一种金黄色葡萄球菌抑制剂制造技术

本发明专利技术提供了一种金黄色葡萄球菌抑制剂的制备方法，其特征是利用芳香醛类食用香料。首先采用滤纸片法对我国已经批准允许使用的30种芳香醛类食用香料对金黄色葡萄球菌的抑菌活性进行了鉴定，采用二倍稀释法对它们的最小抑菌浓度进行了测定，筛选出7种抑制金黄色葡萄球菌效果较好的芳香醛类食用香料；然后分别考察了温度、紫外线照射、pH值对这7种香料抑菌稳定性的影响，从中进一步筛选出了4种抑菌稳定的香料；通过对这四种香料进行复配，发现当2-羟基苯甲醛、苯丙醛、肉桂醛和3-(2-呋喃基)丙烯醛的质量比为1∶2∶8∶1时对金黄色葡萄球菌的抑制效果好，其最小抑菌浓度为0.117mg/mL。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种食品用防腐剂，更具体的说是一种由芳香醛类食用香料复配而得的金黄色葡萄球菌抑制剂，可用于抑制肉制品、汤、肉味香精等食品与食品原料中的金黄色葡萄球菌。
技术介绍
金黄色葡萄球菌在自然界中广泛存在，是一种球状细菌，在显微镜下观察发现它们聚集成簇，像葡萄一样。不管有没有氧气的存在，它们都可以生长。由于金黄色葡萄球菌能够分泌毒素，而这些毒素一旦达到一定剂量，且进入人的胃肠道，可引起恶心、呕吐、胃痉挛和腹泻等症状。这种中毒是急性的，一般在1到6小时之内发作，最快的甚至半小时就出现症状。有文献报道，1997年，美国佛罗里达有一个125人的聚会中有31人被感染，症状持续了大约24小时；原因是聚会所吃的8公斤火腿在烤好之后，用了一个没有充分洗干净的刀来切，切好的火腿片没有及时充分地防腐保鲜，导致了金黄色葡萄球菌大量增殖从而产生了大量的毒素。2000年6月底到7月中，日本有14555人被感染，感染源来自日本当时最大的牛奶生产商雪印乳业，事故原因是生产过程中的卫生条件很差，金黄色葡萄球菌大量增殖产生了大量的毒素。2002年，澳大利亚有一个600人参加的公众活动，许多人在现场吃饭，结果200多人出现了恶心、呕吐、胃痉挛的症状；那些饭菜是前一天准备的，第二天热了之后提供给就餐者；根据症状及食物，推测也是金黄色葡萄球菌感染所致。2011年在我国个别品牌的风味馒头、花生糕、速冻水饺等食品中检出金黄色葡萄球菌超标。由于金黄色葡萄球菌在自然界中广泛存在，其分泌的毒素危害人的健康，因此食品中对金黄色葡萄球菌有着严格的限量要求。为了防止食品在储存过程中被污染，延长食品的保存时间，食品加工过程中常使用防腐剂。我国食品添加剂使用标准(GB2760-2011)中批准允许使用的防腐剂有30多种，包括化学合成的防腐剂和天然防腐剂。由于有的天然防腐剂来源有限和提取工艺成本较高，难于推广；有的天然防腐剂含有大量蜡、萜烯及有害成分，使其应用受限；目前我国批准允许使用的防腐剂中仍以化学防腐剂为主，且品种较少，开发新型效果好而又无毒害的防腐剂是我国食品防腐剂行业亟待解决的问题。专利技术人通过对我国食品添加剂使用标准(GB2760-2011)中已经批准允许使用的30种芳香醛类食用香料的防腐抑菌作用进行研究，从中筛选出了四种抑制金黄色葡萄球菌效果较好的芳香醛类食用香料，对它们进行复配，得到了一种金黄色葡萄球菌抑制剂。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是采用国内已经批准允许使用的芳香醛类食用香料，提供一种金黄色葡萄球菌抑制剂。首先吸取经过活化的金黄色葡萄球菌液接入营养肉汤培养基中，置于恒温振荡培养箱中振荡培养至对数期作为原菌液；吸取1mL原菌液用无菌生理盐水倍比稀释成104-105cfu/mL的菌悬液待用。然后用体积浓度为2％的吐温-80水溶液作溶剂，将30种芳香醛类食用香料配成浓度为0.1g/mL的稀释液备用；这30种芳香醛类食用香料分别是苯甲醛、邻甲基苯甲醛、对甲基苯甲醛、间甲基苯甲醛、4-乙基苯甲醛、对异丙基苯甲醛、对甲氧基苯甲醛、邻甲氧基苯甲醛、3，4-二甲氧基苯甲醛、2-羟基苯甲醛、4-羟基苯甲醛、4-羟基-3，5-二甲氧基苯甲醛、洋茉莉醛、香兰素、乙基香兰素、苯乙醛、2-苯基丙醛、苯丙醛、兔耳草醛、肉桂醛、α-甲基肉桂醛、α-己基肉桂醛、α-戊基肉桂醛、3-(2-呋喃基)丙烯醛、2-甲基-3(2-呋喃基)丙烯醛、2-苯基-2-丁烯醛、4-甲基-2-苯基-2-戊烯醛、5-甲基-2-苯基-2-己烯醛、糠醛、5-甲基糠醛。