流感病毒重配制造技术

本发明专利技术提供重配流感病毒毒株。

Influenza virus redistribution

The invention provides a recombinant influenza virus strain.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本申请请求2013年6月6日提交的美国临时申请61/832,091和2013年9月26日提交的欧洲专利申请号13179013.1的权益，这两项申请的全部内容通过引用纳入本文。本申请部分是在生物医学高级研究和开发机构(BARDA)授予的基金号HHSO10020100061C的政府支持下完成。政府对本专利技术享有某些权利。
本专利技术属于流感病毒重配领域。此外，其涉及生产用于保护抵御流感病毒的疫苗。
技术介绍
针对流感感染的最有效保护是抗流行株的疫苗接种，且尽快生成用于疫苗生产的流感病毒是重要的。野生型流感病毒通常在鸡蛋和细胞培养物内生长达到低效价。为了获得生长更好的毒株用于疫苗生产，目前常见的做法是用快速生长的高产供体毒株重配流行疫苗株。这可以通过以下方法完成：用所述流行流感毒株(所述疫苗毒株)和所述高产供体毒株共同感染培养宿主，并选择含有来自所述疫苗毒株的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)区段和来自所述供体毒株的其它病毒区段(即，编码PB1、PB2、PA、NP、M1、M2、NS1和NS2的那些)的重配病毒。另一种方法是通过反向遗传学重配流感病毒(参见例如参考文献1和2)。参考文献3和4报告了与野生型病毒毒株相比，带嵌合HA区段的流感病毒在鸡蛋中生长更快，该嵌合区段包含病毒毒株的胞外域和来自A/PuertoRico/8/34的其他结构域。参考文献5教导了具有嵌合NA蛋白质的流感病毒，该蛋白质含有A/PR/8/34的跨膜和茎结构域。参考文件6和7教导了重配流感病毒，其包含同时具有来自甲型流感病毒和乙型流感病毒的结构域的嵌合HA区段。大多数的对嵌合HA蛋白质的研究在鸡蛋中进行并且参考文献3教导“(所述)嵌合病毒上看到的改善可能对于鸡蛋基质是非常特异性的”。测试细胞培养物生长的研究发现测试的病毒在细胞培养物中显示出弱的生长。因此，本领域仍然需要提供一种高产率重配流感病毒，尤其是在细胞培养物中。具体实施方式本专利技术提供了具有胞外域、5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域的嵌合流感病毒血凝素区段，其中胞外域来自第一流感病毒毒株并且5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，该第二流感病毒毒株不是A/PuertoRico/8/34、A/WSN/33或B/Lee/40。还提供了具有胞外域、5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域的嵌合流感病毒血凝素区段，其中胞外域来自第一甲型流感病毒毒株，并且5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，该第一甲型流感病毒毒株不是H1或H5流感病毒毒株。本专利技术还提供了具有胞外域、5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域的嵌合流感病毒血凝素区段，其中胞外域来自第一乙型流感病毒毒株，并且5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，该第二流感病毒毒株是乙型流感病毒毒株或甲型流感病毒毒株，该甲型流感病毒毒株不是H1毒株或H3毒株。嵌合血凝素区段优选包含全部来自第二流感病毒的5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域，因为专利技术人已经发现包含这种嵌合血凝素区段的重配流感病毒在细胞培养物中获得了特别好的HA产率。还提供了具有胞外域、5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域的嵌合流感病毒血凝素区段，其中胞外域来自第一流感病毒毒株，并且5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，其中使用成对比对算法与SEQIDNO：15比对，则该区段包含以下的一个或多个：(a)对应于核苷酸24的位置上的鸟嘌呤，和/或(b)对应于核苷酸38的位置上的腺嘌呤；和/或(c)对应于核苷酸40的位置上的胸腺嘧啶；和/或(d)应于核苷酸44的位置上的腺嘌呤；和/或(e)对应于核苷酸53的位置上的胸腺嘧啶；和/或(f)应于核苷酸63的位置上的腺嘌呤；和/或(g)对应于核苷酸66的位置上的胸腺嘧啶；和/或(h)应于核苷酸69的位置上的腺嘌呤；和/或(i)应于核苷酸75的位置上的腺嘌呤；和/或(j)对应于核苷酸78的位置上的胸腺嘧啶；和/或(k)应于核苷酸1637的位置上的腺嘌呤；和/或(1)对应于核苷酸1649的位置上的胞嘧啶，和/或(m)对应于核苷酸1655的位置上的胸腺嘧啶，和/或(n)对应于核苷酸1682的位置上的胞嘧啶，和/或(o)对应于核苷酸1697的位置上的胞嘧啶，和/或(p)对应于核苷酸1703的位置上的鸟嘌呤，和/或(q)对应于核苷酸1715的位置上的胸腺嘧啶，和/或(r)对应于核苷酸1729的位置上的腺嘌呤，和/或(s)对应于核苷酸1733的位置上的胞嘧啶，和/或(t)对应于核苷酸1734的位置上的胞嘧啶，和/或(u)对应于核苷酸1746的位置上的腺嘌呤，和/或(v)对应于核苷酸1751的位置上的腺嘌呤。优选地，嵌合血凝素包含(a)至(v)的全部核苷酸。