抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体，包括重组轻链和重组重链；所述重组轻链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的轻链可变区与人IgG2的轻链恒定区，所述重组重链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的重链可变区与人IgG2的重链恒定区。与传统的鼠源性抗体相比，这种抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体通过人源化改造，保留了亲本抗体的识别抗原的特异性和亲和力，而且避免了鼠源性抗体有可能存在的假阳反应性。因此，从临床诊断应用方面来看，这种抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体比传统鼠源性抗体更具有应用价值。本发明专利技术还公开了上述抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体的制备方法和应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫检测领域，尤其是涉及一种抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
流感病毒属正粘病毒科，系RNA病毒。病毒内部的核心由单链核糖核酸及核蛋白(NP)组成，根据核蛋白的抗原性不同可分为A(甲)、B(乙)、C(丙)三型，每型又可区分为不同亚型。甲型变异较快，每2年～3年可发生一次，乙型变异较慢。当抗原发生较大的变异时，与前次流行株完全不同，是抗原的质变，称为抗原株变，此时产生了新的亚型。由于人群对新的亚型缺乏抗体，因此常可引起大的流行。病毒的核蛋白(NP)是保守的结构蛋白，在病毒进化过程中变异率很低。同样，对流感病毒NP的研究也已经证明了其结构的保守性。目前多种RNA病毒(如新城疫病毒，狂犬病毒，水疱性口炎病毒，麻疹病毒等)的核蛋白都已作为抗原用于ELISA诊断试剂盒中。抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体可用于分析抗原的细微结构及检验抗原抗体未知的结构关系生产出针对复杂生物混合物中的特定分子的抗体，可用于分离、分析及纯化该特定分子抗原；其试剂可用于临床诊断和治疗。长期以来，鼠源性的抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体被广泛的应用于科研、临床诊断和治疗，但是在检测过程中使用鼠源性的抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体也存在一些弊端，特别是在双抗体夹心法的检测试剂中同时使用两个鼠源性单抗的时候，很容易出现假阳，导致这些假阳的原因很多，也很难分析，例如血液样本中有可能存在HAMA效应，而在一些咽拭子或鼻拭子样本中也有可能存在一些能跟鼠抗结合的成分，所以如何能避开两个抗体都是鼠源性的情况，这类问题就能很好的解决，而目前重组抗体工程里面对抗体的人源化改造已经相当成熟，同时人源化改造的抗体还具有可以用于预防和治疗的潜能，因此，对鼠源性抗体进行人源化改造是非常必要的。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种人源化改造的抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体及其制备方法和应用。一种抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体，包括重组轻链和重组重链；所述重组轻链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的轻链可变区与人IgG2的轻链恒定区，所述重组重链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的重链可变区与人IgG2的重链恒定区。一种上述的抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体的制备方法，包括如下步骤：将抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的轻链可变区的表达片段插入到含有人IgG2的轻链恒定区的表达基因的表达载体中，得到第一表达载体；将抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的重链可变区的表达片段插入到含有人IgG2的重链恒定区的表达基因的表达载体中，得到第二表达载体；将所述第一表达载体和所述第二表达载体转染到同一宿主细胞中；以及诱导所述宿主细胞表达并回收得到所述抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体。上述的抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体在制备甲型流感病毒检测试剂或甲型流感病毒检测仪器中的应用。一种甲型流感病毒的检测试剂盒，包括检测试纸，所述检测试纸包括上述的抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体。这种抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体包括重组轻链和重组重链，重组轻链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的轻链可变区与人IgG2的轻链恒定区，重组重链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的重链可变区与人IgG2的重链恒定区。与传统的鼠源性抗体相比，这种抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体通过人源化改造，保留了亲本抗体的识别抗原的特异性和亲和力，而且避免了鼠源性抗体有可能存在的假阳反应性。因此，从临床诊断应用方面来看，这种抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体比传统鼠源性抗体更具有应用价值。附图说明图1为实施例1中抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体的制备方法的流程图；图2为一实施方式的甲型流感病毒的检测试剂盒的示意图；图3为如图2所示的甲型流感病毒的检测试剂盒的检测试纸的正面示意图；图4为如图2所示的甲型流感病毒的检测试剂盒的检测试纸的纵截面示意图；图5为以杂交瘤细胞FLUA-1A5提取的RNA反转录后得到的cDNA为模板进行PCR得到的产物的琼脂糖凝胶电泳，M为DL2000DNAMarker；图6为pFP-IgCK质粒的图谱；图7为pFP-IgCH质粒的图谱；图8为用VL和VH特异的引物扩增的VL(390bp)和VH(402bp)基因片段，M为DL2000DNAMarker；图9为重组抗体用proteinG亲和层析柱纯化时的穿透峰和吸收峰；图10为重组抗体纯化后SDS-PAGE分析，a为鼠源抗体，b为重组抗体，M为ProteinMarker。