本发明专利技术公开了一种生物法制备高纯度叶黄素晶体的方法，属于叶黄素领域。本发明专利技术从万寿菊中提取得到叶黄素粗品，再用生物发酵法对其进行提纯，得到高纯度叶黄素晶体，本发明专利技术采用的生物法选择性高，催化效果好，而且条件温和，工艺简单，制备过程中产生的溶剂残留量小，对环境污染小，制备得到的产品的纯度高，成本低，具有广泛的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术公开了一种生物法制备高纯度叶黄素晶体的方法，属于叶黄素领域。
技术介绍
叶黄素属于“类胡萝卜素”类物质，它是构成玉米、蔬菜、水果、花卉等植物色素的重要组分。洋甘蓝、羽衣甘蓝、菠菜等深绿色叶菜以及金盏花等花卉中即含大量的叶黄素。叶黄素是一种含氧的类胡萝卜素，具有多种功能。具有抗氧化、抑制活性氧自由基、抗癌、增强免疫力、降低心血管病的发病率，尤其在预防和治疗老年性白内障和老年黄斑变性方面效果显著。叶黄素因其分子结构的不对称，在合成工艺上比较复杂，化学合成叶黄素的瓶颈尚未攻克，叶黄素的获取仍旧依赖天然植物的供给。另外天然微生物的发酵代谢产物也在不断为叶黄素的来源扩大思路，通过细菌菌株或藻类藻株来筛选叶黄素的微生物，进一步提取叶黄素，利用分离纯化技术制成叶黄素成品目前叶黄素生产工艺为将金盏菊中叶黄素酯提取并在碱性条件下皂化生成叶黄素，此时叶黄素极易分解，产品收率非常低，溶剂残留严重，整个生产工艺复杂，试剂量大，成本难以控制。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题：针对目前叶黄素生产工艺为将金盏菊中叶黄素酯提取并在碱性条件下皂化生成叶黄素，此时叶黄素极易分解，产品收率非常低，溶剂残留严重，整个生产工艺复杂，试剂量大，成本难以控制的问题，提供了一种生物法制备高纯度叶黄素晶体的方法，本专利技术从万寿菊中提取得到叶黄素粗品，再用生物发酵法对其进行提纯，得到高纯度叶黄素晶体，本专利技术采用的生物法选择性高，催化效果好，而且条件温和，工艺简单，制备过程中产生的溶剂残留量小，对环境污染小，制备得到的产品的纯度高，成本低，具有广泛的应用前景。为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：（1）称取100～200g干燥粉碎后的万寿菊粉末，按固液比1：20与石油醚混合，并在300～400W功率和30～35℃下进行超声提取25～30min，提取后过滤，并将滤液真空浓缩回收石油醚溶剂，得到叶黄素酯浸膏；（2）将上述叶黄素酯浸膏按固液比1：10溶解在石油醚中，并加入总体积30～50%浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液进行皂化反应1～2h，反应完成后抽滤，将滤液用质量分数20%盐酸调节pH值为7.0，将调节后的滤液在45～55℃下蒸馏2～3h，蒸馏完成后冷却至室温，并放入0～5℃的冰水中静置20～30min，静置后快速抽滤，得到叶黄素粗品；（3）分别选取3～5g磷酸氢二钾，3～5g磷酸二氢钾，2～4g硫酸镁，0.3～0.5g氯化钠和0.3～0.5h二水氯化钙加入到250mL的容量瓶中，加入去离子水定容到刻度线，摇晃均匀，得培养液；（4）从上述容量瓶中取出150～170mL培养液，并用质量分数5%硝酸调节其pH值为7.0，将调节后的溶液和8～10g牛肉膏、5～7g蛋白胨和4.5～5.5g步骤（2）叶黄素粗品混合，得固体培养基，混合后均匀将其铺平板上；（5）在上述铺平板中，分别接种5～10株黑曲霉菌、8～12株糙皮侧耳菌和3～5株青霉菌，在25～30℃下摇床发酵64～70h，发酵结束后离心分离，得上清液，将得到后的上清液在50～60℃下减压蒸馏1～2h，蒸馏完成后冷却至室温，并放入0～5℃的冰水中静置20～30min，静置后快速抽滤，得到高纯度叶黄素晶体，并置于60℃的烘箱中干燥10～12h，干燥后收集即可。