用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，包括以下步骤：分别获取脂肪干细胞和异体皮基质；将所述脂肪干细胞与水凝胶混合后接种于所述异体皮基质；其中，所述脂肪干细胞来源于皮肤烧伤患者自体；所述水凝胶是由海藻酸盐溶液和明胶溶液混合制成的。将自体脂肪干细胞负载于海藻酸盐-明胶水凝胶中，不仅能够阻隔细菌，使得脂肪干细胞和皮肤伤口保持一个潮湿环境，提供一个良好的修复环境，降低免疫排斥反应，而且能够避免更换贴片时，贴片与伤口粘连从而保护新生皮肤组织，不仅实现快速修复皮肤的目的，而且能够减轻患者痛苦，不易造成创伤部位色素累积形成疤痕等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及组织工程领域，特别涉及一种用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片及其制备方法。
技术介绍
皮肤是人体与外界环境接触的屏障，不仅起保护、分泌、代谢和感觉等作用，而且参与免疫反应和维持机体内环境的稳定。作为人体最表露的皮肤，其受损伤及大面积烫烧伤意外的发生率较高。早期的烧伤创面覆盖可以抑制细菌生长、预防感染、防止水分及电解质的丢失；自体皮肤移植是治疗烧伤的首选，但是对于大面积烧伤，自体皮肤不能满足需求，且疗程周期较长，治疗过程中，皮肤创口易出现感染；而异体皮基质肤则会引起明显的免疫排斥反应；而移植人造皮肤，皮下的分泌物易形成水疱，进而对人造皮肤造成损伤，且人造皮肤较昂贵，制作工艺较复杂。因此，截至目前，严重创伤和大面积烧伤患者的皮源缺乏仍然是临床亟待解决的难题。目前，组织工程化皮肤的研究已成为生命科学研究领域的热点之一，而市场上也已出现用于临床的组织工程皮肤产品，虽有一定的临床效果，但不仅价格昂贵，技术操作繁琐，有一定的技术难度且成本造价较高。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，针对现有技术中采用异体皮基质修复皮肤烧伤创口易引起免疫排斥反应且疗效效率低等缺陷，提供一种能够避免免疫排斥反应且修复效果较好的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片及其制备方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，包括以下步骤：分别获取脂肪干细胞和异体皮基质；将所述脂肪干细胞与水凝胶混合后接种于所述异体皮基质；其中，所述脂肪干细胞来源于皮肤烧伤患者自体；所述水凝胶是由海藻酸盐溶液和明胶溶液混合制成的。在本专利技术提供的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述海藻酸盐的浓度为20～80mg/ml，所述明胶浓度为20～80mg/ml。在本专利技术提供的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述水凝胶的制备过程，包括以下步骤：取海藻酸盐于PBS溶液中，待海藻酸盐完全溶解后，恒温放置0.2～0.8小时，即获得所述海藻酸盐溶液；取明胶溶于去离子水中，置于45～55℃，待明胶充分溶解后，恒温放置0.2～0.8小时，即获得所述明胶溶液；将所述海藻酸盐溶液和明胶溶液混合，搅拌，恒温放置至溶液凝胶化。在本专利技术提供的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述海藻酸盐为海藻酸钠或海藻酸钙。在本专利技术提供的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述脂肪干细胞的浓度为(2～8)×105个/ml。在本专利技术提供的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述脂肪干细胞为第2～4代中任一代脂肪干细胞。在本专利技术提供的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述异体皮基质的获取过程，包括以下步骤：取健康猪腹部或背部皮进行脱脂脱毛处理，去掉0.2～0.6mm的表皮，制成厚度为0.2～0.4mm的真皮层皮片，清洗后消毒20～40分钟，反复清洗，于消化液中消化2～4天，反复清洗皮片，然后加入非离子型表面活性剂孵育2～4天，至细胞成分完全去除，获得脱细胞真皮，然后分别用氯化钠和PBS反复冲洗，即获得异体皮基质。在本专利技术提供的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，所述消化液中包含有质量百分数为0.10～0.40％胰蛋白酶、0.01～0.03％乙二酸乙二胺和0.01～0.03％氢氧化钠。在本专利技术提供的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法中，将所述脂肪干细胞和水凝胶接种于所述异体皮基质之前，还包括采用辐照对所述异体皮基质进行杀菌处理的步骤。