在无菌条件下，向无菌培养皿中倾倒约25-30mL的灭菌固体培养基，静置待其冷却，制备固体平板。吸取100μL稀释好的菌悬液，按照无菌操作步骤，接入固体平板培养基中均匀涂布。使用打孔器将新华1号定性滤纸制成直径为7mm的药片，高温灭菌后贴在含菌平板上，每皿贴3片，任意两片药片圆心距不小于24mm。向每片药片上滴加5μL浓度为0.1g/mL上述香料溶液，另设两组平行实验组。药片上滴加2％的吐温-80水溶液和无菌水的含菌固体平板作为阳性对照组，以未接入菌悬液的固体平板作为阴性对照组。将实验组和对照组平板放入恒温恒湿培养箱中，37℃下倒置培养24小时，测定滤纸片的抑菌圈直径，结果取重复实验平均值，根据抑菌圈直径的大小比较判断30种芳香醛类食用香料抑菌能力的强弱。这30种芳香醛类食用香料的抑菌圈直径大小见表1。表130种芳香醛类食用香料的抑菌圈直径注：a.结果表示为：抑菌圈直径平均值±标准方差(3组平行实验组)b.滤纸片直径包括在测量数据内，如果抑菌圈直径小于7mm定义为无抑菌圈，记为0由所得结果可以知道肉桂醛、α-甲基肉桂醛、邻甲氧基苯甲醛、2-羟基苯甲醛、3-(2-呋喃基)丙烯醛、2-苯基-2-丁烯醛、苯丙醛、4-甲基-2-苯基-2-戊烯醛、4-乙基苯甲醛、苯乙醛10种芳香醛类食用香料对金黄色葡萄球菌的抑菌能力很强，抑菌圈直径均大于23mm，表现为非常敏感；苯甲醛、邻甲基苯甲醛、对甲基苯甲醛、间甲基苯甲醛等14种芳香醛类香料的抑菌能力较强，抑菌直径均在12-20mm；而4-羟基苯甲醛、丁香醛、洋茉莉醛、兔耳草醛、α-己基肉桂醛和5-甲基糠醛的抑菌直径均在7-12mm，其抑菌能力较弱，表现为弱度敏感。采用二倍稀释法进一步测定这30种芳香醛类食用香料的最小抑菌浓度。首先取9支5mL试管编号1-9，第2-9管中加入2mL营养肉汤培养基，1号管中加入3.8mL营养肉汤培养基；再向1号管中加入200μL浓度为0.1g/mL的香料溶液(即加入20mg芳香醛类食用香料)，混匀后吸取2mL含香料培养基加入2号管中，使得2号管培养基中香料浓度为1号管的一半，以此类推，对各管依次进行二倍稀释。然后向每管中加入20μL稀释好的菌悬液，另设2组平行实验组以及对照组；用常用的防腐剂山梨酸钾和苯甲酸钠作为阳性对照组，阴性对照组只加入培养基和菌液。在37℃条件下振荡培养24h，观察培养基，如其变浑浊则说明此浓度的香料无法抑制金黄色葡萄球菌生长；临界浓度的透明试管用营养平板进行涂布检验，将完全抑制菌落生长所需香料最低浓度定义为最小抑菌浓度，所得结果见表2。表230种芳香醛类食用香料的最小抑菌浓度结合30种芳香醛类食用香料的抑菌圈直径和最小抑菌浓度，对金黄色葡萄球菌抑制效果较好的芳香醛类食用香料有2-羟基苯甲醛、苯丙醛、肉桂醛、α-甲基肉桂醛、3-(2-呋喃基)丙烯醛、2-苯基-2-丁烯醛和4-甲基-2-苯基-2-戊烯醛。为了考察它们的抑菌稳定性，研究了温度、紫外线照射和pH值对这7种芳香醛类食用香料的抑菌稳定性的影响。在考察温度对它们的抑菌稳定性的影响时，将7种芳香醛类香料分别置于80℃、100℃和121℃下受热20min，将未经热处理的芳香醛类香料作为对照组；在考察紫外线照射对它们的抑菌稳定性的影响时，将7种芳香醛类食用香料置于紫外灯下分别照射20min、40min和60min，将未经紫外线照射的香料作为对照组；在考察pH值对它们的抑菌稳定性的影响时，首先确定金黄色葡萄球菌能够生长的环境的pH值范围(p本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种金黄色葡萄球菌抑制剂，其特征是由四种芳香醛类食用香料复配组成。

【技术特征摘要】
1.一种金黄色葡萄球菌抑制剂，其特征是由四种芳香醛类食用香料复配组成。
2.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌抑制剂，其特征是由2-羟基苯甲醛、苯丙
醛、肉桂醛和3-(2-呋喃基)丙烯醛四种芳香醛类食用香料复配组成，它们的质量比为1∶2∶8∶1。

【专利技术属性】
技术研发人员：刘玉平，黄明泉，孙宝国，高婷婷，韩帅，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：北京;11