一株芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株芽孢杆菌Bacillus luteaGSS08及其应用。该菌株已于2015年12月11日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2015739。本发明专利技术的芽孢杆菌，为腐殖质还原提供了一种新的革兰氏阳性菌株，在土壤修复、土质改良等方面具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于环境微生物领域，具体涉及一株芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
自然界的物质循环可归纳为两个方面：一是无机物的有机质化，即生物合成作用；另一个是有机物的无机质化，即矿化作用或分解作用。现有研究表明，微生物在有机物的矿化中起决定性作用，地球上90%以上有机物的矿化都是由微生物如细菌和真菌完成的。革兰氏阳性菌是十分重要的微生物类群，在厌氧土壤中占据优势地位，对于土壤养分利用、污染物修复等具有重要作用。芽孢杆菌属（Bacillus）细菌作为细菌中革兰氏阳性菌的代表物种，对外界有害因子抵抗力强，在自然环境中数量多、分布广，已广泛应用于土壤/水体污染修复。腐殖质呼吸，又称醌呼吸，是指微生物以腐殖质为末端电子受体，通过氧化电子供体偶联腐殖质还原，并从这一过程中贮存生命活动的能量。腐殖质呼吸是近年来发现的新型微生物能量代谢方式。腐殖质呼吸在关键元素地球化学循环过程、土壤污染治理及有机废物循环利用中发挥重要作用，对于研究土壤典型物质循环转化的微界面过程及其功能，具有重要的科学价值。传统观点认为，腐殖质呼吸菌一般为革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌特别是芽孢杆菌一度被误认为不具备真正的腐殖质呼吸功能，它们在腐殖质呼吸环境中的存在只起到维持系统平衡和辅助性作用。近年来，研究者陆续发现腐殖质还原棒杆菌、芽孢杆菌等革兰氏阳性菌具有腐殖质呼吸的特性。革兰氏阳性腐殖质呼吸菌特别是芽孢杆菌兼具胞外呼吸能力和抗逆性强的优点，在清洁能源生产和污染土壤修复及废弃物利用方面日益受到重视。早在1995年，Boone等人便成功分离了第一株具有腐殖质呼吸能力的B.infernus。之后，又有多株Bacillus属的腐殖质还原菌陆续被发现。然而，由于已报道的纯培养Bacillus属腐殖质呼吸菌为严格厌氧菌，胞外电子传递效率低，培养不方便，研究进展缓慢。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株芽孢杆菌及其应用。本专利技术所采取的技术方案是：芽孢杆菌，其分类命名为BacillusluteaGSS08，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCM2015739。一种环境污染修复微生物制剂，该微生物制剂含中上述芽孢杆菌BacillusluteaGSS08。芽孢杆菌BacillusluteaGSS08在微生物制剂中的应用。优选的，所述微生物制剂为环境污染修复微生物制剂。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种新的具有腐殖质还原能力的芽孢杆菌B.luteaGSS08，为腐殖质还原提供了一种新的革兰氏阳性菌株，在土壤修复、土质改良等方面具有广泛的应用前景。本专利技术的微生物制剂，可以很好地应用于土壤修复、土质改良。B.luteaGSS08兼性厌氧，能够在中性及碱性条件下（pH可达9.5）进行生长与增殖，在厌氧条件下能以乙酸、葡萄糖进行腐殖质还原。与现有的同类菌株比较，该菌株培养方便，适应的范围更广。附图说明图1本专利技术B.luteaGSS08在20000倍下的扫描电镜照片；图2本专利技术B.luteaGSS08的系统发育树；图3本专利技术B.luteaGSS08利用不同电子供体还原AQDS情况。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但并不局限于此。实施例1芽孢杆菌B.luteaGSS08的培养、分离、筛选、鉴定及保存1.1菌株的培养、分离本专利技术的芽孢杆菌B.luteaGSS08是通过对腐熟堆肥富集培养进行分离纯化得到的。