本专利技术的应用的方法：本专利技术制得的高纯度叶黄素晶体可以广泛应用于保健品和药物中，具有抗氧化、抑制活性氧自由基、抗癌、增强免疫力、降低心血管病的发病率，尤其在预防和治疗老年性白内障和老年黄斑变性方面效果显著。本专利技术的有益效果是：（1）本专利技术采用的生物法选择性高，催化效果好，而且条件温和，工艺简单；（2）本专利技术制备过程中产生的溶剂残留量小，对环境污染小，制备得到的产品的纯度高，成本低。具体实施方式首先称取100～200g干燥粉碎后的万寿菊粉末，按固液比1：20与石油醚混合，并在300～400W功率和30～35℃下进行超声提取25～30min，提取后过滤，并将滤液真空浓缩回收石油醚溶剂，得到叶黄素酯浸膏；将叶黄素酯浸膏按固液比1：10溶解在石油醚中，并加入总体积30～50%浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液进行皂化反应1～2h，反应完成后抽滤，将滤液用质量分数20%盐酸调节pH值为7.0，将调节后的滤液在45～55℃下蒸馏2～3h，蒸馏完成后冷却至室温，并放入0～5℃的冰水中静置20～30min，静置后快速抽滤，得到叶黄素粗品；分别选取3～5g磷酸氢二钾，3～5g磷酸二氢钾，2～4g硫酸镁，0.3～0.5g氯化钠和0.3～0.5h二水氯化钙加入到250mL的容量瓶中，加入去离子水定容到刻度线，摇晃均匀，得培养液；从容量瓶中取出150～170mL培养液，并用质量分数5%硝酸调节其pH值为7.0，将调节后的溶液和8～10g牛肉膏、5～7g蛋白胨和4.5～5.5g叶黄素粗品混合，得固体培养基，混合后均匀将其铺平板上；在铺平板中，分别接种5～10株黑曲霉菌、8～12株糙皮侧耳菌和3～5株青霉菌，在25～30℃下摇床发酵64～70h，发酵结束后离心分离，得上清液，将得到后的上清液在50～60℃下减压蒸馏1～2h，蒸馏完成后冷却至室温，并放入0～5℃的冰水中静置20～30min，静置后快速抽滤，得到高纯度叶黄素晶体，并置于60℃的烘箱中干燥10～12h，干燥后收集即可。实例1首先称取100g干燥粉碎后的万寿菊粉末，按固液比1：20与石油醚混合，并在300W功率和30℃下进行超声提取25min，提取后过滤，并将滤液真空浓缩回收石油醚溶剂，得到叶黄素酯浸膏；将叶黄素酯浸膏按固液比1：10溶解在石油醚中，并加入总体积30%浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液进行皂化反应1h，反应完成后抽滤，将滤液用质量分数20%盐酸调节pH值为7.0，将调节后的滤液在45℃下蒸馏2h，蒸馏完成后冷却至室温，并放入0℃的冰水中静置20min，静置后快速抽滤，得到叶黄素粗品；分别选取3g磷酸氢二钾，3g磷酸二氢钾，2g硫酸镁，0.3g氯化钠和0.3h二水氯化钙加入到250mL的容量瓶中，加入去离子水定容到刻度线，摇晃均匀，得培养液；从容量瓶中取出150mL培养液，并用质量分数5%硝酸调节其pH值为7.0，将调节后的溶液和8g牛肉膏、5g蛋白胨和4.5g叶黄素粗品混合，得固体培养基，混合后均匀将其铺平板上；在铺平板中，分别接种5株黑曲霉菌、8株糙皮侧耳菌和3株青霉菌，在25℃下摇床发酵64h，发酵结束后离心分离，得上清液，将得到后的上清液在50℃下减压蒸馏1h，蒸馏完成后冷却至室温，并放入0℃的冰水中静置20min，静置后快速抽滤，得到高纯度叶黄素晶体，并置于60℃的烘箱中干燥10h，干燥后收集即可。