本专利技术还提供一种用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片，由上述用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片制备方法所获得的。实施本专利技术提供的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片及其制备方法，可以达到以下有益效果：通过利用脂肪干细胞的分化潜能，以及异体皮基质的刺激诱导作用，促使脂肪干细胞分化成表皮细胞；而由于脂肪干细胞来源于烧伤患者自体，因此其抗原性较低，不易引起免疫排斥反应，从而提高皮肤修复效果，达到快速修复皮肤创伤的目的；除此之外，将脂肪干细胞负载于海藻酸盐-明胶水凝胶中，不仅能够阻隔细菌，使得脂肪干细胞和皮肤伤口保持一个潮湿环境，提供一个良好的修复环境，而且能够避免更换贴片时，贴片与伤口粘连从而保护新生皮肤组织，不仅实现快速修复皮肤的目的，而且能够减轻患者痛苦，不易造成创伤部位色素累积形成疤痕等。具体实施方式为解决现有技术中通过异体皮基质修复烧伤皮肤存在易引起免疫排斥反应且修复效率低等缺陷，本专利技术的创新点在于提供一种负载有皮肤烧伤患者自体脂肪干细胞的皮肤贴片及其制备方法，通过采用自体脂肪干细胞结合异体皮基质，以降低因异体皮基质引起的免疫排斥反应，从而降低皮肤贴片的抗原性，提高皮肤修复效率。具体地，本专利技术提供的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片，其制备方法包括以下步骤：S1、分别获取脂肪干细胞和异体皮基质；其中，脂肪干细胞来源于皮肤烧伤患者自体，以降低免疫排斥反应；异体皮基质为经脱细胞处理后的皮肤基质，可以是同种异体皮基质(即除皮肤烧伤患者以外的人类皮基质)，也可以是异种异体皮基质(如猪、牛等动物皮基质)；S2、将脂肪干细胞与水凝胶混合后接种于异体皮基质上即可；异体皮基质不仅用来作为修复烧伤皮肤的贴片，而且其中保留了原有组织结构中的不可溶成分，主要包括胶原、弹性蛋白、氨基葡聚糖和结构蛋白等，为细胞生长和皮肤创伤修复提供了营养基础能够为脂肪干细胞提供生长所需营养物质及促使脂肪干细胞分化成表皮细胞的细胞因子，使得脂肪干细胞能够维持其细胞活性，并能够分化成表皮细胞；而由于脂肪干细胞来源于烧伤皮肤患者本体，因此其抗原性相对较弱，能够避免异体皮基质直接接触皮肤烧伤部分所引起的免疫排斥反应，以此提高修复皮肤效率的目的。水凝胶是一类能够吸收并保有大量水分的具有交联网络结构的聚合物，具有三维孔隙结构，储存有丰富的水环境，具有良好的生物相容性，能够为脂肪干细胞提供附着生长空间，扩大脂肪干细胞与水分的接触面积，以提高脂肪干细胞的细胞活性。因此，将水凝胶与脂肪干细胞混合后接种于异体皮基质上，能够保证脂肪干细胞的细胞活性，并对脂肪干细胞提供一定的固化作用，有利于贴片的稳定性。进一步地，步骤S1中，本专利技术优先采用第2～4代中任一代脂肪干细胞，脂肪干细胞的获取过程，包括以下步骤：S11A、原代脂肪干细胞的获取；无菌条件下，取所述皮肤烧伤患者的脂肪组织，剔除脂肪中肉眼可见的血管和纤维部分，经PBS本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：分别获取脂肪干细胞和异体皮基质；将所述脂肪干细胞与水凝胶混合后接种于所述异体皮基质；其中，所述脂肪干细胞来源于皮肤烧伤患者自体；所述水凝胶是由海藻酸盐溶液和明胶溶液混合制成的。

【技术特征摘要】
1.一种用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其特征在于，包括以
下步骤：
分别获取脂肪干细胞和异体皮基质；
将所述脂肪干细胞与水凝胶混合后接种于所述异体皮基质；
其中，所述脂肪干细胞来源于皮肤烧伤患者自体；
所述水凝胶是由海藻酸盐溶液和明胶溶液混合制成的。
2.根据权利要求1所述的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其
特征在于，所述海藻酸盐的浓度为20～80mg/ml，所述明胶浓度为20～80mg/ml。
3.根据权利要求2所述的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其
特征在于，所述水凝胶的制备过程，包括以下步骤：
取海藻酸盐于PBS溶液中，待海藻酸盐完全溶解后，恒温放置0.2～0.8
小时，即获得所述海藻酸盐溶液；取明胶溶于去离子水中，置于45～55℃，待
明胶充分溶解后，恒温放置0.2～0.8小时，即获得所述明胶溶液；将所述海藻
酸盐溶液和明胶溶液混合，搅拌，恒温放置至溶液凝胶化。
4.根据权利要求3所述的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其
特征在于，所述海藻酸盐为海藻酸钠或海藻酸钙。
5.根据权利要求1所述的用于修复皮肤烧伤的皮肤贴片的制备方法，其
特征在于，所述脂肪干细胞的浓度为(2～8)×105个/ml。
6.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾宪卓，张哲，
申请(专利权)人：深圳爱生再生医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44