一种快速高分离度液相色谱检测金银花和山银花药材的方法技术

本发明专利技术提供了一种利用快速高分离度液相色谱(RRLC)检测金银花和山银花药材的方法。金银花具有显著的抗菌、抗炎、抗病毒等生物活性，被广泛添加到复方药物、食品、饮料等相关产品中。由于金银花和山银花的价格差距较大，市场上存在将山银花作为金银花的主要代替品用于金银花产品的掺假。本发明专利技术方法能够在8分钟内同时分析出金银花和山银花所含的绿原酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙等4种化合物，可用于鉴定金银花和山银花药材，以监控金银花原料及产品的质量，具有良好的精密度、可重复性和准确性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药领域，涉及中药材检测方法，具体涉及中药材金银花和山银花的检测方法。
技术介绍
金银花为忍冬科(Caprifoliaceae)植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的干燥花蕾或带初开的花，原产于亚洲东部，包括中国、日本、韩国。金银花具有清热解毒、凉散风热及抗菌消炎等功效，被广泛用于治疗痈、急性痢疾、咽炎以及由病毒或细菌感染引发的上呼吸道系统疾病。此外，金银花还具有抗菌、抗炎及抗病毒(如：甲型H1N1流感病毒)等药理作用。双黄连口服液是一种传统的复方中药，金银花作为其主要原料之一，主要用于治疗上呼吸道感染、急性支气管炎以及轻度肺炎。金银花还广泛应用于食品、饮料以及其他相关产品。因此，金银花获得了广泛的关注和市场需求，其结果不可避免的是市场上发现了大量金银花掺假产品，主要是掺入不同种类的山银花。山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬LoniceramacranthoidesHand.-Mazz.、华南忍冬LoniceraconfusaDC.、红腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq.或黄褐毛忍冬LonicerafulvotomentosaHsuetS.C.Cheng的干燥花蕾或带初开的花，摘自《中国药典》。虽然这两种草药外观形态和化学成分不同，但其药材特性和适应症类似。按《中国药典》采用高效液相色谱法测定，山银花含绿原酸(C16H18O9)不得少于2.0％，含灰毡毛忍冬皂苷乙(C65H106O32)和川续断皂苷乙(C53H86O22)的总量不得少于5.0％。金银花含绿原酸(C16H18O9)不得少于1.5％，含木犀草苷(C21H20O11)不得少于0.050％。绿原酸(3-O-咖啡酰奎宁酸)是金银花中的主要化合物，可作为重要的标志物用于检测。大量研究表明，绿原酸有潜在的抗炎、镇痛、退热、抗诱变和抗癌活性[3]。文献报道，HPLC法与UV-LESD[4]或者MS[5]联用可用于分析金银花的活性成分。然而，这些方法不仅分析时间长，而且需使用大量有机溶剂作为流动相。目前，尚未发现有相对LC更简便的方法可从金银花中区分出山银花，尤其是RRLC法。
技术实现思路
本专利技术的任务是提供一种快速高分离度液相色谱检测金银花和山银花药材的方法。实现本专利技术的技术方案是:本专利技术提供的这种快速高分离度液相色谱检测金银花和山银花药材的方法，其特征在于，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以含0.1％甲酸的乙腈溶液为流动相B对待检药材样品检测。该方法的色谱条件为：柱温为40℃，流速为1.0ml/min，进样量为1μl，按下表进行梯度洗脱:检测波长为327nm(0～3min)、350nm(3～5min)，用蒸发光散射检测器检测皂苷类化合物(5～8min)。本专利技术提供的这种快速高分离度液相色谱检测金银花和山银花药材的方法，包括制备待测样品溶液、色谱检测、结果判断三个步骤，各步骤的具体方法是：步骤一、制备待测样品溶液：取待测样品，用研钵磨成细粉，取细粉0.10g，精密称定，然后加70％甲醇水溶液10ml，并在37℃超声处理15min，超声处理后，放冷至室温，用70％的甲醇水溶液调整至10ml，制得待测样品溶液；步骤二、色谱检测：取待测样品溶液用0.20μm的滤膜过滤，取1μl进样，记录色谱，色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(LunaC18-HST(2)柱(2.5μm,100mm×3.0mm))；以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以含0.1％甲酸的乙腈溶液为流动相B，柱温为40℃；流速为1.0ml/min；进样量为1μl；梯度洗脱见表1。