一种TPMT基因多态性检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种TPMT基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括盒体1、海绵衬垫2，所述的海绵衬垫2置于盒体1内，海绵衬垫2上设有多个容器孔并装有多个装有检测试剂的试剂管，分别为装有野生型阳性对照的试剂管3、装有突变型阳性对照的试剂管4、装有杂合子阳性对照的试剂管5、装有阴性对照的试剂管6、装有G238C位点基因多态性检测反应液的试剂管7、装有G460A位点基因多态性检测反应液的试剂管8、装有A719G位点基因多态性检测反应液的试剂管9。该试剂盒可同时用于肿瘤化疗药物相关基因TPMTG238C、G460A、A719G三个位点单核苷酸多态性的检测，相较于现有试剂盒体积小，制造容易，操作简单，便于运输和使用。

【技术实现步骤摘要】

本技术属于生物
，涉及一种基因多态性检测试剂盒，具体涉及一种TPMT基因多态性检测试剂盒.
技术介绍
嘌呤类药物是常用的肿瘤化疗药物之一，包括6-硫鸟嘌呤、6-巯基嘌呤和巯唑嘌呤。其药理学机制主要是在体内先经过酶的催化变成硫代嘌呤核苷酸后，阻止肌苷酸转变为腺核苷酸及鸟核苷酸，干扰嘌呤代谢，竞争性抑制RNA和DNA的合成，进而抑制细胞增殖。TPMT可使硫代嘌呤核苷酸发生甲基化，进而使其失去活性，从而使正常细胞免受过多活性代谢物的损害。因此TPMT在嘌呤类药物的解毒过程中有着重要作用。TPMT酶活性降低或缺乏与其等位基因多态性密切相关，表现为常染色体共显性遗传特征，TPMT基因G238C、G460A、A719G三个SNPs最为常见，且G238C、G460A、A719G三个SNPs发生突变后均会使TPMT酶活性显著降低或几乎没有活性。因此，研发一种快速简单有效的检测TPMT基因G238C、G460A、A719G三个SNPs位点基因型的试剂盒显得尤为重要。
技术实现思路
本技术提供一种采用荧光探针PCR技术，同时检测肿瘤化疗药物相关基因TPMT的G238C、G460A、A719G三个SNPs位点多态性的试剂盒，要解决的技术问题为目前市场上针对TPMT基因多态性检测成本高、耗时、特异性不强且操作复杂的问题，本技术能较好的应用于TPMT基因G238C、G460A、A719G三个位点单核苷酸多态性检测，体积小，操作简单，便于运输携带和使用。本技术提供的一种TPMT基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括盒体1、海绵衬垫2，所述的海绵衬垫2置于盒体1内，海绵衬垫2上设有多个容器孔并装有多个装有检测试剂的试剂管，分别为装有野生型阳性对照的试剂管3、装有突变型阳性对照的试剂管4、装有杂合子阳性对照的试剂管5、装有阴性对照的试剂管6、装有G238C位点基因多态性检测反应液的试剂管7、装有G460A位点基因多态性检测反应液的试剂管8、装有A719G位点基因多态性检测反应液的试剂管9。进一步的，所述的容器孔较佳的为7个，容器孔在所述的海绵衬垫上分3排排列，上述的装有野生型阳性对照、突变型阳性对照、杂合子阳性对照、阴性对照的试剂管3、4、5、6均为1.5ml试剂管，装有G238C、G460A、A719G三个位点基因多态性检测反应液的试剂管7、8、9均为2ml试剂管。上述的试剂管7、试剂管8、试剂管9中装有的基因多态性检测反应液主要成分包含：包括TaqDNA聚合酶、dUTPs、尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)、特异性引物和探针及MgCL2。上述的TaqDNA聚合酶为本领域常规TaqDNA聚合酶，生产厂商较佳的包括TAKARA或Promega，所述的特异性引物和探针优选的生产厂商为LIFE或TAKARA，所述的dNTPs、MgCL2、尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)均为常规dUTPs、MgCL2、尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)。所述的阳性对照包括野生型阳性对照、突变型阳性对照、杂合子阳性对照，所述的野生型阳性对照为分别含有G238C、G460A、A719G三个位点的野生型纯合子基因序列及其多态性检测上游和下游引物及引物之间的线粒体DNA序列的质粒，突变型阳性对照为分别含有G238C、G460A、A719G三个位点的突变型纯合子基因及其多态性检测上游和下游引物及引物之间的线粒体DNA序列的质粒，杂合子阳性对照为等比例混合的野生型阳性对照质粒和突变型阳性对照质粒。所述的G238C位点基因多态性检测引物包括：上游引物，其序列为：5'-TCTTTGAAACCCTATGAACCTGAAT-3'。