝血酶III活性测定的凝血酶发色底物液，其特征在于，含有：凝血酶发色底物；山梨醇；以及水。
【技术特征摘要】
1.一种用于抗凝血酶III活性测定的凝血酶发色底物液，其特征在于，含有：凝血酶发色底物；山梨醇；以及水。2.根据权利要求1所述的凝血酶发色底物液，其特征在于，所述凝血酶发色底物为选自S2238、S-2160和ChromozymTH的至少一种，任选地，所述凝血酶发色底物液在37摄氏度下稳定保存至少15天，任选地，所述凝血酶发色底物液在2～8摄氏度下密封稳定保存至少12个月。3.根据权利要求1所述的凝血酶发色底物液，其特征在于，基于1mmol所述凝血酶发色底物，所述山梨醇的用量为1～16克，任选地，所述凝血酶发色底物的含量为5～50mmol/L，所述山梨醇的含量为30～80g/L。4.一种用于抗凝血酶III活性测定的凝血酶水溶液，其特征在于，含有：凝血酶；蔗糖；肝素或其盐；以及pH缓冲剂，任选地，所述pH缓冲剂为Tris，其中，所述凝血酶水溶液的pH为7.0～9.0。5.根据权利要求4所述的凝血酶水溶液，其特征在于，含有：10000～15000IU/L凝血酶；和10～30g/L蔗糖。6.根据权利要求5所述的凝血酶水溶液，其特征在于，进一步含有选自氨基酸、明胶、血清白蛋白和聚乙二醇的至少一种。7.根据权利要求6所述的凝血酶水溶液，其特征在于，所述凝血酶水溶液含有：10000～15000IU/L凝血酶；10～30g/L蔗糖；10～20g/L氨基酸，所述氨基酸包括甘氨酸和丙氨酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：艾峰，朱斌斌，
申请(专利权)人：上海长岛生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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