表1梯度洗脱检测波长为327nm(0～3min)、350nm(3～5min)，用蒸发光散射检测器检测皂苷类化合物(5～8min)；步骤三、结果判断：将所得色谱图与金银花及山银花指纹图谱比较，主峰即为绿原酸，金银花及山银花都有此主峰，所述的主峰具体为2.295min处的色谱峰；6min处出现两个色谱峰即判断样品为山银花，具体是6.021min和6.341min处有两个色谱峰即判断样品为山银花，此两个色谱峰分别为灰毡毛忍冬皂苷乙峰和川续断皂苷乙峰。6min处无特征色谱峰即判断样品为金银花。本专利技术提供的快速高分离度液相色谱检测金银花和山银花药材的方法具有操作简单，方法可靠，重现性好等特点，可用于绿原酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量测定。此外，该方法可以很容易地在8分钟内通过检测出皂苷类化合物而区分出山银花。本专利技术方法的具体色谱条件为：Agilent1200SL型高效液相色谱仪(MW检测器、自动进样器)；色谱柱：LunaC18-HST(2.5μm，100×3.0mm)；流动相：流动相A(H2O+0.1％HCOOH)；流动相B(CH3CN+0.1％HCOOH)；梯度洗脱见表1；流速：1.0ml/min；检测波长：UV检测器：327nm(0～3min)、350nm(3～5min)；ELSD检测器(5～8min)；柱温：40℃；进样量：1μl；总分析时间：8min。实验资料1.实验材料和方法灰毡毛忍冬、黄褐毛忍冬、华南忍冬分别从重庆、贵州、广州收集，并通过psbA-trnH基因间的间距器[6]确定山银花样品的产地。2.1.试剂与材料甲醇：色谱纯，FisherScientific(Ottawa,加拿大)乙腈：色谱纯，FisherScientific(Ottawa,加拿大)纯水：Nanopure超纯水系统(Barnstead,美国)甲酸：色谱纯，J.T.BakerChemicalCompany(London,英国)川续断皂苷乙(96％)对照品：TauToBioTech(上海,中国)绿原酸、木犀草苷(91.5％)、毡毛忍冬皂苷乙(93.3％)对照品：中国药品生物制品检定所(北京,中国)金银花：山东、河南、湖南、贵州、湖北、河北、四川、山西。绿原酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙等活性成分的化学结构见图1。2.2.溶液的制备单一对照品溶液储备液：分别取绿原酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙对照品适量，以甲醇为溶剂，制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液储备液，保存于4℃。分别精密量取上述对照品溶液储备液适量，稀释至0.2、0.4、0.6、0.8mg/ml备用。供试品溶液：供试品灰毡毛忍冬、黄褐毛忍冬、华南忍冬等山银花品种药材和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速高分离度液相色谱检测金银花和山银花药材的方法，其特征在于，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以含0.1％甲酸的乙腈溶液为流动相B对待检药材样品检测。

【技术特征摘要】
2016.01.05 CN 20161000366191.一种快速高分离度液相色谱检测金银花和山银花药材的方法，其特征在于，色谱柱
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以含0.1％甲酸的乙腈
溶液为流动相B对待检药材样品检测。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱条件为：柱温为40℃，流速为1.0ml/
min，进样量为1μl，按下表进行梯度洗脱:
检测波长为327nm(0～3min)、350nm(3～5min)，用蒸发光散射检测器检测皂苷类化合
物(5～8min)。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法包括制备待测样品溶液、色谱
检测、结果判断三个步骤，各步骤的具体方法是：
步骤一、制备待测样品溶液：取待测样品，用研钵磨成细粉，取细粉0.10g，精密称定，然
后加70％甲醇水溶液10ml，并在37℃超声处理15min，超声处理后，放冷至室温，用70％的甲
醇水溶液调整至10ml，制得待测样品溶液；
步骤二、色谱检测：取待测样品溶液用0.20μm的滤膜过滤，取1μl进样，记录色谱，色谱
条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(LunaC18-HST(2)柱(2...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹春萍，马元春，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42