二萜类有效成分的提取方法技术

本发明专利技术公开一种提取和分离蕨类植物中二萜类有效成分的方法，它采用超临界二氧化碳萃取方法、以乙醇为夹带剂进行提取，继以大孔吸附树脂分离，获得具有药用价值的二萜类活性物质。该方法效率高、成本低，不使用有毒有害溶剂，环境污染程度低，易于工业化。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种从凤尾蕨科植物(特别是半边旗)中提取和分离二萜类有效成份的方法，特别涉及一种超临界二氧化碳萃取和大孔吸附树脂分离蕨类植物中二萜类有效成份的方法。
技术介绍
研究表明，蕨类植物例如凤尾蕨科植物(特别是半边旗中)有以下二种结构式的二萜类化合物，这二种化合物是具有抗癌等药用有效成份，参见ZL95119380.5；张晓，崔燎，田中信寿，梁念慈，半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究，中国药学杂志，1997年1月第32卷第1期，第37-38页；张晓，李金华，何承伟，梁念慈，田中信寿，半边旗中二萜类化合物的植化及抗肿瘤活性初步研究，中国药学杂志1999年8月第34卷第8期，第571-573页。化合物1 化学名称(英文)ent-7α，11α-dihydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19，6β-olide化学名称(中文)对映-7α，11α-二羟基-15-氧代-16-烯-拷利酸内酯(19，6β)化合物2 化学名称(英文)ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-olicacid化学名称(中文)对映-11α-羟基-15-氧代-16-烯-19-拷利酸ZL95119380.5采用了乙醇提取→活性炭吸附→硅胶柱层析→三氯甲烷+甲醇(90∶2)洗脱分离的方法，提取和分离半边旗有效成份。该法为实验室研究方法，成本高、效率低，且三氯甲烷和甲醇为有毒有害溶剂，难以工业化。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种效率高、成本低，不使用有毒有害溶剂，环境污染程度低，易于工业化的蕨类植物例如凤尾蕨科植物(特别是半边旗)中二萜类有效成份的提取方法。本专利技术采用超临界二氧化碳萃取方法、以乙醇为夹带剂进行提取，继以大孔吸附树脂分离，获得具有医用疗效的二萜类活性物质。本专利技术方法适合用于从蕨科植物，优选凤尾蕨科植物，特别是半边旗提取和分离具有药用价值的二萜类有效成分例如化合物1和化合物2。以半边旗为例，本专利技术的具体实施方案如下 1.超临界二氧化碳萃取取半边旗的全草或地上部分，晾干，打成20目-40目的粉状，将药粉投入超临界二氧化碳萃取釜中。超临界二氧化碳萃取条件40℃-60℃、25-35MPa、以超临界二氧化碳流量的5％-15％(v/v)加入夹带剂乙醇。二级分离釜分离第一级分离釜40℃-50℃、5.5-8MPa；第二级分离釜室温、5.5-8MPa。按以上条件萃取3h、超临界二氧化碳流体萃取体积不低于萃取釜体积的8倍。收集、合并两级分离釜分离出的萃取液。2.大孔树脂分离 萃取液减压回收乙醇至几乎无馏出液、得到的墨绿色粘稠物。该墨绿色粘稠物以石油醚除去低极性脂溶性物质，然后制成30％(v/v)乙醇水混悬液，以1BV/h的流速流过预处理好并以水平衡的大孔吸附树脂柱，至有色层约1/3柱体积。用20-30％(v/v)乙醇以3BV/h流速洗脱3倍柱体积；然后用30％-45％(v/v)乙醇以3BV/h流速梯度洗脱约3倍柱体积、在薄层层析检测下收集含有化合物1组份的洗脱液；再用45％-75％(v/v)乙醇以3BV/h流速梯度洗脱约3倍柱体积、在薄层层析检测下收集含有化合物2组份的洗脱液。3.含有化合物1组份的洗脱液减压回收乙醇至几乎无馏出，放冷、得水和棕色半固体析出物的混合体。分出水、得到富集化合物1的棕色半固体。4.含有化合物2组份的洗脱液减压回收乙醇至几乎无馏出，放冷、得水和棕色半固体析出物的混合体。分出棕色半固体析出物，以乙醇重结晶，得到白色或带微黄色的半边旗二萜酸结晶，其中化合物2含量为17％-60％(因产地、季节而不同)。