本专利技术还提供了具有胞外域、5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域的嵌合血凝素区段，其中胞外域来自第一流感病毒毒株并且5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，其中所述区段编码以下蛋白质：使用成对比对算法与SEQIDNO：63比对，则在对应于SEQIDNO：63的氨基酸3的位置上没有丙氨酸；和/或使用成对比对算法与SEQIDNO：63比对，则在对应于SEQIDNO：63的氨基酸4的位置上没有天冬酰胺；和/或使用成对比对算法与SEQIDNO：63比对，则在对应于SEQIDNO：63的氨基酸11的位置上没有丙氨酸；和/或使用成对比对算法与SEQIDNO：63比对，则在对应于SEQIDNO：63的氨基酸12的位置上没有亮氨酸；和/或使用成对比对算法与SEQIDNO：63比对，则在对应于SEQIDNO：63的氨基酸13的位置上没有丙氨酸；和/或使用成对比对算法与SEQIDNO：63比对，则在对应于SEQIDNO：63的氨基酸15的位置上没有丙氨酸；和/或使用成对比对算法与SEQIDNO：63比对，则在对应于SEQIDNO：63的氨基酸16的位置上没有天冬氨酸。在一些方面中，该嵌合血凝素区段可编码蛋白质，所述蛋白质具有以下的一个或多个：使用成对比对算法本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有胞外域、5’‑非编码区、3’‑非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域的嵌合流感病毒血凝素区段，其中所述胞外域来自第一流感病毒毒株并且所述5’‑非编码区、3’‑非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，所述第二流感病毒毒株不是A/Puerto Rico/8/34、A/WSN/33或B/Lee/40，其中所述第一和第二流感病毒毒株都是甲型流感病毒毒株或乙型流感病毒毒株。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.09.26 EP 13179013.1;2013.06.06 US 61/832,0911.一种具有胞外域、5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域的
嵌合流感病毒血凝素区段，其中所述胞外域来自第一流感病毒毒株并且所述5’-非编码区、
3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，
所述第二流感病毒毒株不是A/PuertoRico/8/34、A/WSN/33或B/Lee/40，其中所述第一和
第二流感病毒毒株都是甲型流感病毒毒株或乙型流感病毒毒株。
2.一种具有胞外域、5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域的
嵌合流感病毒血凝素区段，其中所述胞外域来自第一甲型流感病毒毒株，并且所述5’-非编
码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒
毒株，所述第一甲型流感病毒毒株不是H1或H5流感病毒毒株，其中所述第一和第二流感病
毒毒株都是甲型流感病毒毒株或乙型流感病毒毒株。
3.一种具有胞外域、5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域的
嵌合流感病毒血凝素区段，其中所述胞外域来自第一乙型流感病毒毒株，并且所述5’-非编
码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒
毒株，所述第二流感病毒毒株是乙型流感病毒毒株或甲型流感病毒毒株，所述甲型流感病
毒毒株不是H1毒株或H3毒株。
4.一种具有胞外域、5’-非编码区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域的
嵌合流感病毒血凝素区段，其中所述胞外域来自第一流感病毒毒株，并且所述5’-非编码
区、3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒
株，使用成对比对算法与SEQIDNO：15比对，则所述区段包含以下的一种或多种：
a)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸24的位置处的鸟嘌呤；和/或
b)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸38的位置处的腺嘌呤；和/或
c)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸40的位置处的胸腺嘧啶；和/或
d)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸44的位置处的腺嘌呤；和/或
e)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸53的位置处的胸腺嘧啶；和/或
f)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸63的位置处的腺嘌呤；和/或
g)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸66的位置处的胸腺嘧啶；和/或
h)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸69的位置处的腺嘌呤；和/或
i)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸75的位置处的腺嘌呤；和/或
j)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸78的位置处的胸腺嘧啶；和/或
k)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸1637的位置处的腺嘌呤；和/或
l)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸1649的位置处的胞嘧啶；和/或
m)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸1655的位置处的胸腺嘧啶；和/或
n)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸1682的位置处的胞嘧啶；和/或
o)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸1697的位置处的胞嘧啶；和/或