本专利技术制得的高纯度叶黄素晶体可以广泛应用于保健品和药物中，具有抗氧化、抑制活性氧自由基、抗癌、增强免疫力、降低心血管病的发病率，尤其在预防和治疗老年性白内障和老年黄斑变性方面效果显著。实例2首先称取150g干燥粉碎后的万寿菊粉末，按固液比1：20与本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种生物法制备高纯度叶黄素晶体的方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）称取100～200g干燥粉碎后的万寿菊粉末，按固液比1：20与石油醚混合，并在300～400W功率和30～35℃下进行超声提取25～30min，提取后过滤，并将滤液真空浓缩回收石油醚溶剂，得到叶黄素酯浸膏；（2）将上述叶黄素酯浸膏按固液比1：10溶解在石油醚中，并加入总体积30～50%浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液进行皂化反应1～2h，反应完成后抽滤，将滤液用质量分数20%盐酸调节pH值为7.0，将调节后的滤液在45～55℃下蒸馏2～3h，蒸馏完成后冷却至室温，并放入0～5℃的冰水中静置20～30min，静置后快速抽滤，得到叶黄素粗品；（3）分别选取3～5g磷酸氢二钾，3～5g磷酸二氢钾，2～4g硫酸镁，0.3～0.5g氯化钠和0.3～0.5h二水氯化钙加入到250mL的容量瓶中，加入去离子水定容到刻度线，摇晃均匀，得培养液；（4）从上述容量瓶中取出150～170mL培养液，并用质量分数5%硝酸调节其pH值为7.0，将调节后的溶液和8～10g牛肉膏、5～7g蛋白胨和4.5～5.5g步骤（2）叶黄素粗品混合，得固体培养基，混合后均匀将其铺平板上；（5）在上述铺平板中，分别接种5～10株黑曲霉菌、8～12株糙皮侧耳菌和3～5株青霉菌，在25～30℃下摇床发酵64～70h，发酵结束后离心分离，得上清液，将得到后的上清液在50～60℃下减压蒸馏1～2h，蒸馏完成后冷却至室温，并放入0～5℃的冰水中静置20～30min，静置后快速抽滤，得到高纯度叶黄素晶体，并置于60℃的烘箱中干燥10～12h，干燥后收集即可。...
【技术特征摘要】
1.一种生物法制备高纯度叶黄素晶体的方法，其特征在于具体制备步骤为：
（1）称取100～200g干燥粉碎后的万寿菊粉末，按固液比1：20与石油醚混合，并在300～400W功率和30～35℃下进行超声提取25～30min，提取后过滤，并将滤液真空浓缩回收石油醚溶剂，得到叶黄素酯浸膏；
（2）将上述叶黄素酯浸膏按固液比1：10溶解在石油醚中，并加入总体积30～50%浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液进行皂化反应1～2h，反应完成后抽滤，将滤液用质量分数20%盐酸调节pH值为7.0，将调节后的滤液在45～55℃下蒸馏2～3h，蒸馏完成后冷却至室温，并放入0～5℃的冰水中静置20～30min，静置后快速抽滤，得到叶黄素粗品；
（3）分别选取3～5g磷酸氢二钾，3～5g磷酸二氢钾，2～4g硫酸镁，0.3～0.5...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪巍，王志慧，
申请(专利权)人：常州市蓝勖化工有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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