在上述实施方案中，步骤3和步骤4得到的棕色半固体富集了具有医用疗效的二萜类活性物质化合物1和化合物2，可用于中药三类新药的研究与开发以及其他医药用途；步骤4得到白色的二萜酸结晶，其中化合物2含量可达到或高于50％，可用于中药二类新药的研究与开发以及其他医药用途。本专利技术采用的超临界二氧化碳萃取具有萃取效率高、处理容量大、通过萃取参数的设定可获得一定的选择性、二氧化碳可循环使用、不污染环境以及条件温和、有利于保留产物的天然活性等特点；大孔吸附树脂分离具有处理量大、主要以水和乙醇作溶剂、经济简便、易于工业化等特点。本专利技术的超临界二氧化碳萃取方法或大孔吸附树脂吸附分离技术还可单独或与其它方法组合用于提取分离具有医用疗效的二萜类活性物质化合物1和化合物2。实施例1取半边旗地上部分，晾干，打成20目-40目的粉状。将药粉7kg投入24L的超临界二氧化碳萃取釜中，超临界二氧化碳萃取条件55℃，25MPa，超临界二氧化碳流体流量80L/h，以超临界二氧化碳流量的10％(v/v)加入夹带剂无水乙醇。二级分离器分离第一级分离釜40℃、8MPa；第二级分离釜室温、6MPa。按以上条件萃取3h，收集、合并两级分离釜分离出的萃取液。萃取液减压回收乙醇至几乎无馏出液，得墨绿色粘稠物。以石油醚除去墨绿色粘稠物中的脂溶性物质，然后制成30％(v/v)乙醇水混悬液。该液以1BV/h的流速流过预处理好并以水平衡的D101型大孔吸附树脂柱(直径5cm、长100cm)，至有色层约1/3柱体积。用35％(v/v)乙醇以3BV/h流速洗脱3倍柱体积；然后用30％-45％(v/v)乙醇以3BV/h流速梯度洗脱约3倍柱体积、在薄层层析检测下收集含有化合物1组份的洗脱液；再用45％-75％(v/v)乙醇以3BV/h流速梯度洗脱约3倍柱体积、在薄层层析检测下收集含有化合物2组份的洗脱液。含有化合物1组份的洗脱液减压回收乙醇至几乎无馏出，放冷、得水和棕色半固体析出物的混合体。分出水，得到富集化合物1的棕色半固体。含有化合物2组份的洗脱液减压回收乙醇至几乎无馏出，放冷、得水和棕色半固体析出物的混合体。分出棕色半固体析出物，以乙醇重结晶。分离出结晶，并以少量的乙醇分次洗涤结晶至洗出液无色，得到白色的二萜酸结晶，其中化合物2含量为57％。实施例2取半边旗地上部分，晾干，打成20目-40目的粉状。取相同量药粉分别投入超临界二氧化碳萃取釜中，按表中列出的超临界二氧化碳萃取条件进行萃取，以乙醇为夹带剂，添乙醇比例以乙醇与超临界二氧化碳的体积比计，超临界二氧化碳流体萃取体积为萃取釜体积的8倍。得到的萃取产物中化合物化合物1或化合物2相对于药粉含量列入表中样品序号温度压力添加乙醇比例药粉有效成份含量(g/kg) ℃ MPa(v/v) 化合物1 化合物21 40 30 10 0.0110 0.3122 50 35 5 0.0128 0.3603 60 25 15 0.0154 0.430权利要求1.一种提取和分离蕨类植物中二萜类有效成份的方法，其特征在于，采用超临界二氧化碳萃取方法、以乙醇为夹带剂进行提取，继以大孔吸附树脂吸附、35％-70％乙醇水溶液梯度洗脱分离，获得二萜类活性物质。2.根据权利要求1所述的提取和分离蕨类植物中二萜类有效成份的方法，其特征在于，超临界二氧化碳萃取的条件为萃取压力25-35MPa、萃取温度40-60℃、超临界二氧化碳流量与夹带剂乙醇的流量比为100∶5-15。3.根据权利要求1或2所述的提取和分离蕨类植物中二萜类有效成份的方法，其特征在于，超临界二氧化碳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取和分离蕨类植物中二萜类有效成份的方法，其特征在于，采用超临界二氧化碳萃取方法、以乙醇为夹带剂进行提取，继以大孔吸附树脂吸附、３５％－７０％乙醇水溶液梯度洗脱分离，获得二萜类活性物质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：邓亦峰，梁念慈，梁统，
申请(专利权)人：广东医学院，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]