p)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸1703的位置处的鸟嘌呤，和/或
q)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸1715的位置处的胸腺嘧啶；和/或
r)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸1729的位置处的腺嘌呤；和/或
s)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸1733的位置处的胞嘧啶；和/或
t)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸1734的位置处的胞嘧啶；和/或
u)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸1746的位置处的腺嘌呤；和/或
v)在对应于SEQIDNO：15的核苷酸1751的位置处的腺嘌呤。
5.如权利要求4所述的嵌合血凝素区段，其特征在于，所述区段包含全部(a)至(v)所述
核苷酸。
6.如前述权利要求中任一项所述的嵌合血凝素区段，所述区段包含以下的一种或多
种：SEQIDNO：105的5’-NCR结构域；和/或SEQIDNO：106的SP；和/或SEQIDNO：107的TM
结构域；和/或SEQIDNO：108的CT结构域；和/或SEQIDNO：109的3’-NCR。
7.如权利要求4-6中任一项所述的嵌合血凝素区段，其特征在于，所述第一和第二流感
病毒毒株都是甲型流感病毒或乙型流感病毒。
8.如前述权利要求中任一项所述的嵌合血凝素区段，其特征在于，所述5’-非编码区、
3’-非编码区、信号肽、跨膜结构域和胞质结构域都来自第二流感病毒毒株。
9.如前述权利要求中任一项所述的嵌合血凝素区段，其特征在于，所述区段编码蛋白
质，所述蛋白质不具有比照SEQIDNO：7对应于氨基酸545处的酪氨酸。
10.一种具有胞外域、5’-非编码区、3’-非编码区、跨膜结构域和胞质结构域的嵌合流
感病毒神经氨酸酶区段，其中所述胞外域来自第一流感病毒毒株并且所述5’-非编码区、
3’-非编码区、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，所述第二
流感病毒毒株不是A/PuertoRico/8/34或A/WSN/33。
11.一种具有胞外域、5’-非编码区、3’-非编码区、跨膜结构域和胞质结构域的嵌合流
感病毒神经氨酸酶区段，其中所述胞外域来自第一流感病毒毒株并且所述5’-非编码区、
3’-非编码区、跨膜结构域和胞质结构域来自第二流感病毒毒株，所述第一和第二流感病毒
毒株都是甲型流感病毒毒株或都是乙型流感病毒毒株。
12.一种具有胞外域、5’-非编码区、3’-非编码区、跨膜结构域和胞质结构域的嵌合神
经氨酸酶区段，其中所述胞外域来自第一流感病毒毒株并且所述5’-非编码区、3’-非编码
区、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个来自第二流感病毒毒株，使用成对比对算法
与SEQIDNO：16比对，则所述区段包含：
a)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸13的位置处的腺嘌呤；和/或
b)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸35的位置处的腺嘌呤；和/或
c)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸60的位置处的腺嘌呤；和/或
d)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸63的位置处的腺嘌呤；和/或
e)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸65的位置处的腺嘌呤；和/或
f)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸67的位置处的胞嘧啶；和/或
g)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸69的位置处的腺嘌呤；和/或
h)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸75的位置处的腺嘌呤；和/或
i)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸83的位置处的胸腺嘧啶；和/或
j)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸89的位置处的鸟嘌呤；和/或
k)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸101的位置处的腺嘌呤；和/或
l)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸107的位置处的胸腺嘧啶；和/或
m)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸110的位置处的胸腺嘧啶；和/或
n)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸120的位置处的鸟嘌呤；和/或
o)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸121的位置处的胞嘧啶；和/或
p)在对应于SEQIDNO：16的核苷酸125的位置处的胸腺嘧啶；和/或
q)在对应于SEQIDNO：...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·梅森，P·苏帕菲帕特，R·戈米勒，P·道米策，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，合成基因组疫苗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH