一种同时检测四环素类和磺胺类抗生素的荧光试纸条制造技术

本实用新型专利技术公开了属于荧光免疫层析检测技术领域，具体涉及一种同时检测四环素类和磺胺类抗生素的荧光试纸条。所述荧光试纸条包括PVC底板、样品垫、反应膜、吸水纸；其中，样片垫、反应膜和吸水纸均为位于PVC底板上，且样品垫和吸水纸分别位于反应膜的两侧并与反应膜接触；所述荧光试纸条使用时采用的检测试剂包括四环素类抗生素单克隆抗体‑稀土铕红色荧光标记物和磺胺类抗生素单克隆抗体‑稀土铕红色荧光标记物，且冻干于塑料试剂桶中。所述荧光试纸条具有便携性好、灵敏度高、检测时间短、可以同时检测四环素类和磺胺类抗生素等特点，在多类抗生素同时检测中发挥重要作用。

【技术实现步骤摘要】

本技术属于荧光免疫层析检测
，具体涉及一种同时检测四环素类和磺胺类抗生素的荧光试纸条。
技术介绍
抗生素具有杀死微生物的能力，在现代畜禽养殖业中，抗生素被大量使用，如四环素类抗生素用于促进畜禽生长，磺胺类抗生素用于预防和治疗腹泻等感染类疾病。由于抗生素作用效果好、见效快，许多生产者倾向于过量使用抗生素。研究表明：不合理使用抗生素药物，不仅导致动物性食品中残留抗生素，且排放的畜禽粪尿进入环境后会对环境土壤、环境水体造成抗生素污染，在我国多处饮用水源中均有抗生素检出。人体长期摄入含有抗生素的食品会破坏健康人体正常菌群的环境，导致免疫能力下降。为了长期监测食品、环境中抗生素的残留量，以符合最大残留限量标准，养殖场及环境监测部门等都在积极寻找准确、快速、可行的检测方法。四环素类抗生素(Tetracyclines)包括金霉素(chlotetracycline)、土霉素(oxytetracycline)、四环素(tetracycline)及半合成衍生物甲烯土霉素、强力霉素、二甲胺基四环素等，其结构均含并四苯基本骨架。四环素类抗生素具有广谱性，广泛应用于畜禽养殖业和临床治疗；其中，四环素、金霉素、土霉素应用最为广泛。磺胺类抗生素(Sulfonamides)指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类抗生素，种类高达数千种，且合成简单，生产量大，价格便宜。由于其具有一定毒性逐渐退出人体的临床治疗，但仍广泛应用于畜禽养殖业，是应用最广泛的兽药抗生素之一。目前对于四环素类抗生素和磺胺类抗生素的检测方法大致有：微生物法、酶联免疫法、超高效液相色谱-质谱/质谱联用法、高效毛细管电泳法、荧光光度法等。目前兽药检测对象基本均为同类抗生素药物，对于同时检测多类抗生素的方法研究少，不能满足兽药种类不断增加的现状。目前检测领域灵敏度高、可信度高的检测方法为液相色谱-质谱联用法，但该方法需要昂贵的仪器，技术成熟的实验人员，同时还需要大量复杂的前处理和长时间的检测时间，不适用于现场快速检测和大批量样品的筛选。实现快速检测和大批量样品的快速筛选对于监控食品和环境中抗生素的残留具有重要意义。
技术实现思路
本技术的目的在于提供一种同时检测四环素类和磺胺类抗生素的荧光试纸条，采取的技术方案如下：一种同时检测四环素类和磺胺类抗生素的荧光试纸条，所述荧光试纸条包括：PVC底板1、样品垫2、反应膜3、吸水纸4；其中，样片垫2、反应膜3和吸水纸4均为位于PVC底板1上，且样品垫2和吸水纸4分别位于反应膜3的两侧并与反应膜3接触；所述反应膜3上固定有第一检测线5、第二检测线6和质控线7；第一检测线5、第二检测线6和质控线7相互平行并与荧光试纸条的长向垂直，且第一检测线5靠近样品垫2一端，质控线7靠近吸水纸4一端，第二检测线6位于第一检测线5和质控线7之间。所述第一检测线5上包被有四环素类抗生素半抗原-载体蛋白偶联物，所述第二检测线6上包被有磺胺类抗生素半抗原-载体蛋白偶联物，所述质控线7上包被有羊抗鼠抗抗体。所述质控线7距反应膜3与吸水纸4相连一端的间距为2-3mm；第二检测线6距质控线7的间距为4-6mm；第一检测线5距第二检测线6的间距为4-6mm。所述的样品垫2为玻璃纤维，所述反应膜3为硝酸纤维素膜。本技术的有益效果为：1、灵敏度高：该试纸条所用的检测试剂以稀土铕红色荧光纳米材料标记抗生素抗体，能在365nm紫外光下直接观测结果，由于稀土铕红色荧光纳米材料独特的光学特性，使四环素类抗生素和磺胺类抗生素的检测相较于胶体金标记抗体检测灵敏度大大提高，最低可检测到纳克级的痕量残留。所述荧光试纸条对四环素类药物的检测灵敏度分别为四环素100ng/l、土霉素100ng/l、金霉素100ng/l，对磺胺类药物灵敏度为1000ng/l。2、操作简便快速：采用所述荧光试纸条检测样品时，只需将待测样品加入含检测试剂的塑料试剂桶中，混匀后，孵育5min，再将试纸条样品垫一端插入孵育后的检测试剂中，5min后在365nm下观察结果，检测时无需对待测样品进行稀释。3、同时检测，检测结果直观准确：检测结果以两条检测线和一条质控线是否显色作为阴性和阳性标记。