唐古特青兰纯化黄酮在制备抗菌、抗病毒药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗菌、抗病毒药物唐古特青兰纯化黄酮。具体的讲，公开了唐古特青兰纯化黄酮的制备方法及其在制备抗菌、抗病毒药物中的应用，属于中药领域。本发明专利技术公开的唐古特青兰纯化黄酮通过10倍量的60％(v/v)乙醇回流3次，每次2h，抽滤，合并滤液，石油醚萃取除去脂溶性杂质，浓缩成浸膏，加一定量的水加热超声溶解后，再经过大孔吸附树脂的纯化步骤，使唐古特青兰纯化黄酮的抑菌效果更确切，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌均有一定的抑制作用，且唐古特青兰纯化黄酮药物浓度在5mg/ml时对单纯疱疹病毒-Ⅱ病毒有部分杀伤作用，为开发相关抗菌、抗病毒药物提供了一种新的选择，可在制备相关抗菌、抗病毒药物中应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种抗菌、抗病毒药物唐古特青兰纯化黄酮，具体涉及唐古特青兰纯化黄酮的制备方法及其在制备抗菌、抗病毒药物中的应用，属于中药领域。
技术介绍
藏药唐古特青兰为唇形科植物唐古特青兰(DracocephalumtanguticumMaxim)的干燥地上部分，多年生草本。产于西藏、青海、四川西部和甘肃西南部，是青藏高原特有植物，又称“甘青青兰”，藏语称“知羊格”，具有清肝热、胃热、干黄水、愈疮、止血的功效，主治肝热病、胃热病、黄水病、使血、疮疡不愈。地上部分含黄酮类、氨基酸、甾醇、酸性成分，并呈挥发油类反应。药理研究表明青兰苷为唐古特青兰全草中的有效成分。常用的抗菌、抗病毒药物种类较少且多为化学合成药，价格较高且长久使用会产生耐药性，因此若能将唐古特青兰开发成一种高效廉价的抗菌、抗病毒药物制剂，为更多患者特别是经济状况差的患者治疗疾病减轻痛苦、提高人们生活质量，这将十分有意义。本专利技术提供的唐古特青兰纯化黄酮通过有机溶剂的提取，石油醚萃取除去脂溶性杂质，浓缩成浸膏，加一定量的水加热超声溶解后，再经过大孔吸附树脂的纯化步骤，使唐古特青兰纯化黄酮的抑菌效果更确切，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌均有一定的抑制作用，且唐古特青兰纯化黄酮药物浓度在5mg/ml时对HSV-2病毒有部分杀伤作用，为开发相关抗菌、抗病毒药物提供了一种新的选择，可在制备相关抗菌、抗病毒药物中应用。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种抗菌、抗病毒药物唐古特青兰纯化黄酮，本专利技术的另外一个目的是提供一种唐古特青兰纯化黄酮的制备方法及其在制备抗菌、抗病毒药物中的应用。本专利技术是通过以下技术方案来实现的。唐古特青兰纯化黄酮的提取方法如下：称取唐古特青兰，10倍量的60％(v/v)乙醇回流3次，每次2h，抽滤，合并滤液，石油醚萃取除去脂溶性杂质，浓缩成浸膏，加水，加热超声溶解，过滤，所得滤液即为上样液。所述的唐古特青兰纯化黄酮的纯化方法如下：将上样液稀释至浓度为2mg/ml，上大孔树脂柱吸附，之后用洗脱剂洗脱，即得唐古特青兰纯化黄酮。其中，所述的大孔吸附树脂为D101。其中，所述的洗脱剂为70％(v/v)的乙醇。其中，洗脱时洗脱液的体积与上样液的体积相同。其中，所述唐古特青兰纯化黄酮的黄酮含量为5.26％(m/v)。本专利技术还提供上述制备的唐古特青兰纯化黄酮在制备抗菌药物中的应用。其中，所述的菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌。另外，本专利技术还提供上述制备的唐古特青兰纯化黄酮在制备抗病毒药物中的应用。其中，所述的抗病毒药物为单纯疱疹病毒-Ⅱ(HSV-2)；所述的唐古特青兰纯化黄酮的浓度为5mg/ml。本专利技术提供的唐古特青兰纯化黄酮通过有机溶剂的提取，石油醚萃取去除脂溶性杂质，浓缩成浸膏，加一定量的水加热超声溶解后，再经过大孔吸附树脂的纯化步骤，使唐古特青兰纯化黄酮的抑菌效果更确切，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌均有一定的抑制作用，而唐古特青兰纯化黄酮药物浓度在5mg/ml时对HSV-2病毒有部分杀伤作用，为开发相关抗菌、抗病毒药物提供了一种新的选择，可在制备相关抗菌、抗病毒药物中应用。有益效果1.唐古特青兰以往的用药方式多为汤药，但其中主要起抑菌作用的是黄酮类，传统用药方式影响了有效利用，其中杂质可能会影响药效作用的发挥，甚至带来毒副作用，本专利技术通过提高黄酮纯度可以减少投药量，能够制成较小剂量的剂型，方便患者服用。2.唐古特青兰通过有机溶剂的初步提取和大孔吸附树脂的纯化步骤，使唐古特青兰纯化黄酮的抑菌效果更确切，且唐古特青兰纯化黄酮药物浓度在5mg/ml时对HSV-2病毒有部分杀伤作用，为开发相关抗菌、抗病毒药物提供了一种新的选择，可在制备相关抗菌、抗病毒药物中应用。