具体实施方式下面主要结合附图及具体实施例对可分泌抗B型肝炎病毒表面抗原抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体的杂交瘤细胞、抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体及应用作进一步详细的说明。一实施方式的抗甲型流感病毒核蛋白(NP蛋白)的重组抗体，包括重组轻链和重组重链。重组轻链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体(mAb)的轻链可变区(L链V区，VL)与人IgG2的轻链恒定区(L链C区，CL；k链C区，Ck；等)。重组重链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的重链可变区(H链V区，VH)与人IgG2的重链恒定区(H链C区，CH)。其中，上述抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体由保藏号为CCTCCC2015227的杂交瘤细胞产生，该杂交瘤细胞于2015年12月17日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国.武汉.武汉大学，分类命名：杂交瘤细胞株FLUA-1A5。具体的，抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的轻链可变区的序列如SEQIDNO.1所示，人IgG2的轻链恒定区的序列如SEQIDNO.2所示。具体的，抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的重链可变区的序列如SEQIDNO.3所示，人IgG2的重链恒定区的序列如SEQIDNO.4所示。这种抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体包括重组轻链和重组重链，重组轻链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的轻链可变区与人IgG2的轻链恒定区，重组重链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的重链可变区与人IgG2的重链恒定区。与传统的鼠源性抗体相比，这种抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体通过人源化改造，保留了亲本抗体的识别抗原的特异性和亲和力，而且避免了鼠源性抗体有可能存在的假阳反应性。因此，从临床诊断应用方面来看，这种抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体比传统鼠源性抗体更具有应用价值。本专利技术还提供了如图1所示的上述抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体的制备方法，包括如下步骤：S10、将抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的轻链可变区的表达片段插入到含有人IgG2的轻链恒定区的表达基因的表达载体中，得到第一表达载体。抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的轻链可变区的表达片段包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的信号肽(SignalPeptide，SP)序列、框架区(frameworkRegion，FR)序列以及互补决定区(complementarydeterminingregion本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体，其特征在于，包括重组轻链和重组重链；所述重组轻链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的轻链可变区与人IgG2的轻链恒定区，所述重组重链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的重链可变区与人IgG2的重链恒定区。

【技术特征摘要】
1.一种抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体，其特征在于，包括重组轻链和
重组重链；
所述重组轻链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的轻链可变区与人
IgG2的轻链恒定区，所述重组重链包括抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的重
链可变区与人IgG2的重链恒定区。
2.如权利要求1所述的抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体，其特征在于，
所述抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的轻链可变区的序列如SEQIDNO.1所
示，所述人IgG2的轻链恒定区的序列如SEQIDNO.2所示。
3.如权利要求1所述的抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体，其特征在于，
所述抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的重链可变区的序列如SEQIDNO.3所
示，所述人IgG2的重链恒定区的序列如SEQIDNO.4所示。
4.一种如权利要求1～3中任一项所述的抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体
的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的轻链可变区的表达片段插入到含有
人IgG2的轻链恒定区的表达基因的表达载体中，得到第一表达载体；
将抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的重链可变区的表达片段插入到含有
人IgG2的重链恒定区的表达基因的表达载体中，得到第二表达载体；
将所述第一表达载体和所述第二表达载体转染到同一宿主细胞中；以及
诱导所述宿主细胞表达并回收得到所述抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体。
5.如权利要求4所述的抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体的制备方法，其
特征在于，所述抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的轻链可变区的表达片段的
序列如SEQIDNO.5所示，所述人IgG2的轻链恒定区的表达基因的序列如SEQ
IDNO.6所示。
6.如权利要求4所述的抗甲型流感病毒核蛋白的重组抗体的制备方法，其
特征在于，所述抗甲型流感病毒核蛋白的鼠源抗体的重链可变区的表达片段的
序列如SEQIDNO.7所示，所述人IgG2的重链恒定区的表达基因的序列如SEQ<...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨耿周，刘莉莉，魏钟杰，龚春喜，
申请(专利权)人：菲鹏生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44