第一检测线若不显色，表示待测样品中四环素类抗生素含量不低于试纸条对四环素类抗生素的最低检测限；显色则表示低于最低检测限。第二检测线若不显色，表示待测样品中磺胺类抗生素含量不低于试纸条对磺胺类抗生素的最低检测限；显色则表示低于最低检测限。因此可同时检测两类抗生素，结果直观准确，不易误判。4、易于大范围推广应用：所述荧光试纸条操作简单，满足不同领域层次人员的使用需要，如海关检疫部门、环境质量监测、食品质量监测等，具有很大的市场前景和经济、社会效益。附图说明图1为所述荧光试纸条的结构示意图。图2为所述荧光试纸条的俯视图。图3为所示荧光试纸条对待测样品的检测结果示意图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本技术做进一步描述，但本技术的保护范围不限于此。一种同时检测四环素类和磺胺类抗生素的荧光试纸条，所述荧光试纸条包括：PVC底板1、样品垫2、反应膜3、吸水纸4；其中，样片垫2、反应膜3和吸水纸4均位于PVC底板1上，且样品垫2和吸水纸4分别位于反应膜3的两侧并与反应膜3接触；所述反应膜3上固定有第一检测线5、第二检测线6和质控线7；第一检测线5、第二检测线6和质控线7相互平行并与荧光试纸条的长向垂直，且第一检测线5靠近样品垫2一端，质控线7靠近吸水纸4一端，第二检测线6位于第一检测线5和质控线7之间；所述第一检测线5上包被有四环素类抗生素半抗原-载体蛋白偶联物，所述第二检测线6上包被有磺胺类抗生素半抗原-载体蛋白偶联物，所述质控线7上包被有羊抗鼠抗抗体。所述质控线7距反应膜3与吸水纸4相连一端的间距为2-3mm；第二检测线6距质控线7的间距为4-6mm；第一检测线5距第二检测线6的间距为4-6mm。所述的样品垫2为玻璃纤维，所述反应膜为硝酸纤维素膜。实施例1：检测试剂单克隆抗体-稀土铕红色荧光标记物的制备该荧光试纸条所用到的检测试剂包括四环素类抗生素单克隆抗体-稀土铕红色荧光标记物和磺胺类抗生素单克隆抗体-稀土铕红色荧光标记物，制备方法为：在0.1mol/L的NHS和EDC的PBS缓冲溶液中加入约100μL的稀土铕红色荧光微球，然后分别加入磺胺类单克隆抗体和四环素类单克隆抗体，室温下搅拌4小时，加入BSA至其终浓度为1％，静置10min，离心后用PBS缓冲溶液洗涤两次，再用PBS溶液重悬，获得四环素类抗生素单克隆抗体-稀土铕红色荧光标记物和磺胺类抗生素单克隆抗体-稀土铕红色荧光标记物，置4用。实施例2：同时检测四环素类和磺胺类抗生素的荧光试纸条的组装1)样品垫的制备将玻璃纤维膜切成条状后，在含1％BSA，0.5％吐温20的0.02MPBS中浸透，60℃干燥1h，储存在干燥器中备用。2)反应膜的制备用PBS缓冲液将磺胺类抗生素半抗原-载体蛋白偶联物和四环素类抗生素半抗原-载体蛋白偶联物均稀释到0.4mg/ml，将羊抗鼠抗体稀释到0.63mg/ml；硝酸纤维素膜切条后，在第一检测线上包被2μL已稀释的四环素类抗生素半抗原-载体蛋白偶联物，在第二检测线上包被2μL磺胺类抗生素半抗原-载体蛋白偶联本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测四环素类和磺胺类抗生素的荧光试纸条，其特征在于，所述荧光试纸条包括：PVC底板(1)、样品垫(2)、反应膜(3)、吸水纸(4)；其中，样品垫(2)、反应膜(3)和吸水纸(4)均位于PVC底板(1)上，且样品垫(2)和吸水纸(4)分别位于反应膜(3)的两侧并与反应膜(3)接触；所述反应膜(3)上固定有第一检测线(5)、第二检测线(6)和质控线(7)；第一检测线(5)、第二检测线(6)和质控线(7)相互平行并与荧光试纸条的长向垂直，且第一检测线(5)靠近样品垫(2)一端，质控线(7)靠近吸水纸(4)一端，第二检测线(6)位于第一检测线(5)和质控线(7)之间。

【技术特征摘要】
1.一种同时检测四环素类和磺胺类抗生素的荧光试纸条，其特征在于，所述荧光试纸条包括：PVC底板(1)、样品垫(2)、反应膜(3)、吸水纸(4)；其中，样品垫(2)、反应膜(3)和吸水纸(4)均位于PVC底板(1)上，且样品垫(2)和吸水纸(4)分别位于反应膜(3)的两侧并与反应膜(3)接触；所述反应膜(3)上固定有第一检测线(5)、第二检测线(6)和质控线(7)；第一检测线(5)、第二检测线(6)和质控线(7)相互平行并与荧光试纸条的长向垂直，且第一检测线(5)靠近样品垫(2)一端，质控线(7)靠近吸水纸(4)一端，第二检测线(6)位于第一检测线(5)和质控线(7)之间。2.根据权利要求1所述的一种同时检测四环...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙英，陈俊豪，蒲承君，宫晓燕，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：新型
国别省市：北京;11