附图说明图1为大肠杆菌抑菌圈；图2为金黄色葡萄球菌抑菌圈；图3为铜绿假单胞菌抑菌圈；图4为表皮葡萄球菌抑菌圈；图5为腊状芽孢杆菌抑菌圈；图6为粪肠球菌抑菌圈；图7为病毒滴度测定结果；图8为药物对病毒所致细胞病变的抑制结果；图9为药物对病毒的直接杀伤作用。具体实施方式以下提供具体实施例以实现本专利技术所述的技术方案，但不限于这些实施例。实施例1唐古特青兰纯化黄酮的制备1.药材：唐古特青兰药材于2010年7月购于西宁市藏药材市场。2.制备方法：(1)唐古特青兰水提取物的制备：称取唐古特青兰2.5g，水煎1h，抽滤，滤液定容至50ml容量瓶中，摇匀，过滤。(2)唐古特青兰醇提取物的制备：称取唐古特青兰2.5g，以20倍量70％(v/v)乙醇回流1h，抽滤，滤液定容至50ml容量瓶中，摇匀，过滤。(3)唐古特青兰纯化黄酮的制备：依据文献与生产实际，综合考虑确定以下影响黄酮提取的因素(乙醇浓度、物料比、提取时间、提取次数)，并设计成如表的L9四因素三水平的正交试验表见表2，实验水平和因素见表1。参照表2的参数组合，称取唐古特青兰，加入乙醇，回流，抽滤，滤液定容至50ml容量瓶中，摇匀，过滤。表1正交试验因素水平表2L9四因素三水平正交试验设计表与实验结果参照表2的实验结果，由于料液比对黄酮提取量影响最不显著，出于工业生产资源节约角度考虑，将料液比设为10倍。最终确定提取条件为60％(v/v)乙醇以10倍液料比回流3次，每次2h。最终确定唐古特青兰提取的优选方法为：10倍量的60％(v/v)乙醇回流3次，每次2h，抽滤，合并滤液，石油醚萃取除脂溶性杂质，浓缩成浸膏，加一定量的水加热超声溶解，过滤，所得滤液即为上样液。纯化过程：将上样液稀释至浓度为2mg/ml，上大孔树脂柱D101吸附，之后以70％(v/v)的乙醇为洗脱剂(洗脱液的体积与上样液的体积相同)，洗脱，即得唐古特青兰纯化黄酮。实施例2唐古特青兰纯化黄酮的抑菌效果1.材料(1)培养基营养肉汤培养基(1L)：蛋白胨(10g)牛肉粉(3g)NaCl(5g)pH7.1～7.3营养琼脂培养基(1L)：蛋白胨(10g)牛肉粉(3g)NaCl(5g)琼脂(15g)pH7.1～7.3M-H琼脂培养基(1L)：牛肉粉(3g)可溶性淀粉(1.5g)酪蛋白水解物(17.5g)琼脂(15g)pH7.2～7.4(2)药物唐古特青兰水提物、唐古特青兰醇提物、唐古特青兰纯化黄酮相当于原植物400mg/ml；左氧氟沙星(山东鲁抗医药集团赛特有限责任公司，批号：130103)50μg/ml；金银花颗粒(哈药集团世一堂制药，批号：1209514204)200mg/ml。(3)菌株(1)金黄色葡萄球菌ATCC25923，购自美国模式培养物集存库AmericanTypeCultureCollection(ATCC)。(2)铜绿假单胞菌，购自美国模式培养物集存库AmericanTypeCultureCollection(ATCC)。(3)表皮葡萄球菌，购自美国模式培养物集存库AmericanTypeCultureCollection(ATCC)。(4)粪肠球菌，购自美国模式培养物集存库AmericanTypeCultureCollection(ATCC)。(5)腊状芽孢杆菌，购自美国模式培养物集存库AmericanTypeCultureCollection(ATCC)。(6)大肠杆菌CMCC441本文档来自技高网...

【技术保护点】
唐古特青兰纯化黄酮，其特征在于，所述唐古特青兰纯化黄酮的制备方法如下：称取唐古特青兰，10倍量的60％(v/v)乙醇回流3次，每次2h，抽滤，合并滤液，石油醚萃取除去脂溶性杂质，浓缩成浸膏，加水,加热超声溶解，过滤，所得滤液即为上样液；将上样液稀释至浓度为2mg/ml，上大孔树脂柱吸附，之后用洗脱剂洗脱，即得唐古特青兰纯化黄酮。

【技术特征摘要】
1.唐古特青兰纯化黄酮，其特征在于，所述唐古特青兰纯化黄酮的制备方法如下：称取唐古特青兰，10倍量的60％(v/v)乙醇回流3次，每次2h，抽滤，合并滤液，石油醚萃取除去脂溶性杂质，浓缩成浸膏，加水,加热超声溶解，过滤，所得滤液即为上样液；将上样液稀释至浓度为2mg/ml，上大孔树脂柱吸附，之后用洗脱剂洗脱，即得唐古特青兰纯化黄酮。2.根据权利要求1所述的唐古特青兰纯化黄酮，其特征在于，所述的大孔吸附树脂为D101。3.根据权利要求1所述的唐古特青兰纯化黄酮，其特征在于，所述的洗脱剂为70％(v/v)的乙醇。4.根据权利要求1所述的唐古特青兰纯化黄酮，其特征在于，洗脱时洗脱液的体积与上样液的体积相同。5.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：兰州迈德生医药科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：甘肃;62