下游引物，其序列为：5'-TTGTATCCCAAGTTCACTGATTTCC-3'。所述的G460A位点基因多态性检测引物包括：上游引物，其序列为：5'-ATGTTTTTTCTCTTTCTGGTAGGAC-3'。下游引物，其序列为：5'-TTCCAAACATAATAACCTATTTCAA-3'。所述的A719G位点基因多态性检测引物包括：上游引物，其序列为：5'-ATCCCTGATGTCATTCTTCATAGTA-3'。下游引物，其序列为：5'-CATCCATTACATTTTCAGGCTTTAG-3'。所述的G238C位点基因多态性检测探针包括：野生型检测探针，其序列为：5'-TTATGCAGGTTTGCAGACCGGGGA-3'，其5'端标记物为JOE，3'标记物为BHQ1。突变型检测探针，其序列为：5'-TTATGCAGGTTTCCAGACCGGGGA-3'，其5'端标记物为CY5，3'标记物为BHQ2。所述的G460A位点基因多态性检测探针包括：野生型检测探针，其序列为：5'-TGGGATAGAGGAGCATTAGTTGCCATT-3'，其5'端标记物为ROX，3'标记物为BHQ1。突变型检测探针，其序列为：5'-TGGGATAGAGGAACATTAGTTGCCATT-3'，其5'端标记物为TAMRA，3'标记物为BHQ2。所述的A719G位点基因多态性检测探针包括：野生型检测探针，其序列为：5'-TGAAAAGTTATATCTACTTACAGAAAAGTAAAT-3'，其5'端标记物为FAM，3'标记物为MGB。突变型检测探针，其序列为：5'-TGAAAAGTTATGTCTACTTACAGAAAAGTAAAT-3'，其5'端标记物为VIC，3'标记物为MGB。本技术较佳的实施方法为：1.试剂准备：将试剂盒中3管检测反应液分别取35μL与阳性对照、阴性对照及待检样本的基因组DNA15μL混匀待扩增。2.扩增检测：进行PCR扩增检测。3.检测结果分析。优选地，所述的PCR扩增检测步骤包括：1.荧光通道选择：G238C位点基因多态性检测反应液对应选择JOE和CY52个检测通道，G460A位点基因多态性检测反应液对应选择ROX和TAMRA2个检测通道，A719G位点基因多态性检测反应液对应选择FAM和VIC2个检测通道，参比荧光设置为none。2.反应条件设定：反应体积设定为50μL，UNG酶反应条件为37℃加热5分钟，预变性条件为95℃加热5分钟，变性条件为95℃，15秒，以及退火、延伸及检测荧光条件为60℃，60秒，共40个循环。应用本技术的有益效果为：本技术提供的TPMT基因G238C、G460A、A719G三个位点多态性扩增检测试剂盒，通过使用优化设计的特异性检测引物和探针及PCR扩增反应条件，有效克服了传统检测方法步骤繁琐，耗时，假阳性和假阴性易出现的缺点，大大提高TPMT基因G238C、G460A、A719G三个位点多态性检测的特异性。本技术提供的适用于TPMT基因G238C、G460A、A719G三个位点多态性扩增检测的试剂盒设计合理，内部结构及各离心管排列有序，大小适宜，便于运输和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种TPMT基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括盒体1、海绵衬垫2，所述的海绵衬垫2置于盒体1内，海绵衬垫2上设有多个容器孔并装有多个装有检测试剂的试剂管，分别为装有野生型阳性对照的试剂管3、装有突变型阳性对照的试剂管4、装有杂合子阳性对照的试剂管5、装有阴性对照的试剂管6、装有G238C位点基因多态性检测反应液的试剂管7、装有G460A位点基因多态性检测反应液的试剂管8、装有A719G位点基因多态性检测反应液的试剂管9。

【技术特征摘要】
1.一种TPMT基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括盒体
1、海绵衬垫2，所述的海绵衬垫2置于盒体1内，海绵衬垫2上设有多个容器
孔并装有多个装有检测试剂的试剂管，分别为装有野生型阳性对照的试剂管3、
装有突变型阳性对照的试剂管4、装有杂合子阳性对照的试剂管5、装有阴性对
照的试剂管6、装有G238C位点基因多态性检测反应液的试剂管7、装有G460A
位点基因多态性检测反应液的试剂管8、装有A719G位点基因多态性检测反应液
的试剂管9。
2.根据权利要求1所述的一种TPMT基因多态性检测试...

【专利技术属性】
技术研发人员：卿志荣，郑帮，
申请(专利权)人：上海睿玻生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：上海;31