具体分离纯化方法包括以下步骤：（1）取5.0g腐熟堆肥（城市污泥与作物秸秆）接种于pH值为7.2的液体分离培养基中；所述液体分离培养基的组成是：每升液体分离培养基中含0.6g乙酸，0.6gNaH2PO4，0.25gNH4Cl，0.1gKCl，2.5gNaHCO3，0.2g酵母粉，10.0mL维生素溶液，10.0mL微量元素溶液，1.0mMAQDS。其中，维生素溶液是每升去离子水中含2.0mg生物素，2.0mg叶酸，10.0mg维生素B6，5.0mg硫胺素，5.0mg核黄素，5.0mg烟酸，5.0mg泛酸钙，0.1mg维生素B12，5.0mg对氨基苯甲酸，5.0mg硫辛酸；微量元素溶液是每升去离子水中含1.5g氨三乙酸，3.0gMgSO4·7H2O，0.5gMnSO4·H2O，1.0gNaCl，0.1gFeSO4·7H2O，0.1gCoCl2·6H2O，0.1gCaCl2，0.1gZnSO4·7H2O，0.01gCuSO4·5H2O，0.01gAlK(SO4)2·12H2O，0.01gH3BO3，0.01gNa2MoO4·2H2O。（2）往已接种腐熟堆肥的液体分离培养基中鼓充高纯混合气体不少于30分钟，所述高纯混合气体可采用N2和CO2按照80：20的体积比的混合气体，鼓气完毕用铝盖密封，置于厌氧工作站（N2和CO2按照80：20的体积比的混合），30℃静置培养，观察培养液的颜色变化情况。（3）当培养10d后，培养液颜色从无色变为深黄色时，以10%的接种量将培养液转接至另一新鲜的液体分离培养基，鼓充高纯混合气体不少于30分钟，鼓气完毕用铝盖密封，置于厌氧工作站30℃静置培养。如此富集培养三次。（4）将第四代反应后的培养液采用稀释平板法稀释到10-5-10-6，将稀释后的培养液0.1mL均匀涂布于LB固体培养基上，置于厌氧工作站（N2/CO2=80/20）30℃培养48h，挑取单菌落进行分离与纯化。所述LB固体培养基的组成是：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl为10g/L，琼脂粉20g/L，pH值为7.2。菌体形态特性采用常规的细菌电子显微镜观察，该菌株为革兰氏阳性菌，棒状，菌体大小为1.3-3.5μm×0.6-1.8μm，具运动性。见图1。菌落形态特性在LB琼脂固体培养基平板上好氧培养24h后，菌落圆形，黄色，稍突起，不透明，菌落直径为1-2mm。生理生化特征对菌株B.luteaGSS08进行生理生化特征的鉴定，并与几种近源菌株进行对比，其结果见表1。表1.菌株生理生化鉴定结果（表中：+表示为阳性，W表示为弱阳性，-表示为阴性）由鉴定的结果（表1）可知：菌株B.luteaGSS08兼性厌氧，能在0-4%NaCl的培养液中生长，而最适NaCl为1%；生长温度为25-45℃，最适生长温度为37℃；pH值为6.5-9.5，最适pH为7.5；接触酶阳性，氧化酶阴性；具有七叶甙水解活性、明胶水解活性。菌株B.luteaGSS08能够利用鼠李糖、己二酸、L-海藻糖、D-甘露糖、L-阿拉伯糖、D-葡萄糖、D-甘露醇作为碳源；G+C含量为49.5%。通过比较，B.luteaGSS08菌株兼性厌氧，能够利用的碳源较广，而B.humiDSM16318、B.andreeseniiDSM23948、B.subtilisDSM10和B.timonensisDSM25372为微好氧或严格厌氧菌，能够利用的碳源种类则十分有限。此外B.luteaGSS08的G+C含量本文档来自技高网...

【技术保护点】
芽孢杆菌，其分类命名为Bacillus luteaGSS08，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2015739。

【技术特征摘要】
1.芽孢杆菌，其分类命名为BacillusluteaGSS08，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCM2015739。
2.一种环境污染修复微生物制剂，其特征在于，该微生物制剂中含有权利要求1所述的芽孢杆菌Bac...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈允其，叶志勇，李旺南，王跃强，
申请(专利权)人：平潭综合实验区市政园林有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35